白细胞分类计数.ppt

1,2020/5/7,实验2血涂片制作、染色白细胞分类计数,2020/5/7,2,一、白细胞分类计数,白细胞分类计数是将血液制备成涂片，瑞氏染色后显微镜下根据白细胞的形态特征进行分类计数。通常分类100个白细胞，计算得出各种白细胞所占百分比。,2020/5/7,3,染色原理：瑞氏染料溶于甲醇，离解为带正电的碱性美兰（M+）和带负电的酸性伊红（E-）离子。细胞的染色既有物理的吸附作用，又有化学的亲和作用。各种细胞成分的化学性质不同，对染料的亲和力也不一样，故可呈不同的着色特点。,2020/5/7,4,血红蛋白、嗜酸性颗粒为碱性物质，故与酸性染料伊红结合而染成红色，呈嗜酸性。细胞核的核蛋白与原、幼细胞的胞浆为酸性物质，故与碱性染料美兰和天青结合，染成深蓝色或深紫红色，呈嗜碱性。中性颗粒与美兰和伊红同时结合而染为淡紫红色，呈嗜中性。,2020/5/7,5,器材光学显微镜推片，载玻片试剂Wright染液Wright1.0g甲醇600ml磷酸盐缓冲液（PH6.46.8）香柏油标本来源EDTA-K2抗凝全血,2020/5/7,6,操作,推片：血膜厚薄适中，边缘整齐，外观呈舌形，头、体、尾分明，两边留有一定空隙。干燥标记,1.制备血涂片,2020/5/7,7,血涂片制作,2020/5/7,8,2染色准备：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。加染液：在涂片上滴加瑞氏染液510滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置0.51min。加缓冲液：滴加缓冲液510滴，与上述染液充分混匀。染色：染色510min.冲洗：不要先倒掉染液，平持血涂片用流水缓缓冲洗干净。干燥：直立血涂片，使其自然干燥。,2020/5/7,9,3白细胞分类：先用低倍镜选择厚薄适宜，染色良好，细胞分布均匀的体尾交界处，滴加香柏油一滴，油镜下分类计数。分类时要有秩序的连续进行，避免主观选择视野。通常分类计数100个白细胞，计算并报告各种白细胞所占比例。,低倍镜下所见,2020/5/7,10,各类成熟白细胞的形态学：,中性粒细胞（Ne）：圆形，直径1013m，胞浆染淡桔红色，核形可呈杆状核或2至5叶不等，以3叶多见，染成深紫红色，质地粗糙，胞浆中有许多细小均匀紫红色颗粒。,2020/5/7,11,嗜酸性粒细胞（Eo）：较中性粒细胞稍大，胞核多为两叶，呈眼镜、八字形，核染色质粗糙染深紫红色，胞浆内充满粗大均匀的嗜酸性颗粒，瑞氏染色时呈桔红色，有折光性。,2020/5/7,12,嗜碱性粒细胞（Ba）：胞浆中含有粗大、大小不均的兰黑色嗜碱性颗粒，颗粒有时会分布在细胞核上。于光学显微镜下常见胞浆中有小空泡，乃因嗜碱性颗粒易溶于水或因功能活动而脱颗粒所致；核呈淡紫红色常看不清，呈杆状或分叶状。,2020/5/7,13,淋巴细胞（Ly）：胞体呈圆形，直径介于615m之间。小淋巴细胞直径69m，核大呈深紫色致密而浓染，质地粗块状，胞浆量极少；大淋巴细胞胞浆量较多，呈透明淡蓝色，可见少量深紫红色颗粒，胞核圆或椭圆，常偏向细胞一侧，染色较深。,2020/5/7,14,单核细胞（Mo）：在瑞氏染色涂片上为1220m，胞体圆形、椭圆形或不规则形；核形多种多样，最重要的特点是染色质较细致疏松呈丝网状或条缕状，胞浆较多着色较淡呈淡灰蓝色，胞浆含大量细小尘土样颗粒。,2020/5/7,15,正常成人外周血白细胞分类参考值：Ne0.50.7（50%70%）Eo0.0050.05（0.5%5%）Ba00.01（0%1%）Ly0.20.4（20%40%）Mo0.030.08（3%8%）,参考值,2020/5/7,16,结果记录方式：Ne正一Eo正Ly正Mo正Ba正,外周血白细胞分类结果记录方式及要求,分类要求：1、（3.015.0）109/L，分100个WBC15.0109/L以上，分200个WBC低于3.0109/L，选2张玻片分50100WBC2、有核红细胞应矫正，分类100WBC时，有核红N不计数在内，矫正=WBC100（100+N）,2020/5/7,17,1.血涂片制备要厚薄适宜、均匀、头体尾分明，无溶血、无空洞。2.很多因素影响涂片时血膜的厚度。血滴大、血粘度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。3.染色时间长短与染液性能、室温及细胞多少有关4.加Wright染液或缓冲液后，切不可干涸5.以流水冲去染液，以免留有残渣。6.按一定顺序，有秩序地连续进行，避免选择视野。,注意事项,2020/5/7,18,7.分类计数时，应同时报告RBC和WBC的形态是否有异常，有时还应观察血小板的分布情况。8.染色过深可用甲醇或酒精适当褪色9.染色时应注意保护血膜尾部细胞,2020/5/7,19,中性粒细胞,嗜酸性粒细胞,淋巴细胞,嗜碱性粒细胞（右）,单核细胞,血小板,2020/5/7,20,染色效果评价,2020/5/7,21,实验步骤,推片和标记：血膜干透后，用蜡笔在两端划线，以防止染色时染液外溢。将血涂片放染色架上。加染液：在涂片上滴加瑞氏染液510滴，以染液覆盖整个血膜为度，稍静置0.51min。再滴加缓冲液510滴，与上述染液充分混匀。染色：染色