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文档简介

细胞周期同步化,1.主要内容2.同步化的方法讲解人生工二班0912402045陈春玉,内容,细胞周期同步化是为了某种目的，使处于细胞周期不同阶段的细胞群体中的所有细胞，处于细胞周期的同一时期的过程。有自然同步化和人工同步化,同步化方法,1.自然同步化2.人工同步化（1）人工选择同步化（2）人工诱导同步化,1.自然同步化,自然同步化在自然界中，细胞自然同步化的现象在动、植物及粘菌中都有所发现，它们不受人为条件的干扰，因而有可能在接近自然的条件下进行观察。缺点：自然同步化受到很多条件的限制。,（1）.人工选择同步化,人工选择同步化：人为的将处于不同细胞周期的细胞分离开，从而获得不同时期细胞群体的方法。人工选择同步化的方法：（1）.有丝分裂选择法密（2）度梯度离心法,有丝分裂选择法（反复振摇法）,利用有丝分裂细胞变圆隆起，与培养皿的附着性降低的特点。此法的特点是细胞不受药物等的伤害，同步化程度高，放入37环境中，收集的细胞即可同步分裂。缺点是分裂细胞一般占1%-2，分离的细胞数量少。,密度梯度离心法,根据周期时相不同而细胞大小不同。此法的优点是：简单、成本低。缺点是：同步程度有限，因同一时相的细胞大小并非都一致，而且对大多数种类的细胞不适用。,（2）人工诱导同步化,2.1S期DNA合成阻断法2.2DNA分裂中期阻断法2.3条件倚赖性突变株,2.1S期DNA合成阻断法,2.1.1S期DNA合成阻断法：选用DNA合成抑制剂可逆地抑制DNA合成而不影响其他期细胞沿周期运转，最终可将细胞群体阻断在S期。高浓度TdR对S期细胞的毒性较小，阻断效果较好，因此成为较常使用的S期阻断剂,2.1.2TDR双阻断法:是最常使用的方法向对数增殖期的培养细胞的培液中加入TdR，使细胞阻于S期和G1-S期交界处。移去TdR，洗涤细胞。当释放时间大于ts时，所有细胞均脱离S期，这时再给予第二次TdR阻断。细胞群体再经过G2+M+G1的时间，则细胞阻断于G1-S交界处的一个狭窄的区段中（tG1+tG2+tmts）。,DNA合成阻断法优缺点,优点：同步化程度高，适用于任何培养体系，可将几乎所有的细胞同步化。缺点：诱导过程造成细胞非均衡生长(蛋白质、RNA合成并不停止)，细胞体积增大，较正常细胞在周期上有差异，有时出现有丝分裂和染色体的异常。,2.2DNA分裂中期阻断法,某些药物可抑制微管的聚合，将细胞阻断于有丝分裂中期。非平衡生长问题不十分明显。但长时阻断释放后许多细胞不能恢复正常的细胞周期。中期阻断药物最常用者为秋水仙素或其衍生物秋水仙酰胺。,DNA分裂中期阻断法的优缺点,优点：操作简便，效率高缺点：这些药物的毒性相对较大，若长时阻断释放后许多细胞不能恢复正常的细胞周期运转。,2.3条件倚赖性突变株在
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