多重耐药耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的四环素耐药基因的检测闫国超，张征(河北医科大学第一医院，)【摘要】 目的：了解耐甲氧西林金黄色葡萄球菌四环素耐药基因的检出情况。方法：收集2007年1月2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的MRSA 45株，采用聚合酶链式反应进行四环素耐药基因检测。 结果：45株MRSA中有26株检出四环素耐药基因，检出率为57.8。 结论：四环素耐药基因检出率较高，是MRSA对四环素类抗菌药物耐药的重要机制。【关键词】耐甲氧西林金黄色葡萄球菌；MRSA；四环素耐药基因；tetM基因Research on the tetracycline drug-resistant gene of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus YAN Guo-chao, ZHANG Zheng(1. The Frist Hospital of Heibei Medical University，Shijiazhuang )【ABSTRACT】Objective: To learn the tetracycline drug-resistant gene of Methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA). Methods: 45 strains of MRSA were clinically isolated from the patients in The First Hospital of HeBei Medical University from January 2007 to June 2008. The tetracycline drug-resistant gene were detected by polymerase chain reaction(PCR) methods. Results: Among 45 strains of MRSA, the rate of positive of the drug resistant genes tetM were 57.8（26/45）. Conclusion: The isolating rates of drug-resistant genes such as tetM in Multiple drug-resistance MRSA were higher than. It showed that drug-resistant genes are important mechanism in which MRSA showed drug resistance of the tetracycline.【Key words】Methicillin-resistant Staphylococcus aureus; MRSA; the tetracycline drug-resistant gene；tetM gene中图分类号：R378.1+1 文献标志码：A 基金项目河北省科学技术研究与发展指导计划（）作者简介：闫国超，男，1972年生，副主任技师，主要从事临床检验工作。四环素类抗生素是由放线菌产生的一类广谱抗生素，常规浓度时有抑菌作用，高浓度时呈杀菌作用，该类抗生素对革兰阳性菌尤其是葡萄球菌的抗菌活性较革兰阴性菌高。近年来，随着-内酰胺类、大环内酯类等抗生素的耐药性增加、新的四环素类抗生素副作用减少，其在临床应用又有增加的趋势。耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA)已为医院感染中常见的重要病原菌1，具有多重耐药特征，给临床治疗带来困难。为进一步了解MRSA对四环素类抗菌药物的耐药机制，本研究对45株MRSA进行了四环素耐药相关基因检测，现将结果报告如下：材料与方法1材料1.1菌株 45株MRSA为2007年1月2008年6月分离自河北医科大学第一医院临床患者的痰液、伤口分泌物和脓液等标本，-70保存；质控菌株为金黄色葡萄球菌ATCC 25923。1.2主要仪器 Mastercycler型PCR扩增仪(德国Eppendrof公司)；Bio-Vison-3000型凝胶成像仪（法国Vilber Lourmat公司）。1.3主要试剂 微球菌鉴定卡（湖南天地人生物科技有限公司）；DNA分子量参照物（100bp DNA Ladder）、琼脂糖、溴化乙锭（上海生物工程技术服务有限公司）；四环素耐药基因tetM试剂盒（无锡市克隆技术研究所）。1.4菌种鉴定：应用微球菌鉴定卡鉴定为金黄色葡萄球菌；应用苯唑西林-盐平板筛选法确认为MRSA。1.5四环素耐药基因tetM检测 DNA提取采用蛋白酶K消化法，基因扩增采用聚合酶链式反应法，严格按试剂盒提供的说明书进行操作。PCR产物电泳后，将胶块置于凝胶成像系统下照相并鉴定，出现与阳性对照分子相当的目的条带判断为阳性，tetM产物长度501bp。引物：P1：5-GTGTGACGAACTTTACCGAA-3 P2：5-GCTTTGTATCTCCAAGAACAC-3 2结果2.1 四环素耐药基因tetM的检出情况 45株MRSA的四环素耐药相关基因tetM的检出率为57.8（26/45）；tetM基因的PCR电泳结果见图1。图1 tetM基因的PCR电泳结果(501bp)900bp800bp700bp600bp500bp400bp300bp200bp100bp从左到右依次为：标准分子量，阳性对照，样本1-样本73讨论MRSA对-内酰胺类、四环素类等多种抗菌药物均有较高的耐药性，且呈多重耐药趋势。四环素类抗生素的抑菌机制为抑制细菌蛋白质合成。四环素进入细胞后，与细菌核蛋白体30S亚基结合，阻止蛋白质合成始动复合物的形成，并抑制氨酰tRNA与mRNA-核蛋白体复合物结合，从而抑制肽链延长和细菌蛋白质的合成。细菌对四环素类抗生素的耐药机制主要有3种： 由质粒或转座子编码的排出因子（Tet A-E，Tet K和Tet L）在细菌细胞膜表达，这些排出因子也称泵蛋白，可介导Mg2+依赖性药物外流。 由质粒或转座子编码的核蛋白体保护因子（Tet M和Tet O）在细菌细胞内的表达，可与四环素结合，从而阻碍四环素与核蛋白体结合，发挥核蛋白体保护作用。 细菌产生灭活酶。其中TetM耐药基因的表达可能为MRSA对四环素类药物耐药中的重要耐药机制 2。本研究MRSA中tetM基因的检出率为57.8。比陆亚华3（100%）和孔海深4（89.4%）检出率低，这可能与我院患者多来源于烧伤科、普外科、呼吸科，病情较重，且各地区经济水平不一，用药方式不同，产生耐药的不均一性有关。MRSA的四环素耐药基因的研究，为MRSA耐药机制的研究提供了实验依据，尤其对tetM基因阳性的多重耐药的MRSA在医院的流行病学研究有一定的促进作用，防止MRSA在医院的暴发流行。参考文献1 Hiramatsu K, Katayama Y, Yuzawa H, et al. Molecular genetics of methicillin-resistant Staphylococcus aureusJ. Int J Med Microbiol，2002，292(2)：67-74.2 Aminov RI，Garrigues-Jeanjean N，Mackie RIMolecular ecology of tetracycline resistance:development and validation of primers for detection of tetracycliroteinsJAppl Env