ABO亚型鉴定PPT课件

.,1,2012.03,ABO亚型,武汉亚洲心脏病医院检验中心,.,2,A和B抗原是红细胞膜表面糖蛋白、糖脂分子的糖类决定簇。A抗原末端糖基:N-乙酰氨基半乳糖B抗原末端糖基:D-半乳糖。,ABO抗原不是ABO基因的直接产物,ABO血型分子生物学基础,.,3,ABO亚型理论,.,4,A亚型分类依据,红细胞上的A抗原依次减少，H抗原的活性则相对增强幻灯片3,1、红细胞被抗A及抗A1凝集的程度2、红细胞被抗AB凝集的程度3、红细胞的H反应性程度4、血清内有无抗A1抗体5、分泌型人唾液内具有的A及H物质,抗-A1抗-AB抗-HA2C,抗-A、抗-B、AC、BC、OC,亚型试剂,常规试剂,.,5,.,6,A1和A2,占A型的99.99%血清学区别：依赖抗-A1,1、如无抗-A1，A1和A2不需加以区分。2、产生抗-A1的频率，A2型为1%-8%；A2B型为22%-35%。3、抗-A1在37反应才具有临床意义。,.,7,A3和Aend,两者均呈现mf外观,1、A3凝集细胞占60%；Aend凝集细胞占10%，Aend需多次离心才能被发现。2、出现mf时，要进行临床调查，了解患者是否是为白血病或骨髓移植，如疑是疾病原因造成，应慎报亚型。,.,8,Ax、Ael和Am,Ay极罕见，表现型与Am很相似,.,9,各种弱A亚型的鉴别要领,.,10,B亚型,B3、Bx、Bel、Bend、Bm血清学特点同相应A亚型不同之处，鉴定时不需抗-A1试剂，及A2细胞,.,11,AB亚型,A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、ABm、ABel、ABend同A亚型和B亚型的血清学特点不同之处：不需抗AB血清鉴定；与抗H的凝集强度弱，呈w/0，同A1B,.,12,cisAB,cisAB是一种罕见的ABO亚型，人群中的发生率非常低，大约在170000到580000之间。最早出现起源于亲代与子代的ABO血型是遗传的矛盾，按照ABO三复等位基因学说和孟德尔遗传定律，AB和O型的双亲不可能生下AB型或O型的子代。分子机理：在A等位基因的基础上发生了碱基错义突变，变异的A基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现A抗原的特异性外，还表现少量B抗原的特异性。血清学特点：A抗原接近正常或弱略于正常；B抗原较正常弱很多；,.,13,B（A）,同cisAB的遗传方式相似，也是一种罕见的ABO亚型，cisAB是在1964年发现，B(A)是在1985年发现；分子机理：被认为是遗传学上的B型，在B基因基础上发生错义突变，由于单碱基突变，变异的B基因具有编码双功能活性酶的能力，血清学除了表现为B抗原特异性外，还表现为少量A抗原特异性。血清学特点：较弱的A抗原和接近正常的B抗原特异性，血清中有较强的抗-A。,.,14,cisAB、B(A),正常AB型，A和B等位基因分别位于9号同源染色体的ABO位点上，分别从父方或母方遗传得到。极少数人类个体的一条9号染色体上存在一个cisAB或B（A）基因，它编码的酶具有双功能活性，可以同时催化A抗原和B抗原的合成。cisAB的A抗原接近正常，B抗原较正常弱很多；B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。cisAB或B（A）血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。血清学方法判断为AB亚型，需分子生物学验证cisAB或B（A）是从一个亲本遗传而来的，因此基因型是cisAB/O或B（A）/O，表现型为AB型。带有cisAB或B(A)等位基因的个体，若与O型血的人（基因型O/O）生育，子女的血型可能表现为AB型或O型，而不像通常AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。,.,15,孟买型和类孟买型,孟买型和类孟买型在ABO血型系统中为罕见的稀有血型，常因交叉配血不合而被发现。为红细胞上H抗原缺乏而使ABO血型物质不能正常合成的一类血型。遗传特点：与A、B基因相对独立的H-h系统是hh纯合子，不能合成表达A或B基因的前提物质-H物质,.,16,孟买型和类孟买型,血清学特点,血清学方法繁琐，结合正反定型、抗体筛选、吸收放散试验、唾液中的血型物质测定以及家系调查来综合分析。分子生物学方法进行ABO基因定型简便、快速、可靠，成为输血医学的研究热点。,.,17,ABO正反定型不一致,.,18,ABO正反定型不合原因分析,同种抗体A亚型,缗钱状凝集冷自身抗体,AB型的亚型,同种抗体A型抗-H,O型A亚型,同种抗体孟买型,同种抗体,.,19,ABO正反定型不一致,红细胞三洗6管：-A、-B、AC、BC、OC、自身C正常：2管强凝集，其他4管阴性（正定型4+；反定型2+）异常：1、出现其他的凝集（不规则抗体)2、不到2管强凝集（ABO亚型、抗原、抗体减弱）,不规则抗体,亚型,6管反应结果,.,20,ABO亚型鉴定流程,1、人-A、人-B2、-H(新鲜BC、OC对照）3、-AB(单独A亚型、B亚型）4、-A1(A亚型的鉴定)5、排除其他不规则抗体,H抗原强弱：OA亚/B亚BAB亚型A1A1B,.,21,ABO亚型案例分析,.,22,案例1,Step1,正定型多次离心4反应吸收放散,反定型多次离心4反应加大血清量吸收放散,增强抗原抗体反应,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、B抗原减弱，血清中存在正常抗A,同时还有与BC反应的弱不规则抗体3、怀疑B亚型4、进一步实验：,.,23,Step2,Step3关键步骤,考虑到人源抗血清效价比较低的缘故，并未得到预期的结果，但4显示有B抗原存在，与抗-AB也未见增强,H抗原：OA亚/B亚BAB亚型A1A1B,.,24,根据以上的反应格局，高度怀疑Bx,鉴于Bx亚型的血清学特征，即为血清中存在能凝集常规BC的抗体，为减少偶然性，选择健康B型2份，O型2份（对照），分别与待检血清反应,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step4,.,25,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的B抗原，血清中有强的抗A和弱的不规则抗B,红细胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Bx亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,结论,.,26,案例2,Step1,分析：1、强凝集只有1管，弱凝集有2管。