第十八章羊水检验TheExaminationofAmnioticFluid.ppt

第十八章羊水检验TheExaminationofAmnioticFluid,KEYPOINTS,1.Alterationsofcolorandclarityandthesignificance.2.Evaluationindexesoffetalmaturityandthesignificance.3.Methodologyassessmentandqualitycontroloffoamstabilitytest.4.Examinationindexesoftoxoplasma,others,rubellavirus,cytomegalovirusandherpessimplexvirus(TORCH)infection.5.Evaluativeindexesoffetaldysplasiaandthesignificance.,前言,功能：保护母体和胎儿。水-组成：溶质-,有机物-无机盐-细胞-,98%99%,1%2%,50%,50%,极少量,一、标本采集羊膜穿刺多由妇产科医师进行。,第一节标本采集与处理,标本采集量:标本采集最佳时间：诊断遗传性疾病-诊断Rh溶血症-评估胎儿成熟度-,妊娠1620W。,妊娠2636W。,妊娠晚期(35W)。,1030ml。,第二节羊水理学检验,一、量【参考范围】妊娠8周：5ml。妊娠10周：30ml。妊娠20周：400ml。妊娠38周：1000ml。足月妊娠：800ml。过期妊娠：300ml。,【临床意义】羊水过多（polyhydramnios）：妊娠任何时期羊水量2000ml。羊水过少（oligohydramnios）：妊娠足月时羊水量300ml。,1羊水过多的原因,胎儿畸形多胎妊娠孕妇和胎儿疾病胎盘和脐带病变,2羊水过少的原因,胎儿畸形过期妊娠胎儿宫内发育迟缓羊膜病变,二、颜色与透明度,妊娠早期：无色或淡黄色、清晰、透明；妊娠晚期：乳白色、清晰或稍混浊。,【临床意义】,黄绿色:表示羊水中混有胎粪，为胎儿窘迫的现象。棕红色或褐色:多为胎儿已经死亡。金黄色：可能为母婴血型不合所引起的羊水中胆红素过高。粘稠拉丝的黄色:表示妊娠过期或胎盘功能减退。混浊脓性或带有臭味者：表示宫腔内已有明显感染。,【检测原理】羊水中的肺泡表面活性物质饱和磷脂是既亲水又亲脂的两性物质，在乙醇中振荡后形成的泡沫可维持数小时，并形成稳定泡沫层。而其他物质形成的泡沫，能被乙醇消除。用于诊断胎儿肺成熟程度。,三、泡沫试验,【参考范围】,阳性（稀释度为11和12的两管液面均出现泡沫环）。,【临床意义】,临床上只进行稀释度为11和12的泡沫试验。若2管液面均出现泡沫环为阳性，则提示L/S比值2.0，表示胎儿肺成熟。若仅第1管液面出现泡沫环，为临界值，L/S比值在1.52.0之间。若2管液面均未出现泡沫环为阴性，L/S比值1.49，提示胎儿肺未成熟。,第三节：羊水化学与免疫学检验,一、甲胎蛋白（AFP）【检测原理】火箭免疫电泳法放射火箭免疫电泳法放射免疫法酶联免疫吸附法,【参考范围】妊娠15周：40mg/L。妊娠32周以后：25mg/L。【临床意义】1AFP减低见于葡萄胎、唐氏综合征。,2AFP增高开放性神经管缺陷的胎儿。脐膨出、消化道畸形胎儿。先天性肾病、先天性食管闭锁、胰腺纤维囊性变、双胎、死胎等。染色体异常、糖尿病、先兆子痫、母婴Rh血型不合等。羊膜穿刺所致的胎血污染。,二、胆碱酯酶,【检测原理】ChE测定：丙酰硫代胆碱或乙酰胆碱作为底物，2-硝基苯甲酸为显色剂的速率法或终点法。AChE测定：聚丙烯酰胺凝胶电泳分析法。【参考范围】AChE10.43U/L。,【临床意义】1.