第八章--繁殖障碍.ppt

第八章引起猪繁殖障碍的病毒,伪狂犬病毒（PRV）疱疹病毒科猪细小病毒（PPV）细小病毒科日本乙型脑炎病毒（JEV）黄病毒科猪瘟病毒（HCV）黄病毒科猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）动脉炎病毒科,一、伪狂犬病病毒（Pseudorabiesvirus,PRV）同义名：猪疱疹病毒I型传染性延髓麻痹病病毒奇痒症病毒奥叶兹基氏病病毒（Aujeszkydiseasevirus),（一）形态和理化学特征属疱疹病毒科病毒粒子呈椭圆形或圆形外观。位于细胞核内无囊膜的病毒粒子直径约110150nm，位于胞浆内带囊膜的成熟病毒粒子的直径约150180nm。囊膜表面有呈放射状排列的纤突，长约810nm。,基因组为线性双股DNA，分子量为87X106，约150kb，G+C含量高达72%。病毒抵抗力较强。eg:5560经3050min才能灭活，80经3min灭活。病毒培养物最适保存温度为-70以下。在4的存活时间比在-20长。病毒对胰蛋白酶和脂溶剂敏感。,Herpessimplexvirus,PRV,（三）培养PRV具有泛嗜性原代细胞：兔、猪、猴、牛、羊、犬、鼠肾细胞，鸡胚、小鼠成纤维细胞传代细胞：BHK-21、PK-15、IBRS-2、Hela、Vero,（二）抗原性只有一种血清型,（四）病原性PRV感染动物范围广泛，致病性强。自然条件下能感染猪、牛、羊、犬、猫、兔、鼠以及野生动物如水貂、北极熊、银狐和蓝狐等。马属动物对本病具有较强的抵抗力。贮存宿主：猪、老鼠,成年猪一般为隐性感染，但体内终身带毒和排毒，成为该病的主要传染源。妊娠母猪发生流产、死胎、木乃伊胎，以死胎为主。引起新生仔猪大量死亡。仔猪生下后第1天表现正常，第2天开始整窝死亡，2-5天为死亡高峰。15日龄以内仔猪死亡率达100%，30-50日龄死亡率达20%。引起种猪不育，屡配不上种。,猪感染PRV后，症状因日龄而异：,（五）诊断1、病毒的分离鉴定2、血清学方法SN、AGID、ELISA、LAT、HA和HI3、PCR4、鉴别诊断与根除计划gG-ELISA和gE-ELISA,伪狂犬病的诊断家兔接种犯病动物脑组织后4872h出现症状A、接种部位发痒，家兔啃咬接咱部位B、接种部位被咬伤出血,A,B,伪狂犬病（新生仔猪转圈）,（六）免疫预防1、常规疫苗1）弱毒疫苗：Bartha株、Buk株等(存在散毒问题和毒力返强的危险）2）灭活疫苗,2、新型疫苗1）基因缺失疫苗：TK-、TK-/gG-、TK-/gE-、TK-/gC-（gD)2）亚单位疫苗以病毒的结构蛋白制备的疫苗，因不含有核酸物质，因此比较安全。3）活病毒载体疫苗腺病毒、痘苗病毒、牛传染性鼻气管炎病毒4）核酸疫苗,二、猪细小病毒(porcineparvovirus,PPV)1966年Mary和Mahnel在进行猪瘟病毒组织培养时发现，并认为是培养细胞内潜伏感染的病毒，随后相继从一些正常猪肾细胞培养物和感染猪瘟病毒的猪肾细胞中也发现了这种病毒。,（一）形态和理化学特性病毒外观呈六角形或圆形，无囊膜。直径为2023nm，病毒体分子量为5.6106D。壳体为二十面体对称，由32个壳粒组成。核酸为线状单股DNA，分子量为1.4106D，G+C含量为48%，大多数病毒的DNA为负股，有些病毒含有少量的正股成份。病毒对热和酸的抵抗力较强，在pH39之间稳定。病毒对乙醚、氯仿等脂溶剂有抵抗力。,电镜下PRV与PPV的比较A、PRVB、PPV,A,B,CanineParvovirus,（二）血凝性凝集的红细胞：鼠、豚鼠、恒河猴、鸡、鹅和人的O型红细胞，75以上加热处理后，病毒的血凝效价几乎完全消失，弱酸性到中性的介质适于血凝特性的保持。,猪源cell：原代猪肾、猪睾丸细胞传代系PK-15、IBRS-2人的某些传代cell系：Hela、Hep-2,（三）培养细胞：,接种方式：,同步接种细胞长成单层前接种,病毒的增殖需要正处于有丝分裂期的细胞的某些机能的辅助。