环境微生物学教学课件11微生物培养基

二培养基,学以致用养细菌,水、碳源、氮源、无机盐及生长因子等细菌及其它微生物营养物质的合理配制物,1.认识,化能自养菌氧化硫杆菌的培养基粉末状硫10gKH2PO44gMgSO40.5gCaCl20.5g(NH4)2SO40.4gFeSO40.01g水1000mL（自来水即可）,提问：其中各组分作用是什么？,空气中的CO2,能源,磷源、缓冲物,碳源是什么？,氮源,盐,也可补加一部分碳酸钠。,异养细菌的培养基中至少有一种有机物，实验室中通常是葡萄糖如一种大肠杆菌培养基葡萄糖0.5gK2HPO41gMgSO40.2gNaCl5gNH4H2PO40.4g水1000mL,2.配制,通常,加水,3分类,提问：根据哪些特性可以给培养基分类？物理状态、用途、组分组成(一)根据物理状态固体培养基、半固体培养基和液体培养基1）液体培养基（“汤”）废水也可看作是一种广义的液体培养基,2）固体培养基（“团”）,人工做法(与果冻方法一样)向液体培养基中加入2左右的琼脂，加热至100溶解，40下冷却并凝固。,石花菜(红藻）琼脂,琼脂主要成份半乳聚糖，分子量大，呈网状粘着力强，溶解分散（温度为96以上）,条状琼脂,粉末琼脂,琼脂特性,A.不能被绝大多数微生物利用、分解液化；提问：有什么好处？不作为额外碳源，干扰试验，保持固体特性B.高压灭菌结构不被破坏，且颜色透明不妨碍观察；,C.多数微生物在琼脂培养基表面生长并形成独立菌落；,提问：有何好处？易于纯化分离,3）半固体培养基（“膏”）,半流动性介于固体与液体之间提问：如何制作？在液体培养基中加入0.5%或更低浓度的琼脂作用：？半固体培养基中可以融入少量的溶解氧，因此这种培养基常被用于培养在较低氧浓度环境下才能最佳生长的细菌。,天然的固体培养基土豆块、培养真菌的麸皮、大米、大麦等。,（二）根据培养基组分,天然培养基、合成培养基和半合成培养基。1）合成合成纯化学试剂,2）天然天然？纯生物制品(细胞提取物)如，常用的细菌肉汤培养基牛肉膏3g蛋白胨5g水1000mLpH7.27.4牛肉膏瘦牛肉经过加热浓缩抽提的膏状物（主要作碳源）,优点稳定、选择性缺点很多细菌营养需求较为复杂，配方获取较难,（二）根据培养基组分,类似物如酵母膏、麦芽汁、土壤浸出液、牛奶、玉米粉,优点营养丰富、配制容易缺点？质量不稳定、选择性差；3）半合成半不纯优缺点介于前两者之间，因而使用最广。,蛋白胨动植物蛋白（大豆或动物骨粉等）经初步酶解形成的短肽（主要作氮源）,酵母膏,(三)根据培养基用途,普通型、选择型、鉴别型1）普通普适,有两种制备思路：,？,肉汤培养基牛肉膏3g蛋白胨5g水1000mLpH7.27.4,2）选择性培养基选择性？待选的细菌能优势生长,投毒法（“正考试”）,常用物质为染料、胆汁酸盐、金属盐类、酸、碱和抗生素。例如欲分离古细菌，培养基中通常加入青霉素（由于古细菌的细胞壁不同于普通细菌，因而不会被对破坏普通细菌细胞壁结构的青霉素杀死），古细菌就唯一分离并存活下来。,胆汁酸盐抑制革兰氏阳性菌提问：它能选择性生长那种细菌？革兰氏阴性细菌,毒选择性的抑制剂待选细菌有抗性,投其所好法（“邪挖墙角”）,好营养、环境因子（1）专一性营养源培养法待选细菌专门需要的某种碳源或氮源例如筛选纤维素分解菌选用纤维素作为培养基中的唯一碳源；各类降解石化废水特殊有机物的细菌筛选通常是以这类有机物为培养基中的唯一碳源，将目的细菌富集筛选下来。,（2）理化因素控制法理化因素特殊的温度、氧气、pH、盐度等环境条件主要用于筛选极端环境微生物。如嗜盐、嗜热、嗜冷、嗜酸、嗜碱等的细菌，同时也被用于选择性培养好氧或厌氧细菌。,嗜冷菌,嗜热菌,3）鉴别培养基,鉴别明查分别（细菌种类）提供培养环境外还同时具有类似于“验钞机”的作用,方法？鉴加入指示剂（“紫光灯”）别不同菌落制造不同的代谢物（“有无荧光粉”），显色不一,3）鉴别培养基举例,水处理中常用的远藤氏培养基就是典型大肠菌群内不同种属细菌的鉴别培养基。都能生长，但对乳糖的分解能力不同大肠埃希氏菌强，菌落紫红色带金属光泽枸橼酸盐杆菌次之，菌落呈紫红或深红色产气杆菌第三，菌落呈淡红色副大肠杆菌不能分解乳糖，菌落无色透明,4）富集培养基（加富）,加富营养特别丰富针对细菌数量少，或对营养要求苛刻培养不易的细菌,方法？植物提取液、动物组织提取液、土壤浸出液、血和血清等。,三、营养物质的吸收和运输,细胞膜的选择吸收,分四种情况,水、无机盐、气体、甘油等小分子,1被动扩散,?,推动力?,推动力浓度梯度,无载体蛋白,不,内部能量消耗YorN?,乞讨,2促进扩散,促进载体蛋白协助,载体蛋白,细胞外,|,细胞膜,|,细胞内,糖、氨基酸、金属离子等,?,推动力浓度梯度,有载体蛋白,不,内部能量消耗YorN?,推动力?,拉赞助,3主动运输,运输载体蛋白主动逆浓度梯度方向,糖、氨基酸、有机酸Na+、K+、硫酸根、磷酸根等,?,推动力ATP放能,有载体蛋白,消耗,内部能量消耗YorN?,推动力?,抢劫,磷酸化自由能升高，能量级别、位置的升高。,转位,磷酸葡萄糖,4.基团转位,基团被转运的营养物转位,？,洗钱,提问：磷酸化的益处？（一）活化参与代谢;（二）防止营养物从细胞内流失（细胞质膜对大多数磷酸化的化合物有高度不渗透性）；（三）保持营养物在细胞内的低浓度(不用主动