羊水中AChE活性增高与胎儿开放性神经管畸形有高度的相关性。2.AChE/PChE比值：0.27者可诊断为神经管缺损，1.0者可诊断为开放性腹壁缺陷胎儿。3.AChE活性测定：可纠正羊水AFP的假阳性。,三、卵磷脂与鞘磷脂,【检测原理】薄层层析色谱法（thin-layerchromatography;TLC）。【参考范围】L/S比值2.0。,【临床意义】L/S1.49:表示肺脏不成熟，IRDS(特发性呼吸窘迫综合征)严重；L/S为1.501.99:表示肺脏发育不够成熟，有IRDS可能；L/S为2.03.4:表示肺脏已成熟；L/S为3.53.9:表示肺脏肯定成熟；L/S4.0:表示过熟儿。,四、肌酐,【检测原理】肌酐与苦味酸反应，生成橘红色的苦味酸肌酐复合物。肌酐测定方法有去蛋白终点法和速率法。【参考范围】妊娠37周：176.8mol/L。,【临床意义】,判断胎儿肾脏成熟度，准确率高。妊娠37周时，羊水肌酐：176.8mol/L提示胎儿肾脏成熟；为132.6176.7mol/L为临界值；132.5mol/L提示胎儿肾脏未成熟。,五、睾酮,【检测原理】ELISA法或放射免疫法。【参考范围】男性胎儿：（22411）g/L。女性胎儿（392）g/L。,【临床意义】,1.预测胎儿性别。2.妊娠合并糖尿病、母婴Rh血型不合、无脑儿羊水睾酮水平可降低。3.结合染色体检查,诊断胎儿性疾病。,六、雌三醇,【检测原理】ELISA法或放射免疫法。【参考范围】妊娠末期：0.81.2mg/L,【临床意义】,1.直接反映胎儿-胎盘功能。2.间接的反映胎儿在宫内发育的情况。雌三醇1.0mg/L，胎儿预后不良；雌三醇突然下降，可能为先兆流产。雌三醇减低，多见于母婴Rh血型不合、妊娠合并糖尿病、重度妊娠高血压综合征时的宫内死胎。雌三醇持续性处于低值者，可见于胎盘性硫酸酯酶缺乏症,七、胆红素,【检测原理】光谱分析法，改良J-G法，胆红素氧化酶法和二甲亚砜（DMSO）法。【参考范围】1.71mol/L（A4500.02）。,【临床意义】,判断胎儿安危、观察胎儿肝脏成熟程度的胆红素水平。监测胎儿溶血程度，以决定分娩时机。,八、葡萄糖,【检测原理】葡萄糖氧化酶（GOD）法，己糖激酶（HK）法，邻甲苯胺（O-TB）法。【参考范围】0.56mmol/L。,【临床意义】,1.判断胎儿肾脏成熟程度的指标。0.56mmol/L，提示胎儿肾脏发育成熟。0.80mmol/L，提示胎儿肾脏不成熟。2.但判断肾脏成熟程度的精确度不如羊水肌酐。,九、淀粉酶,【检测原理】碘-淀粉酶比色法，对-硝基苯麦芽庚糖苷（4NP-G7）法。【参考范围】300SomogyiU/L。,【临床意义】,主要用于判断胎儿唾液腺成熟程度。1.大于300SomogyiU/L，提示胎儿唾液腺成熟；2.200300SomogyiU/L为临界值；3.小于200SomogyiU/L为胎儿唾液腺不成熟。,十、反三碘甲状腺原氨酸,【检测原理】RIA法。【参考范围】2.628.31nmol/L。【临床意义】用于诊断胎儿甲状腺疾病。水平降低见于胎儿甲状腺功能减退。,十一、血型物质,ABH分泌型血型的预测【检测原理】羊水中分泌的血型物质可将相应抗血清中抗体中和。,2.ABH（O）血型酶的测定,【检测原理】A基因产生的N-乙酰氨基半乳糖转移酶，形成A血型物质。B基因产生的D-半乳糖转移酶，形成B血型物质。当有糖供体、Mn+与O型红细胞共同孵育时，羊水中的转移酶可在红细胞膜上合成A或B物质。利用血型测定的方法可检测非分泌型胎儿的血型。,【临床意义】,为有严重ABO同种免疫史的孕妇非分泌型的胎儿血型鉴定提供了可能。为在位于ABO基因部位的遗传性疾病的产前诊断提供了可能。,第四节羊水显微镜检验,一、羊水脂肪细胞计数【检测原理】脂肪细胞计数是反映胎儿皮肤成熟程度的指标。