,30天以内胎儿被吸收30-50天木乃伊60-80天流产90天以后死胎或弱仔,（四）致病性多发生在秋节多见于头胎母猪引起母猪不育、流产、死胎、木乃伊胎，以木乃伊胎多见，死、流产胎儿有脑脊髓炎变化。妊娠母猪不同时期感染PPV，症状有所差别：,（五）诊断1、病毒分离鉴定,流、死产胎儿：肾、肺、肝、脑、睾丸、胎盘。感染仔猪：肠系膜淋巴结、肝脏。,2、血清学检查,HA和HI豚鼠或鸡的红血球中和试验,3、PCR,（六）预防灭活苗、弱毒苗基因工程疫苗：活病毒载体疫苗、核酸疫苗推迟初产期：9-10月龄配种。,三、日本乙型脑炎病毒（JEV）同义名：流行性乙型脑炎病毒日本脑炎病毒乙脑病毒1924年首先证实于日本，由一个病人脑组织中分离到病毒。我国最早的病例报道于1921年，1934年用中和试验证实，1940年由尸体脑组织中分离到病毒。,（一）JEV的分类及理化学性质病毒粒子呈球形，二十面体对称，有囊膜。病毒粒子的直径为4550nm，核心为30nm，分子量为3000KD。病毒在环境中不稳定，5630min或者1002min病毒被灭活。乙醚、氯仿、脱氧胆酸钠以及蛋白水解酶和脂肪水解酶敏感。丙酮可破坏病毒的表面结构，但感染性不被彻底破坏。,（二）JEV的生物学性状1、血凝特性鹅、鸽、雏鸡、绵羊等动物的红细胞血凝性易于破坏，对pH的要求比较高。2、抗原性只有一个血清型抗原性较强，感染的动物能产生较高效价的中和抗体、血凝抑制抗体、沉淀抗体和补体结合抗体。,（三）培养1、鸡胚7-9日龄鸡胚，病毒效价在接种后48h左右达到最高峰，以胚体内的病毒含量最高，鸡胚大多死亡。,2、组织细胞培养鸡胚成纤维细胞（CEF）鼠胚肾细胞牛胚肾细胞猪肾细胞仓鼠肾细胞传代细胞系：BHK-21、PK-15、Hela、Vero通常只在仓鼠肾原代细胞、猪肾细胞上恒定地引起病变。,（四）免疫1、灭活苗,1943年美国Sabin氏鼠脑灭活苗1966年美国仓鼠肾组织培养灭活苗鸡胚灭活苗卵黄囊接种，收获胚体，去头及爪,2、弱毒苗5-3株：强毒SA14株在仓鼠肾原代细胞上传代驯化致弱。SA14株12-1-7株9-7株5-3株2-8株：将12-1-7株经紫外线进一步减毒，再经乳鼠皮下传代，提高其皮下增殖力和免疫原性而育成的弱毒疫苗株。,伪狂犬病毒作载体构建重组疫苗核酸疫苗,eg.1994年Konishi以禽痘病毒作载体表达了JEV的preM、E和NS1基因以及preM和E基因，免疫小鼠能抵抗致死剂量JEV的攻击。,3、基因工程苗禽痘病毒作载体的重组疫苗,（五）诊断1、病毒分离、鉴定动物发热初期，采血液或血清分离病毒动物死亡后采脑组织分离病毒2、血清学诊断补体结合试验（CT）SNHA和HILATELISA,四、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）同义名：美国：猪神秘病（MSD）、猪不育-呼吸道综合征（SIRS）加拿大：母猪发热-厌食-流产间质性肺炎综合征德国：流行性流产与呼吸道综合症（PEARS）英国：猪蓝耳病（blueeardisease）中国：猪蓝耳病（blueeardisease）1992年OIE：porcinereproductiveandrespiratorysyndrome（PRRS）（猪繁殖与呼吸综合征）,PRRSV简史,1987年首次暴发于美国北卡罗纳州随后加拿大和欧洲一些国家也相继报道了该病的发生，几年之内便席卷了北美洲和欧洲大陆1991年荷兰Wensvoort首次分离病毒（LV株）我国1995年爆发PRRS，1996年首次分离到病毒CH-1a株目前，PRRSV几乎遍及全球主要养猪国家和地区。,PRRS的危害,PRRSV感染主要导致：母猪早产、流产、死胎、弱仔公猪精液品质下降初生仔猪高死亡率其它年龄猪呼吸系统疾病1991年，欧洲大面积暴发PRRS，导致至少100万头猪死亡1996年，丹麦再次暴发PRRS，全国40-50%的母猪出现流产、死胎和断奶前仔猪的大量死亡2000年，美国农业部将PRRS列为最严重的猪病毒性传染病在我国，PRRS广泛存在，并且还呈流行态势。