抗生素类药物的分析.ppt

主要内容,氨基糖苷类抗生素,四环素类抗生素,概述,-内酯胺类抗生素,1928年弗莱明发現青霉菌抑制金黃葡萄球菌1939年佛罗瑞和芡恩从青霉菌分离青霉素1945年佛來明、佛罗瑞、芡恩获得诺贝尔医学奖,一、概述,如今：抗生素7000种用于医疗300种我国100种,一、概述,抗生素（antibiotics):指在低微浓度下即可对某些生物的生命活动有特异抑制作用的化学物质的总称,一、概述,抗生素类药物的特点:化学纯度较低：同系物、异构体、降解物活性组分易变异：菌株、发酵条件变化稳定性差：活性基团往往是活性中心,一、概述,抗生素的测定：1、微生物检定法抗生素对微生物的效应衡量效价优点：1)与临床应用一致，医疗价值2)灵敏度高、检品用量少3)纯的、纯度差的4)已知的、新发现的5)测定总效价,一、概述,缺点：1）操作步骤繁多2）测定时间长（1624h）3）误差大（10%）,一、概述,2、理化方法特有的物理化学性质及其反应进行优点：1）操作简单2）省时3）方法准确4）一定的专属性,一、概述,缺点：1）提纯的、化学结构明确的2）测定结果是含量,一、概述,二、-内酯胺类抗生素,6-氨基青霉烷酸7-氨基头孢菌烷酸,6-AminopenicillanicAcid7-Aminocephalosporanieacid,6-APA7-ACA,甲环：-内酰胺环乙环：饱和的噻唑环氢化噻嗪环,（一）性质1、旋光性2、溶解度碱金属盐易溶水有机碱盐难溶于水，易溶于有机溶剂,二、-内酯胺类抗生素,3、吸收光谱特性青霉素：母核无紫外吸收，侧链有头孢菌素：母核260nm、侧链有4、-内酰胺环不稳定性干燥纯净的青霉素稳定，对热也稳定水溶液不稳定，最不稳定-内酰胺环,二、-内酯胺类抗生素,（1）酸性或碱性水解：pH58水溶液稳定，在酸性或碱性下，产生一系列降解产物。,二、-内酯胺类抗生素,（2）与羟胺作用：生成羟肟酸衍生物，与Fe3+生成红色络合物。,二、-内酯胺类抗生素,（二)鉴别1、-内酰胺胺（1）羟肟酸铁反应（2）多伦或斐林试剂反应（3）双缩脲和茚三酮反应具有-CONH-结构和-氨基酸结构,二、-内酯胺类抗生素,2、各种盐的鉴别（1）钾、钠盐：火焰反应（2）普鲁卡因青霉素：重氮化-偶合反应,二、-内酯胺类抗生素,（三）含量测定碘量法酸碱滴定法汞量法吸收光谱法HPLC法：除磺苄西林钠微生物法其余均为本法,二、-内酯胺类抗生素,HPLC法.头孢克洛ODS柱磷酸二氢钾溶液-乙腈（92:8）检测波长:254nm按头孢克洛峰计理论塔板数1500头孢克洛与头孢克洛-3异构体峰分离度符合要求外标法定量,二、-内酯胺类抗生素,2.阿莫西林克拉维酸钾片ODS柱磷酸盐缓冲液-甲醇（95:5）检测波长:220nm阿莫西林与克拉维酸钾分离度3.5外标法定量,二、-内酯胺类抗生素,（一）结构与性质：1、结构：链霉素（链霉素A)链霉胍链霉糖N-甲基-L-葡萄糖胺,三、氨基糖苷类抗生素,巴龙霉素:,三、氨基糖苷类抗生素,立体异构体：巴龙霉素I（R1=CH2NH2,R2=H）II(R1=H,R2=CH2NH2)药用为混合物，以I为主,庆大霉素,三、氨基糖苷类抗生素,绛红塘胺2-脱氧链霉胺加洛糖胺,三、氨基糖苷类抗生素,奈替米星：（庆大霉素C1a,绛红糖胺4，5位双键）,三、氨基糖苷类抗生素,2、性质（1）碱性链霉素：胍基（pka11.5）甲氨基（pka7.7）巴龙霉素：4个碱性中心庆大霉素、奈替米星：5个碱性中心（2）水溶性矿酸或有机酸盐,三、氨基糖苷类抗生素,（3）稳定性链霉素：最稳定pH57.5pH8易水解巴龙霉素：水解生成巴龙（霉）胺（新霉素D)、巴龙二糖胺庆大霉素、奈替米星：稳定pH212煮沸30min不分解庆大霉素：2mol/LNaOH回流2h效价不变,三、氨基糖苷类抗生素,（4）紫外吸收链霉素：230nm无紫外吸收：巴龙霉素庆大霉素奈替米星,三、