CellSearch技术原理和系统简介.ppt

CellSearch技术原理及系统简介,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,肿瘤生理学,身体由4类基本组织构成:-上皮组织-结缔组织-肌肉组织-神经组织上皮细胞覆盖身体表面、体腔和腺体肿瘤可能在任何组织上发生然而，在45岁之前，超过90%的肿瘤均源于上皮细胞,循环肿瘤细胞CTC,肿瘤乳腺癌前列腺癌结肠癌肺癌卵巢癌胰腺癌头颈部癌,CTC指自发或因诊疗操作进入外周血循环的肿瘤细胞进入循环的肿瘤细胞绝大多数在短期内死亡。只有极少数具有高度活力、高度转移潜能的肿瘤细胞在循环系统中存活下来，相互聚集形成微小癌栓，并在一定条件下发展为转移灶。因此，在外周血中检测到肿瘤细胞预示着有可能发生肿瘤转移。,证实的临床应用价值无进展生存期总体生存率治疗监测潜在的临床应用价值分期诊断,过去CTC用于临床的障碍,结果缺乏一致性方法差异样本保存不良样本规模样本类型研究设计随访时间,由于在循环肿瘤细胞分离的实验室方法上存在不一致和差异，因此需要实现:自动化标准化,CellSearch系统,CellSearch是计数分析循环肿瘤细胞（CTC）的全新产品由强生公司麾下的Veridex公司开发全球第一个也是唯一经过FDA批准用于恶性肿瘤管理的检测血液中循环肿瘤细胞（CTC）的商业化产品美国克里夫兰医学中心ClevelandClinic“2009年十大医学创新技术”第一名（TopTenMedicalInnovation)PrixGalien委员会2009年“最佳医学技术奖”（BestMedicalTechnology）,为什么选择CellSearch系统,为什么要选择使用CellSearch系统?唯一的标准化，自动化循环肿瘤细胞计数系统CellSearch系统已经被证明可以预测无进展生存期和总生存期临床应用转移性癌症的监护无进展生存期总生存期未来:疾病管理,CellSearch技术基本原理,利用免疫纳米磁颗粒富集上皮来源的细胞纳米磁颗粒包含一个纳米铁磁核心，外面包被了抗EpCAM（上皮细胞粘附因子）的特异性抗体通过抗原抗体反应，纳米磁颗粒会与血液中的所有表达EpCAM的细胞结合结合荧光染料的抗CD45和抗细胞角蛋白（CK）8，18/19与细胞核DAPI荧光染色试剂共同识别CTC不同的试剂盒会使用不同的荧光染料,循环系统细胞分析过程,抗EpCAM纳米磁颗粒与上皮细胞结合示意图CellSearch专利的捕获增强剂可以促进纳米磁颗粒与上皮细胞更好的结合,抗EpCAM纳米磁颗粒示意图,CTC细胞,抗EpCAM纳米磁颗粒,CTC免疫荧光染色示意图,CTC+HER-2,CTC的免疫荧光染色特性：EpCAMCKDAPICD45白细胞的免疫荧光染色特性：EpCAMCKDAPICD45,CellSearch自动样本处理过程,自动化获取结果,系统自动将被捕获的、经过染色的细胞置入MagNest装置的样本盒中由于MagNest的磁场作用，捕获的靶细胞将移动至样本盒的分析表面，形成单细胞层系统自动分析后得到结果并由操作人员进行最终判读,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,CellSearch系统概览,CellSave储存管,含有EDTA和专利的细胞防腐剂保护循环肿瘤细胞(CTC)的形态和抗原表达样本在室温（1530）条件下储存的稳定时间可达96小时，便于运输,CellTracksAutoPrep系统1,完全自动化的样本制备装置，用于对循环肿瘤细胞进行捕获和染色可对8个样本进行批处理，允许完全无人值守运行通过完整的过程控制，可对循环肿瘤细胞样本进行标准化的分析前制备,机器尺寸:173cmx68cmx68cm重量:136kg要求保持电压恒定提供了UPS电源装置需要的仪器流体仪器缓冲液去离子水次氯酸钠，浓度为5.25%或6.15%,CellTracksAutoPrep系统2,CellTracksAnalyzerII分析仪,用于对经过免疫磁颗粒捕获、荧光染料标记的循环肿瘤细胞进行计数。使用4个滤光片对样本盒的整个表面进行扫描，并对4个滤光片的图像进行整理，供用户进行最终的细胞分类。当形态特点和染色类型与上皮细胞相符时，用户即可将相关细胞归类为循环肿瘤细胞。