,（一）形态和理化学特性PRRSV粒子呈球形，直径5560nm，有囊膜，表面有纤突。病毒核衣壳直径3035nm，呈二十面体对称基因组为单股正链RNA，长约15.1kb。,PRRSV结构模式图,PRRSV的分类地位,PRRSV属于尼多病毒目、动脉炎病毒科，该科还包括马动脉炎病毒（EAV）、鼠乳酸脱氢酶增高症病毒（LDV）、猴出血热病毒（SHFV）,PRRSV,LDV,EAV,SHFV,（二）遗传变异与抗原性只有一个血清型，但不同毒株之间的抗原变异程度较大。根据基因的变异程度，目前将PRRSV分为2个不同的地理群（group）或基因型（genotype）：,A亚群（欧洲型）:以欧洲的Lelystade分离株（LV）为代表B亚群（美洲型）:以美国的ATTC-VR-2332分离株为代表,我国分离的毒株均属于美洲型,（三）培养与增殖,原代细胞：猪肺泡巨噬细胞（PAM）传代细胞系：CL2621和MarC145各毒株对PAM均有很强的适应性。病毒在PAM上生长较快，CPE出现较早（1-4）天，主要表现为细胞圆缩、聚集和快速崩解。PRRSV在CL2621和Marc145上生长稍慢，CPE出现稍晚（2-6天），主要表现为细胞圆缩、聚集、脱落。,（四）抵抗力,对乙醚和氯仿等脂溶剂敏感。不耐热,eg：5615-20min，3710-24h，206天或4个月，病毒滴度下降10倍，5645min或3748h，病毒彻底灭活。,最适pH环境在pH5-7，病毒在pH值低于5或高于7环境中，感染性将损失90%以上。,（五）致病性,母猪流产、早产、死胎和木乃伊胎公猪精液品质下降育肥猪症状不明显仔猪表现为严重的呼吸系统证状，而且往往发生继发感染,（六）诊断,病毒分离鉴定肺组织和血清血清学方法免疫过氧化物酶单层试验（IPMA）、间接荧光抗体试验（IFA）、SN、ELISART-PCR,弱毒苗,安全，但保护力不强，且需反复多次的免疫接种,（七）免疫预防灭活苗,保护力优于灭活苗，但本身存在散毒问题，且有返强的潜在危险。,新型疫苗,多基因与佐剂亚单位疫苗多基因与佐剂DNA疫苗自主复制型RNA疫苗活病毒载体疫苗“自杀性”DNA疫苗,五、猪瘟病毒（Hogcholeravirus,HCV;Swinefevervirus,SFV)同义名：猪霍乱、烂肠瘟、古典猪瘟,1833年首先发现于美国的俄亥俄州1903年，DeSchweinitz和Dorset证明猪瘟的病原体是病毒匈牙利HutyraKoves于1908年制成猪瘟高免血清日本于1909年第一次发现并开始研究病毒我国何时出现猪瘟，无详细记载。1925年由东南大学农科开始研制免疫血清,（一）形态和理化学特性病毒颗粒略呈圆形，直径34-50nm，衣壳为二十面体对称，核衣壳直径为30nm。只有一个血清型，但有血清学变种存在。对乙醚、氯仿和去氧胆酸钠敏感，对胰蛋白酶有中度的敏感性。二甲基亚砜（DMSO）对病毒囊膜中的脂质和脂蛋白有稳定作用。,(二）增殖能在多种cell中增殖，但以猪肾细胞最敏感，但在细胞培养中不产生CPE。病毒在细胞浆中复制，在细胞培养物中病毒的传播呈三种方式：,从感染cell中释放出来经培养液感染新的易感细胞。被感染cell通过有丝分裂直接传给子代cell。通过胞间小桥在cell之间传播病毒。,（三）免疫被动免疫主动免疫高免血清血毒同时接种法、灭活结晶紫疫苗和弱毒疫苗。弱毒疫苗种类：,中国“54-系”，即“C株”兔化弱毒苗日本GPE-细胞弱毒苗（温度敏感株）法国培养的“Thiveosal”冷变异弱毒苗,日本GPE-细胞弱毒苗（温度敏感株）在猪睾丸细胞上传142代，再通过牛睾丸细胞26代，再于豚鼠肾细胞传41代（30下培养）法国培养的“Thiveosal”冷变异弱毒苗将强毒株Alfort在仔猪肾原代细胞中传代，再于牛肌肉细胞中在29-3