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酶分离纯化中的注意和酶活、酶比活力、回收率测定,组员：彭少杰、王大亨、方言康、姜兰PPT制作人：姜兰演讲者：方言康,分离纯化注意事项,测定内容,酶活力,酶比活力,酶活回收率,比例表,在酶分离纯化过程中，一个非常重要的问题是保护酶的活性，不使酶在纯化的过程中失活，因此酶提取纯化应注意以下问题：,1）pH值2）温度3）防止氧化4）避免重金属污染5）蛋白酶的污染6）介质的极性和离子强度,选择酶最稳定的pH值，确定合适的缓冲容量的缓冲溶液,一般来说0时酶比较稳定，一般在04时操作；但有例外，如丙酮酸羧化酶，在0时不稳定，而在260时稳定,多含SH，可加入-巯基乙醇、半胱氨酸、谷胱甘肽、二硫苏糖醇等进行保护,主要注意溶液的配制，亦可加入EDTA络合去除,加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂,加入蛋白酶抑制剂如PMSF（苯甲基磺酰氟）、DFP（二异丙基氟磷酸）或胰蛋白酶抑制剂,酶活力（enzymeactivity）,也称为酶活性，是指酶催化一定化学反应的能力。酶活力的大小可用在一定条件下，酶催化某一化学反应的速度来表示，酶催化反应速度愈大，酶活力愈高，反之活力愈低。,But,酶的定量并非对其蛋白质进行定量，而是对它的催化能力进行定量。,So,酶的定量就是测定酶的活力，也即测定酶促反应的速度。,如何测定酶活力？,以产物浓度对反应时间作图，可得到酶促反应速度曲线,产物浓度,时间,为什么初速度的测定是关键？,可见，反应速度只在最初一段时间内保持恒定，随着时间的延长，反应速度逐渐下降,原因底物浓度的降低、产物的增加造成的逆反应的加快；产物的抑制作用；酶本身逐渐失活,酶的比活力,指每毫克酶蛋白所含的酶活力单位数,比活力是酶制剂纯度的常用指标比活力越大，表示酶越纯,回收率,产率(回收率)=每次总活力/第一次总活力1
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