x小体的制备1

人类X小体的检测,实验目的,掌握人类X小体玻片标本的制作方法。观察识别X小体形态特征及所在部位。,实验原理,发现：1949年，加拿大学者Barr在研究猫的神经元细胞时，发现雌猫神经元细胞核边缘有一个染色较深的浓缩小体，而在雄猫则没有这种结构。进一步研究发现，所有雌性哺乳动物细胞中都有这种小体，能显示性别差异。,实验原理,本质：哺乳动物体细胞核中，除一条X染色体外，其余的X染色体发生异固缩，功能上处于失活状态，将其称为X小体（X染色质，性染色质，巴氏小体Barrbody），通常位于间期细胞核的核膜边缘，染色深而致密。,实验原理,人类正常的男女体细胞中，22对常染色体并无区别，但其性染色体分别为XY和XX。女性的两条X染色体中，有一条在间期呈现浓缩状态，可由适当的染料显示。正常女性口腔黏膜上皮细胞中X小体阳性率10-30%。,实验原理,数目：X小体的数目=X染色体数目1正常女性细胞：2条X染色体，X小体的数目为1正常男性细胞：1条X染色体，X小体的数目为0。有三个X染色体者X小体的数目为2,实验原理,莱昂假说（Lyonhypothesis）正常雌性哺乳动物体细胞中的两个X染色体之一在遗传性状表达上是失活的。X染色体的失活是随机但恒定的。失活的X染色体可来源于雌性亲本，也可来源于雄性亲本。失活现象发生在胚胎发育的早期，一旦出现则从这一细胞分裂增殖而成的体细胞克隆中失活的都是同一来源的染色体。,实验原理,应用：1.鉴定个体的性别胎儿细胞性染色体检查：羊水细胞，绒毛细胞，用于预防性染色体遗传性疾病的发生，优生。2.诊断性染色体异常综合征克氏（Klinefelters）综合征，先天性睾丸发育不全综合征，患者为男性但有一个巴氏小体，核型是47，XXY。特纳氏（Turners）综合征，先天性卵巢发育不全综合征，患者为女性但却无巴氏小体，核型是45，XO。超雌：XXX,XXXY有2个巴氏小体等。,操作步骤,l取材、涂片：（1）吸取5ml生理盐水于离心管中。（2）用牙签刮取女性口腔上皮细胞后置入离心管的生理盐水中洗脱下来，轻轻摇匀，1500r/min离心8min，弃上清。（3）加入预热的低渗液5ml，37下低渗10min，再加入新鲜配制的Carnoy固定液1ml，混匀，预固定2min，1500r/min离心6min，弃上清。（4）加入固定液5ml，吹打混匀，室温下固定15min，1500r/min离心8min，弃上清。（5）加入固定液0.5ml，制成细胞悬液。（6）将2-3滴细胞悬液滴至预冷的载玻片上，空气风干。,操作步骤,2染色：（1）玻片放入HCl缸中，室温下水解10min后取出，自来水细水漂洗数秒钟，洗去多余HCl。（2）吸干玻片上水珠，在甲苯胺兰染液中染色3min后取出，自来水细水漂洗数秒钟，空气风干。3镜检：气干后即可镜检。,注意事项,用洁净的牙签钝端从口腔两侧颊部刮取粘膜，为防止后面的离心损耗，应尽量多取一些。弃上清时，用吸管吸取上清，弃去，接近下方沉淀时，应小心吸取。加入低渗液后，轻轻混匀，不能太用力，以防核膜破裂。固定液使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果。载玻片于临用前在-20度冰箱中取出，现用现取，以防温度上升。加热时应距离外焰一段距离（2-3cm），且来回摆动，以防过热引起断裂。,实验结果,低倍镜：选择轮廓清楚，不重叠，染色清晰，核膜完整，核质中颗粒均匀的细胞，观察到细胞核后转到高倍镜下观察。高倍镜：观察X小体，大小约为1m，扁平状、椭圆形或三角形，浓染，紧贴于细胞核核膜边缘。,X小体的形状,X小体的阳性率,正常女性口腔粘膜上皮细胞中X小体阳性率约10%30%；男性偶尔可见，阳性率2%