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文档简介

实验四酵母细胞的固定化,高大响,一、实验目的和要求,了解固定化细胞的原理。掌握用海藻酸钠制备固定化酵母细胞的方法。,二、实验原理,工业上常用包埋法固定微生物细胞。根据包埋剂的特性，海藻酸钠在水相中加热溶解呈溶液状。将细胞加入混匀，滴入氯化钙溶液中，由于离子的转移作用而凝固，形成凝胶颗粒，凝胶颗粒中的微小空格将细胞固定。海藻酸钙凝固的颗粒能反复使用，细胞在空格中可新陈代谢（固定活细胞），也可以利用细胞中的酶进行酶促反应（固定死细胞）。本实验利用海藻酸钙凝胶包埋酵母生长细胞。,固定化细胞材料2.5海藻酸钠溶液20mL，加热助溶，冷至45备用。配制50mL1.5CaCl2。20毫升注射器，150ml烧杯和50ml烧杯各一个、三角瓶、玻璃棒、温度计、镊子,三、实验材料和仪器,酵母细胞的活化取市售干酵母按1g投入到20ml3638的温水中活化1520分钟，酵母细胞活化时体积会变大，活化前应该选择体积足够大的容器，以避免酵母细胞的活化液溢出容器外。,四、实验方法和步骤,酵母细胞的固定化在冷却至4550左右海藻酸钠溶液中，加入5mL预热至35的酵母培养液，混合均匀。将混合液装入注射器中，装上大好针头，以缓慢而稳定的速度将其滴入1.5CaCl2溶液中，边滴边摇动三角瓶，即可制得直径为3mm左右的凝胶珠。在CaCl2溶液中钙化30min，即可使用。,四、实验方法和步骤,加热使海藻酸钠溶化是操作中最重要的一环一定要溶解彻底，在溶解过程中不断搅拌，在降温过程中不能低于45，否则会凝固。,五、注意事项,海藻酸钠的浓度涉及到固定化细胞的质量如果海藻酸钠浓度过高，将很难形成凝胶珠；如果浓度过低，形成的凝胶珠所包埋的酵母细胞的数目少，影响实验效果。,五、注意事项,刚形成的凝胶珠应在CaCl2溶液中浸泡一段时间，以便形成稳定的结构检验凝胶珠的质量是否合格，可以使用下列方法。一是用镊子夹起一个凝胶珠放在实验桌上用手挤压，如果凝胶珠不容易破裂，没有液体流出，就表明凝胶珠的制作成功。二是在实验桌上用力
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