将羊水涂片用尼罗蓝水溶液染色后，显微镜下观察，计数200500个细胞，计算脂肪细胞阳性率。,【参考范围】妊娠34周前羊水脂肪细胞1%；3438周为1%10%；3840周为10%15%；40周以后大于50%。【临床意义】大于20%为胎儿皮肤成熟的指标。10%20%为临界值。小于10%为皮肤不成熟。大于50%为皮肤过熟。,二、羊水快速贴壁细胞计数,【检测原理】1.正常羊水细胞需要45d才能贴壁生长。2.胎儿畸形，如神经管缺陷及脐疝畸形时，羊水细胞仅需20h即可贴壁生长，此种细胞称为快速贴壁细胞(RAC)，具有贴壁生长快、活细胞贴壁率高的特点。通过计算活细胞贴壁率，来判断有无畸形。,【参考范围】4%。【临床意义】RAC主要用于胎儿畸形的诊断。脐疝畸形的RAC为9%12%，无脑儿的RAC为100%。,第五节羊水病原生物学检验,一、病毒1.风疹病毒检查【检测原理】病毒分离培养法。血凝抑制试验。风疹病毒特异性IgM测定。PCR：灵敏度高，特异性强，具有早期快速诊断的价值。,【临床意义】风疹病毒是引起胎儿畸形的病毒之一妊娠12周感染风疹病毒者，胎儿严重畸形发生率为30%80%；妊娠1218周感染风疹病毒者，10%20%胎儿可有智力障碍和听力缺陷；妊娠18周以后感染风疹病毒的危害性很低。,2巨细胞病毒检查巨细胞病毒是疱疹病毒的一种。WHO已将其列为引起新生儿出生缺陷的主要病原体。3.单纯疱疹病毒检查单纯疱疹病毒是疱疹病毒的一种。与胎儿和新生儿有关的主要是型。,二、弓形虫,【检测原理】组织学：可直接寻找弓形虫的滋养体、包囊或卵囊等。血清学：有Sabin-Feldman染色试验、补体结合试验、间接荧光抗体试验或间接血凝试验等。PCR：以B1基因、200-300重复序列（AF146527）或16SrDNA为目的基因。,【临床意义】可引起弓形虫病，为人畜共患疾病。孕妇感染弓形虫后，除了通过胎盘感染胎儿外，还可经过羊水进入消化道而使胎儿感染。孕妇感染弓形虫后，可造成流产、早产、胎儿小头畸形、脑积水、视力障碍、智力发育缺陷等畸形。,第六节羊水检验的质量控制与临床应用,一、质量控制AFP：母体AFP检测连续2次阳性时，再考虑是否行羊水AFP检查。羊水胆红素检测：要求避光。羊水泡沫试验：新鲜标本或4冷藏。操作时需用力振荡。,二、临床应用,产前诊断,（一）产前诊断1神经管缺陷性疾病（NTD）母体血清和羊水AFP增高。羊水AFP增高除了见于NTD以外，还可见于死胎、先天性食管闭锁及某些染色体病。RAC对诊断NTD具有高度的特异性和灵敏度。无脑儿的RAC贴壁率为100%，脐疝畸形RAC贴壁率为9%12%。,2遗传性代谢病,羊水酶学检查。限制性片段长度多态性连续分析。羊水PCR检查。减少遗传性疾病的发生率。如脂代谢病、粘多糖沉积病、氨基酸代谢病、碳水化合物代谢病等。,3染色体病,常染色体异常-先天愚型(21-三体)性染色体异常-先天性卵巢发育不全症(45,X)明确诊断-可终止妊娠。,4性连锁遗传病,常见的性连锁遗传病有血友病、原发性低丙种球蛋白血症、肌营养不良、黏多糖沉积病型、糖原代谢病型、红绿色盲、自毁面容综合征等。对X连锁隐性遗传病，如血友病、红绿色盲、假性肥大型肌营养不良症等家族史的胎儿，及早确定胎儿性别，男胎应终止妊娠。,（二）评估胎儿成熟度,1.肺成熟度2.肾成熟度3.肝成熟度4.唾液腺成熟度5.皮脂腺成熟度,（三）诊断TORCH感染,TORCH是一组病原生物的英文名称缩写，即弓形虫（toxoplasmagondii）、其他病原微生物（others）、风疹病毒（rubellavirus）、巨细胞病毒（cytomegalovirus）、单纯疱疹病毒（herpessimplexvi