生药112106贡静的超氧化物歧化酶SOD的生产

超氧化物歧化酶（SOD）的生产,生物制药1121第5组贡静杨恪鉴顾海彬余靖申文娟,超氧化歧物酶的概念,超氧化物歧化酶，别名肝蛋白、奥谷蛋白，简称：SOD。SOD是一种源于生命体的活性物质，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。对人体不断地补充SOD具有抗衰老的特殊效果。,超氧化歧物酶的概念,超氧物歧化酶是一种新型酶制剂。它在生物界的分布极广，几乎从动物到植物，甚至从人到单细胞生物，都有它的存在。SOD被视为生命科技中最具神奇魔力的酶、人体内的垃圾清道夫。SOD是氧自由基的自然天敌，是机体内氧自由基的头号杀手，是生命健康之本。,超氧化歧物酶的来源,超氧化物歧化酶是1938年Marn等人首次从牛红血球中分离得到超氧化物歧化酶开始算起，人们对SOD的研究己有七十多年的历史。1969年McCord等重新发现这种蛋白，并且发现了它们的生物活性，弄清了它催化过氧阴离子发生歧化反应的性质，所以正式将其命名为超氧化物歧化酶。,超氧化歧物酶的分类,一、含铜锌金属辅基的称（Cu.ZnSOD），最为常见的一种酶，呈绿色，主要存在于机体细胞浆中；二、是含锰金属辅基的称（MnSOD），呈紫色，存在于真核细胞的线粒体和原核细胞内；三、含铁金属辅基的称（FeSOD），呈黄褐色，存在于原核细胞中。,超氧化歧物酶的化学反应,2O2-+2H+H2O2+O2O2-称为超氧阴离子自由基，是生物体多种生理反应中自然生成的中间产物。它是活性氧的一种，具有极强的氧化能力，是生物氧毒害的重要因素之一。O2-具有细胞毒性，可使脂质过氧化，损伤细胞膜，引起炎症，肿瘤和自身免疫性疾病，并可能促使机体衰老。,超氧化歧物酶对人体的作用,抑制心脑血管疾病抗衰老防治自身免疫性疾病肺气肿辐射病及辐射防护抗疲劳老年性白内障,抗氧化预防慢性病抗疲劳化解女性的危机有效降低血脂、胆固醇、血压,SOD应用领域,1、药物类主要集中在炎症病患者，尤其治疗类风湿关节炎、慢性多发性关节炎、心肌梗塞、心血管病、肿瘤患者以及放射性治疗炎症病患者；2、生化制药作为一种生化酶制剂，广泛应用于临床和科研上，可抗衰老，抗肿瘤、调节人体内分泌系统；,SOD应用领域,3、化妆品可添加在化妆品中，具有抗氧化抗腐蚀的优良性能。以SOD为主要成份的化妆品风靡世界，引发了化妆品历史上的一场革命，使人类永葆青春美丽梦想成真；4、保健食品、饮料SOD糖、SOD口服液、SOD干啤等都非常畅销。在饮料、糖果、糕点等食品中加入SOD既可利用其抗腐蚀性延长保质期，又可调节人体内分泌系统。,SOD的生产一、材料，试剂及仪器,10新鲜蒜瓣，0.05mol/L磷酸缓冲溶液（pH7.8），氯仿-乙醇混合液（氯仿-无水乙醇3：5），丙酮（用前预冷至-10）。研钵，石英砂，烧杯（50mL），玻璃棒，pH计，冷冻离心机，离心管,二、操作步骤,整个操作过程在0到5条件下进行SOD酶的提取称取5g大蒜蒜瓣，加入石英研磨破碎细胞后，加入0.05mol/L的磷酸缓冲液（Ph7.8）15ml，继续研磨20min，使SOD酶充分溶解到缓冲液中，然后6000r/min冷冻离心15min，弃沉淀，取上清液。,去除杂蛋白上清液中加入0.25倍体积的氯仿-乙醇混合液搅拌15min，6000r/min离心15min，弃去沉淀，得到的上清液即为粗酶液。SOD酶的沉淀分离粗酶液中加入等体积的冷丙酮，搅拌15min，6000/min离心15min，得到SOD酶沉淀。冷冻干燥后即得成品。对成品进行称量并测定酶活力。,三、SOD酶的检验,原理连苯三酚在碱性条件下，能迅速自氧化，释放出氧气，生成带色的中间产物。在自氧化过程的初始阶段，黄色中间产物的积累在滞后3045s后就与时间成线性关系。中间产物在420nm处有强烈的光吸收，在有SOD存在时由于它能催化生成氧气与过氧化氢，从而阻止了中间物的积累，通过计算就可以求出SOD的活力。,酶活性的测定（1）邻苯三酚自氧化速率的测定在10ml试管中加入pH值为8.30的50mol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液4.50ml，在250.5的恒温水浴中保温10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚溶液（空白管用10mmol/LHCL代替），迅速摇匀倒入1cm比色皿中，以空白管为参比，在325nm下，每隔30s测1次吸光值，连续记录3min，调节连苯三酚溶液用量，将其自氧化速率控制在0.070（0.002）D/min。经实验测得连苯三酚溶液的用量为61,（2）样品活性测定在10ml试管中加入pH为8.30的4.5ml50mmol/LK2HPO4-KH2PO4缓冲溶液和一定体积的样液，在250.5的恒温水浴中保温10min，然后加入在250.5的恒温水浴中事先预热好的连苯三酚61，（空白管用10mmol/LHCL代替），迅速摇