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酶活性测定方法及酶学分析类型(精),生物化学检验,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),酶活性测定方法及酶学分析类型,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),酶活性测定方法及酶学分析类型,酶学分析是20世纪70年代发展起来的一类检测技术，包括酶活性测定和底物浓度测定两大类型。酶活性的测定方法包括终点法和连续监测法。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),一、酶活性的测定方法,按照对酶促反应时间的选择不同,连续监测法,固定时间法,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),（一）固定时间法,分类：,终点法：在反应进行到预定时间后要终止反应。两点法：该方法反应时间的预定是从t1t2。,定义：测定酶促反应开始后一段时间内底物的减少量或产物的增加量。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),特点：优点是简单。缺点是难以确定反应时间段酶促反应是否处于线性期。,注意：固定时间法时间段的预定不宜太长，一般以3060分钟为宜。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),（二）连续监测法,2、原理：,1、定义：测定底物或产物随时间的变化量，又称为速率法。,该方法每隔一定时间（10s60s）测定一次底物或产物的变化量，连续测定多点，然后将测定结果对时间作图，绘制反应速度曲线。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),3、特点：在方法设计上，选择紫外吸收法或色原显色法,缺点：要求高，要求能够精确地控制温度、pH值和底物浓度等反应条件，要求仪器具有恒温装置及自动监测功能，半自动及自动生化分析仪都能达到这些要求。,优点:能动态观测酶促反应进程，可以明显地找到反应的线性期，结果准确可靠，标本和试剂用量少，可在较短时间内完成测定。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),4、连续监测法的种类,1.直接连续监测法要求底物或产物能够直接测定2.间接连续监测法间接法又分为一步间接法和酶偶联法。酶偶联法指在原来的反应体系中再加入一些酶试剂，使加入的酶促反应和被测酶的酶促反应偶联起来。最后的反应产物可直接监测，进而推测出第一个酶的活性浓度。,酶活性测定方法及酶学分析类型(精),5、酶活性浓度的计算,摩尔消光系数()的定义为在特定条件下，光径为1.00cm时，通过所含吸光物质的浓度为1.00mol/L时的吸光度。如用连续监测法测定在线性范围内每分钟吸光度的变化(A/min)，以U/L表示酶活性浓度时，则按下式进行计算：,式中：V反应体系体积(ml)-摩尔消光系数(cm2mol-1)v样本量(ml)L比色杯光径(cm)A吸光度变化106为换算系数，将mol换算成m
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