中药指纹图谱广州中医药大学课件魏刚.ppt

中药指纹图谱,魏刚研究员,第一节概论,定义中药材指纹图谱系指中药材经适当处理后，采用一定的分析手段，得到的能够标示该药材特性的共有峰的图谱基本属性整体性模糊性,第二节中药指纹图谱测定方法,研究对象的不同，指纹图谱研究的方法与技术也不同，并都随着现代科技技术的发展而发展。中药指纹图谱研究所采用的方法主要有色谱法、光谱法和生物学方法。,2.1色谱法,2.1.1薄层色谱法（TLC）薄层色谱法为传统的定性、定量分析方法优点：操作简单、分析速度快、适用范围广缺点：重现性、精密度差。可作为中药指纹图谱研究的借鉴与补充,2.1色谱法,2.1.2气相色谱法适用于含挥发性成分中药指纹图谱的研究和运用特点：分离效能高、分析速度快、重现性好分辨率高等等，不足：分析范围局限于低沸点成分为中药指纹图谱研究的主要方法之一,2.1色谱法,2.1.3高效液相色谱中药样品中含有的成分绝大多数可在高效液相色谱仪上进行分析检测，方法成熟，中药指纹图谱研究应优先考虑高效液相色谱法。具有分离效能高、选择性高、检测灵敏高、分析速度快、应用范围广等特点。,2.1色谱法,2.1.4其他高速逆流色谱（HSCCC）高效毛细管电泳（HPCE）超临界流体色谱（SFC）等等,2.2光谱法,紫外-可见光谱法,核磁共振波普法,红外光谱法,质谱法,X-射线衍射法,2.2光谱法,2.2.1紫外-可见光谱法和红外光谱法这两种方法能够给出药效物质基础的结构信息，但所给出的信息是所有化学物质结构结构信息的加和。,2.2光谱法,2.2.2核磁共振法及X射线衍射法这两种方法能给出药效物质基础的结构信息，部分信息也可能与特定化学成分直接关联。,2.2光谱法,2.2.3质谱法不同中药由于含有不同化学成分的种类和比例不同，所得质谱显示的分子离子峰及进一步裂解的碎片离子峰（m/z）亦不一致，故质谱同样具有指纹性较强的特征。,2.3生物学方法,2.3.1中药中药DNA指纹图谱2.3.2基因组学指纹图谱2.3.3中药蛋白组学指纹图谱2.4联用技术,第三节中药指纹图谱研究程序及技术要求,技术要求专属性：能够表达品种特征的性质重现性：不同实验室/操作者，结果有较高的相似性可操作性：方法/条件易于推广和便于操作主要程序样品收集、方法建立、数据分析、样品评价和方法检验等,固定品种来源、产地、采收期和加工炮制的中药,10批次以上中药样品,供试品溶液,不同品种来源、产地、采收期或加工炮制的中药,中药未知检品,评价标准,药效学实验,中药指纹图谱,图谱信息,性代表,性一均,理处预,理处预,价评质品析分试测谱图,验检法方,信息处理计算机,图谱评价,件条试测择选,察考及立建法方,性关相,确定参数图谱分析,中药指纹图谱的构建程序示意图,3.1样品收集,对象：原药材、饮片及提取物、半成品及各类制剂和相关产品样品具有真实性代表性量：不少于10批,3.2供试品溶液的制备,根据中药中所含成分的理化性质和检查方法的要求，选择适当的制备方法，确保该中药的主要化学成分或有效成分在指纹图谱中得以体现。,3.2供试品溶液的制备,原药材、饮片或提取物供试品溶液的制备半成品（中间体）供试品溶液的制备各类制剂和相关产品供试品溶液的制备,3.3对照品（参照物）溶液的制备,（1）对照品（参照物）的选择选择合适的对照品（参照物），以确定图谱中参照峰的位置和丰度（2）对照品（参照物）溶液的制备制成标示浓度（g/ml或mg/ml）的溶液,3.4指纹图谱试验研究,通过比较试验，从中优选相对简单易行的方法和条件，获取足以代表品种特征的指纹图谱，以满足指纹图谱的专属性、重现性和普遍适用性的要求，并须通过方法学验证,3.5方法学验证,3.5.1稳定性试验考察供试品一定时间内的稳定性同一供试品，间隔一定时间进样N5，RSD3%,3.5方法学验证,3.5.2精密度试验主要考察仪器的精密度同一供试品，连续进样N5，RSD3%,3.5方法学验证,3.5.2重复性试验主要考察实验方法的重复性同一批号的供试品N5，RSD3%,3.6指纹图谱的建立和辨认,根据已确定的试验方法和条件，对供试样品进行测定，将获得的指纹图谱逐一研究比教较，找出药材色谱中具有指纹意义的各个谱峰，编号，再将药材、半成品和成品之间的图谱进行比较，便于清楚地考察相互之间的相关性。,3.6指纹图谱的建立和