2013届高三生物专题复习 微生物的培养与应用课件

第2讲微生物的培养与应用,3设置对照为了证实培养基是否被杂菌污染，设置的对照组应是：将不接种微生物的培养基置于恒温箱中培养。4分离菌种的鉴定(1)方法：通过检测培养基pH的变化来判断。(2)原理：在细菌分解尿素的化学反应中，细菌分泌的脲酶将尿素分解成了氨，氨使培养基中碱性增高，pH升高。,1纤维素酶是一种酶()【提示】纤维素酶是一种复合酶，至少包括C1酶、Cx酶和葡萄糖苷酶。2筛选纤维素分解菌可采用刚果红染色法，刚果红染色后的培养基上透明圈越大，说明纤维素分解菌越多()3分离纤维素分解菌的流程是：土壤取样选择培养涂布到鉴别培养基上培养挑选产生透明圈的菌落()【提示】涂布前应梯度稀释。,说明：(1)加入培养基中的凝固剂(如琼脂)，一般不能被微生物利用，只起到凝固作用。(2)选择培养基一般只生长具有特定特点的微生物，鉴别培养基可以存在其他微生物，而且能鉴别特定的微生物。2无菌技术(1)获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵。无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下几个方面：对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在酒精灯火焰附近进行。实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触。,说明：酒精消毒时，体积分数为70%的酒精杀菌效果最好。原因是浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。,1.平板划线法和稀释涂布平板法(1)平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧的目的如下表：,灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。(2)稀释涂布平板稀释操作时：每支试管及其中的9mL水、移液管均需灭菌；操作时，试管口和移液管应在离火焰12cm处。涂布平板时：a涂布器末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中，取出时，要让多余酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃。b不要将过热的涂布器放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。c酒精灯与培养皿距离要合适，移液管头不要接触任何物体。,2菌株筛选原理的比较,3.统计菌落数目(1)理论依据：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数。(2)计算方法：每克样品中的菌株数(CV)M。其中，C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数；V代表涂布平板时所用稀释液的体积(mL)；M代表稀释倍数。,(3)统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。(4)为使结果接近真实值，要设置重复组，取其平均值。可将同一稀释度的样品接种到三个或三个以上的平板上。经涂布、培养计算出菌落平均数。说明：(1)显微镜直接计数法原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。(2)牛肉膏蛋白胨培养基和选择培养基应各有一个空白对照，即不涂布菌液，目的是验证培养基中是否含杂菌。(3)样品稀释度将直接影响平板上生长的菌落数。,考向微生物的实验培养与分离,1微生物的培养，消毒灭菌，利用选择培养基分离微生物，微生物的计数都是较为主要的命题点。2011年新课标全国高考T39、山东高考T34,2009年宁夏高考T40、安徽高考T6都是考查的本考点的内容。22013年高考中微生物的实验室培养与分离的相关考点仍是命题的主要角度。,(2011新课标全国高考)有些细菌可分解原油，从而消除由原油泄漏造成的土壤污染。某同学欲从受原油污染的土壤中筛选出能高效降解原油的菌株。回答问题：(1)在筛选过程中，应将土壤样品稀释液接种于以_为唯一碳源的固体培养基上，从功能上讲，该培养基属于_培养基。(2)纯化菌种时，为了得到单菌落，常采用的接种方法有两种，即_和_。(3)为了筛选出高效菌株，可比较单菌落周围分解圈的大小，分解圈大说明该菌株的降解能力_。(4)通常情况下，在微生物培养过程中，实验室常用的灭菌方法有灼烧灭菌、_和_。无菌技术要求实验操作应在酒精灯_附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。,【解析】(1)要获得分解原油的细菌，只有在以原油为唯一碳源的培养基中，这种细菌可以大量繁殖，而其他细菌不能生存，此种培养基属于选择培养基。(2)纯化菌种常用平板划线法和稀释涂布平板法。(3)在以原油为唯一碳源的培养基上，在菌落周围的原油被分解而形成分解圈，分解圈越大，说明该菌株降解能力越强。(4)实验室灭菌有灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌，实验操作要在酒精灯火焰附近的无菌区进行。【答案】(1)原油选择(2)平板划线法稀释涂布平板法(3)强(4)干热灭菌高压蒸汽灭菌火焰,1(2009安徽高考)下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1mL，分别涂布于各组平板上C将实验组和对照组平板倒置，37恒温培养2448小时D确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数【解析】确定对照组无菌后，为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300的平板进行计数，D错；A是培养基的灭菌方法，B设置了一系列对照实验，C是细菌的培养方法，A、B、C三个选项均是正确的。【答案】D,2(2012广州模拟)某化工厂的污水池中含有一种有害的难以降解的有机化合物A。研究人员仅用化合物A、磷酸盐、镁盐以及微量元素和水配制的培养基，成功筛选到能高效降解化合物A的细菌(目的菌)。实验的主要步骤如下图所示。下列分析不正确的是(),A培养基中加入化合物A的目的是筛选“目的菌”B“目的菌”生长所需的氮源和碳源都来自化合物AC“目的菌”的代谢类型是异养需氧型D该培养基可直接进行植物组织培养【解析】植物组织培养的培养基为固体培养基，并且培养基中加入植物激素(生长素和细胞分裂素)。【答案】D,3(2011山东高考)研究发现柚皮精油和乳酸菌素(小分子蛋白质)均有抑菌作用，两者的提取及应用如图所示。,(1)柚皮易焦糊，宜采用_法提取柚皮精油，该过程得到的糊状液体可通过_除去其中的固体杂质。(2)筛选乳酸菌A时可选用平板划线法或_接种。对新配制的培养基灭菌时所用的设备是_。实验前需对超净工作台进行_处理。(3)培养基中的尿素可为乳酸菌A生长提供_。电泳法纯化乳酸菌素时，若分离带电荷相同的蛋白质，则其分子量越大，电泳速度_。(4)抑菌实验时，在长满致病菌的平板上，会出现以抑菌物质为中心的透明圈。可通过测定透明圈的_来比较柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果。,【解析】柚皮精油宜采用压榨法进行提取，要除去其中的杂质可采用过滤法。培养基中的尿素可为乳酸菌提供氮源。电泳法分离蛋白质时，分子量越大，电泳速度越慢，反之则越快。培养基菌落透明圈直径越大，说明柚皮精油和乳酸菌素的抑菌效果越好。【答案】(1)压榨过滤(2)稀释涂布平板法(或：稀释混合平板法)高压蒸汽灭菌锅消毒(3)氮源越慢(4)直径(或：大小),4(2011杭州模拟)从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样富集培养纯种分离性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从适合的环境采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从_采集，培养厌氧菌的菌样应从_采集。(2)富集培养指创设仅适应于该微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生物在群落中的数量大大增加，从而达到从自然界中分离到所需的特定微生物的培养方法。对噬盐菌富集培养的培养基应是_的选择培养基；对耐高温淀粉酶的微生物富集培养应选择以_为唯一碳源的选择培养基，并在_条件下培养。(3)实验室最常用的灭菌方法是利用高温处理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理