氨基糖苷类抗生素,（5）旋光性硫酸链霉素：+83.20硫酸巴龙霉素：+50+550硫酸奈替米星：+88+960硫酸庆大霉素：+107+1210,三、氨基糖苷类抗生素,（二）鉴别1、麦芽酚反应（MaltolReaction）链霉素/OH-，H2O链霉糖经分子重排成麦芽酚,三、氨基糖苷类抗生素,max550nm,2、坂口反应（Sakaguchi）,三、氨基糖苷类抗生素,加入尿素，稳定，max520nm,3、茚三酮反应,三、氨基糖苷类抗生素,4、N-甲基葡萄糖胺反应（Elson-Morgan反应）,三、氨基糖苷类抗生素,5、Molisch试验水解、脱水糠醛-萘酚或蒽酮呈色与-萘酚：,三、氨基糖苷类抗生素,与蒽酮：,三、氨基糖苷类抗生素,5、硫酸盐的鉴别6、TLC中国药典、BP硫酸庆大霉素采用,三、氨基糖苷类抗生素,（三）检查庆大霉素：C1、C2、C1a的混合物毒性：C2C1C1a有效血浓：410g/ml12g/ml耳中毒，肾损害,三、氨基糖苷类抗生素,Ch.P2005采用HPLC法(1).色谱条件及系统适用性试验柱填料：ODS流动相：0.2mol/L三氟醋酸-甲醇（92:8）流速：0.6ml/min,三、氨基糖苷类抗生素,出峰顺序：C1a、C2、小诺霉素、C2a、C1分离度：小诺霉素和C2a峰分离度符合要求小诺霉素连续进样RSD%0.99本品用流动相配成2.5mg/ml，进样用回归方程计算各组分含量,三、氨基糖苷类抗生素,Cx为各组分的含量C12550%；C1a1540%；C2+C2a2050%检测器：蒸发光散射检测器,三、氨基糖苷类抗生素,(一）化学结构与性质,四、四环素类抗生素,四、四环素类抗生素,1、母核上的官能团：（1）A环C4：二甲胺基（-N（CH3）2）（2）A环C2：酰氨基（-CONH2）（3）D环：酚羟基（C10）（4）两个酮基和烯醇基的共轭双键系统,四、四环素类抗生素,2、两性化合物酸性：酚羟基、烯醇型羟基碱性：二甲胺基酸或碱性下均能成盐采用盐酸盐,四、四环素类抗生素,3、结晶水四环素：6个结晶水土霉素：2个结晶水加热时，可失去，失去后有吸湿性,四、四环素类抗生素,4、溶解度pH4.57.2：难溶于水pH8：易溶于水,四、四环素类抗生素,5、不稳定性对各种氧化剂都不稳定碱性性更易氧化干燥品较稳定，遇光可使颜色变深,四、四环素类抗生素,6、旋光性盐酸土霉素-1880-2000盐酸四环素-2400-2580盐酸多西环素-1050-1200,四、四环素类抗生素,（二）化学反应1、差向异构化（差向四环素）pH2.06.0，A环C4构型改变,四、四环素类抗生素,易差向化：四环素、金霉素不易差向化：土霉素、多西霉素、美他环素影响因素（1）pH2、pH9，不易差向（2）高价酸根存在，易差向（3）阴离子浓度增加，易差向,四、四环素类抗生素,2、酸性下降解（脱水四环素类）pH2，C环C6羟基与C5a上氢脱水,四、四环素类抗生素,可脱水：四环素、金霉素、土霉素不可脱水：多西霉素、美他环素（C6无OH）,3、碱性下降解（异四环素）碱性下，C环打开，生成内酯结构,四、四环素类抗生素,多西环素、美他环素：不反应，R不是OH,4、与金属离子络合锆、钍、铀、锌、铜、铝、镁、铈、钴形成有色络合物,四、四环素类抗生素,（三）鉴别1与浓H2SO4反应四环素深紫色金霉素兰色、变为橄榄绿，加水成金黄土霉素朱红色多西霉素黄色美他环素橙红色,四、四环素类抗生素,2FeCl3反应四环素红棕色金霉素深褐色土霉素橙褐色多西霉素褐色,四、四环素类抗生素,3.TLC法Ch.P(2005)、BP(2005)采用4.HPLC法Ch.P(2005)、USP(30)采用,四、四环素类抗生素,(四)杂质检查1、有关物质异构杂质、降解杂质引起恶心、呕吐、糖尿蛋白尿及酸中毒Ch.P、USP、BP均采用HPLC法检查,四、四环素类抗生素,2、杂质吸收度脱水物、差向脱水物