2、A抗原减弱，血清中有正常抗B，同时还存在与A1C反应的比较弱的不规则抗体3、怀疑A亚型4、进一步实验：抗-A1、抗-AB、抗-H，A2细胞,.,27,Step2,与抗-A1不反应，为A亚型；同时与抗-AB凝集增强，进一步证明为A亚型,血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,.,28,Step4,H抗原增强，凝集强度与O细胞相当,根据以上的反应格局，高度怀疑Ax。,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1,Step5,.,29,结论,根据以上结果，该病例红细胞上有弱的A抗原，血清中有强的抗A和弱的不规则抗A1,红细胞与抗H呈强阳性凝集，根据血清学格局，初步判断为Ax亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,.,30,案例3,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原减弱，B抗原正常，血清中存与AC反应的弱不规则抗体3、怀疑A亚型B4、进一步实验,.,31,Step2,与抗-A1不反应，为A亚型,血清与A1C反应，与A2C不反应，证明存在不规则抗-A1抗体,Step3,.,32,Step4,H抗原未见增强，因为有正常的B基因,根据以上的反应格局，高度怀疑AxB,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗A1,Step5,.,33,案例4,Step1,AxB?B(A)?,.,34,Step2,Step3PS+A2C,人-A并未得到预期的结果。抗-A1不反应，初步判断为A亚B。仍然不能区分是AXB还是B(A),排除AXB，AXB与A2细胞不反应，此点是鉴别B(A)与AXB最有价值的依据之一,.,35,Step4,AXB与抗-H呈弱凝集，而B(A)与抗-H呈强凝集，这也是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根据以上血清学实验，初步定为B(A)亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,B(A)亚型的特点：1、红细胞上A抗原减弱，B抗原基本正常2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当3、血清中的抗-A与A1、A2细胞均有反应B(A)与AXB的区别：1、B(A)的H抗原增强，AXB不增强2、B(A)的血清与A1、A2细胞均反应；AXB只与A1细胞反应。,.,36,案例5,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体3、怀疑AB亚型4、进一步实验：,.,37,Step2,Step3,人源抗血清显示有正常A抗原，有比较弱的B抗原。此处增加抗-A1的目的用以区分CisAB,H抗原未见增强，CisAB呈4+,两者可区分,.,38,根据以上的反应格局，怀疑ABx,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step4,.,39,案例6,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集2管。2、A抗原正常，B抗原减弱，血清中存与BC反应的弱不规则抗体3、怀疑AB亚型ABx?CisAB?4、进一步实验：,.,40,Step2,与抗-A1不反应，说明A抗原为非正常A1型。初步排除ABX,.,41,Step3,ABx与抗-H呈弱凝集，而CisAB与抗-H呈强凝集，这是区分两者的一个非常重要的标记,结论：根据以上血清学实验，初步定为CisAB亚型，须经分子生物学实验进一步确认。,cisAB亚型的特点：1、红细胞上A抗原基本正常，B抗原弱于正常B抗原2、H抗原增强，与O细胞H抗原相当3、血清中存在弱的抗-BcisAB与ABx的区别：1、cisAB的H抗原增强，ABx不增强2、cisAB的红细胞与抗-A1不反应；ABx与抗-A1反应,.,42,案例7,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集1管。2、O型：抗-B减弱？3、B亚型：B抗原未检出，血清中有不规则抗B?4、进一步实验：,.,43,Step2,Step3,人源血清和抗-AB均显示不反应。,H抗原增强，B亚型和O型仍然无法区分。由于该标本为健康献血员，无其他疾病史，可排除抗体减弱的可能。进一步实验，证明是否存在B抗原。,.,44,Step4吸收放散试验,PCOC（对照）,41h,离心吸出上清,4NS洗涤6次,56热放散10min,立即离心,吸出上清液（放散液）,再次离心,放散液中加入BC，4过夜,人-B,离心看结果,证明有B抗原存在,.,45,根据以上的反应格局，怀疑Bel,排除其他不规则抗体，进一步证实为不规则抗B,Step5,.,46,结论,根据以上血清学试验，初步鉴定为Bel型。其特点：红细胞上仅有很少量的B抗原，常规的血清学方法难以检测出，需通过吸收放散试验才能证明血清中通常存在不规则抗B需与抗B减弱的O型相区别,.,47,案例8,Step1,分析：1、强凝集1管，弱凝集呈mf。2、mf：疾病原因、异型输血、嵌合体、骨髓移植、亚型3、怀疑A3B4、进一步实验：,鉴定血清中是否存在不规则抗-A1，排除,.,48,Step2,Step3,人-A也显示为mf,H抗原未见增强,.,49,结论,根据以上血清学试验，可初步鉴定为A3B，进一步进行分子生物学试验确定特点：红细胞与抗-A、抗-AB反应，表现为mf，大约有60%凝集，周围有约40%未凝集红细胞血型鉴定当出现mf外观时，对于白血病患者不轻易报亚型,.,50,我科案例,Step1,AxB?B(A)?,长春博得,南京欣