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文档简介

DNA的Feulgen染色法,1.了解Feulgen染色反应原理；2.掌握Feulgen染色的方法，观察染色结果。,实验目的,DNA经弱酸（lmolLHCI）水解,其上的嘌呤碱和脱氧核糖之间的配糖键打开,使脱氧核糖的一端形成游离的醛基,这些醛基在原位与Schiff试剂(无色品红亚硫酸溶液)反应,形成紫红色的化合物,使细胞内含DNA的部位呈紫红色阳性反应.,实验原理,碱性品红为红色，结构如图1中A，A与能产生SO2的试剂作用后（如偏重亚硫酸钾与盐酸作用，还原出SO2），双链打开，成为无色的Schiff试剂，Schiff试剂的结构如图中B所示，B分子再与2个醛基（DNA水解后释放出的醛基）结合又出现双链，成为结构如图中C所示的化合物，呈紫红色。,图1Feulgen反应的染色原理,DNA染色后，除形成紫红色C化合物外，必然有多余的A和B分子，B分子很容易被氧化转变为A有色分子，从而造成伪差。因此必须迅速地多次用现配的SO2水清洗，使A分子转变为无色的B分子，消除染色的伪差。,本次实验对照组的设立：不经稀酸水解；预先用热三氯醋酸或DNA酶处理，抽提去细胞中的DNA，而得到阴性反应，从而证明了Feulgen反应的专一性。,实验用品,材料洋葱内表皮试剂Carnoy固定液lmol/LHClSchiff试剂亚硫酸水溶液(漂白液)0.5%固绿染液,实验方法：,取材（洋葱内表皮）固定1015分钟对照2水洗2分钟5%三氯醋酸90度15分钟对照水解(1MHCl)（置室温1分钟后，608分钟）1水洗（可省）反应(Schiffs)（暗袋中40分钟）洗涤(亚硫酸水)洗三次，每次5分钟水洗5分钟复染（0.5固绿)1分钟水洗镜检实验组：细胞核呈紫红色，核仁及细胞质呈绿色,1.取材薄，幼嫩，大小合适。2.固定剂以Carnoy固定最合适，涂片可用甲醇固定。3.水解时间勿过短或过长。4.Schiff试剂质量可靠，无色，强刺激气味，密封，避光使用保存（6个月）。5.洗涤剂现用现配，保持有足够的二氧化硫浓度。6.认真做对照，以示阳性反应的真实性。7.对照组不可反应40分钟以上
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