,MagNest磁孵育装置,恒定的强磁场将被捕获的靶细胞移动至样本盒的分析表面MagNest装置在转入细胞后需要置于暗处至少孵育20分钟，形成单层细胞分析面MagNest装置上带有数据芯片，可以自动记录样本信息,CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒,CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒包含循环肿瘤细胞的捕获试剂和免疫荧光染色剂试剂盒还包含CellTracks样本盒，用于在CellTracksII分析仪上进行循环肿瘤细胞分析及用于样本制备的锥形管试剂盒可进行16次检测,CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒,CellSearch循环肿瘤细胞质控试剂盒,质控试剂盒旨在监控系统运行情况和操作人员的操作方法包含供一次性使用的质控瓶，内装来自乳腺肿瘤细胞株的固定细胞每个质控瓶含有两种浓度不同的细胞，用于高水平和低水平质控试剂盒组成24个质控瓶24个条形码包装说明书,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,CellSearchCTC试剂盒提供的材料,包装说明书3.0毫升瓶装抗-EpCAM纳米磁颗粒(黄色瓶盖)3.0毫升瓶装染色试剂(白色瓶盖)3.0毫升瓶装核酸染料(蓝色瓶盖)3.0毫升瓶装捕获增强试剂(透明瓶盖),3.0毫升瓶装透化试剂(绿色瓶盖)3.0毫升瓶装细胞固定剂(红色瓶盖)2瓶110毫升稀释缓冲液16支15毫升锥形管(及管盖)16个样本盒(及塞子),CellSearchCTC试剂盒详细介绍,试剂,用于CellTracksAutoPrep系统的试剂托盘。上有数据芯片，自动记录试剂信息,盒内试剂,细胞固定剂对细胞进行固定，以便于辨别和计数,抗-EpCAM纳米铁磁颗粒能够与上皮细胞粘附分子(EpCAM)结合的单克隆抗体包被的磁性纳米微粒可针对肿瘤细胞进行选择性捕获。,捕获增强试剂专利试剂，增强纳米磁颗粒与EpCAM抗原的结合,透化试剂使用专利试剂可透过细胞膜，以便于染色试剂渗透。,染色试剂荧光标记的单克隆抗体CK-PE和CD45-APC;对循环肿瘤细胞和白细胞进行染色处理。,核酸染料用于细胞核染色的DAPI染色液。,盒内耗材,16支锥形管和管盖，将患者样本进行转移，用于CellTracksAutoPrep系统。16个样本盒和塞子，将样本放入样本盒，用于CellTracksAnalyzerII分析仪分析。,注意事项,试剂盒储存于2-8摄氏度。开瓶后稀释缓冲液存于室温（1530）。开瓶试剂盒的稳定时间为30天。只能使用CellSave储存管采集样本。,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,CTC临床意义,体检（体外早期诊断）对于肿瘤的常规检测手段来讲，例如影像学。肿瘤在小于一公分的情况下，医生也不认为它是异常。通过国外发表的文章可以看到，不要说是一公分，很多肿瘤在一个毫米的情况下已经在血液里查到循环肿瘤细胞，从这个角度讲，它对于早期诊断来讲有不可低估的意义。,CTC临床意义,辅助诊断手段从临床来讲，要确定一个病人是不是得了肿瘤，一直是一个很难明确回答的问题，这就会对很多病人造成误诊。现在发现，在很多难以确诊的病人的血液中，如果说能够检查到循环肿瘤细胞，那对于配合医生下肿瘤诊断的结论是具有积极意义的。,CTC临床意义,根据循环肿瘤细胞的个数判断愈后及存活时间循环肿瘤细胞的应用使人们第一次可以以一个量化的指标告诉医生和病人他的存活时间。,CTC临床意义,个体化治疗：个体化治疗指的是针对每一个不同的肿瘤病人，医生开出不同的治疗方案。目前在医院，一般都是医生根据经验来决定给病人用何种化疗药物，但有没有效并不知道。随着CTC捕获技术的成熟，人们开始考虑是否可以把CTC作为个体化治疗的基础。即先将CTC捕获出来进行培养，培养好了以后进行药理实验，在此基础上还可以做化疗药效的快速评估。,CTC临床意义,快速判断化疗效果3monthsVS3weeks,CTC临床意义,体内耐药性检测：对于肿瘤治疗病人会不会产生耐药以及什么时候产生耐药是未知的！对CTC实施动态监控，持续跟踪观察，一旦发现CTC数目显著增加，就应该及时更换新的治疗方案。,CTC临床意义,检测肿瘤复发：肿瘤病人经过治疗以后，在恢复的过程中会不会肿瘤复发？以及什么时候复发？对于治疗过的病人，他体内的循环肿瘤细胞应该是没有或者只有极少的数目，如果在他今后的生活过程中检测到循环肿瘤细胞持续增多，这就给病人和医生都敲响了警钟，CTC的增多很可能是肿瘤复发的前兆或复发的过程。,CTC临床意义,CTC可以作为药物靶向治疗新的靶向：实体肿瘤细胞VSCTC,主要内容,CellSearch技术原理CellSearch系统简介CellSearch循环肿瘤细胞试剂盒介绍CellSearch系统临床应用CellSearch送样指南,送样指南,取样最