第八章 糖和苷 01b 修改稿

.,1,要求：能设计提取分离流程作业,提取分离上述天然药材中的苷类成分,试写出流程图。简要说明各步主要目的和原理,.,2,8.5糖和苷的分离方法(II)-按分离目的分类,8.4糖和苷的分离方法(I)-按分离原理分类,.,3,分离目的:1.2.,分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷,去非糖杂质制备总糖、总苷,常用方法?,试写出分离纯化糖类物质的,参考总论的思路框架,检查,.,4,.,5,.,第八章糖和苷8.1结构与分类（复习）掌握8.2理化性质熟悉、了解8.3提取方法掌握8.4分离方法(I)掌握8.5分离方法(II)掌握8.6检识方法熟悉、了解,各论,-按分离原理分类,-按分离目的分类,试写出糖类常用分离方法，下同,.,7,8.4糖和苷的分离方法(I)-按分离原理分类,8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离,（试简述）,.,8,8.4.1.1溶剂处理法8.4.1.2试剂沉淀法,一.二.三.,8.4.1利用溶解度差异分离,一.铅盐沉淀法二.铜盐-三.加蛋白-剂,抽提法,沉淀法,萃取法,（试简述）,.,9,一.溶剂抽提法,-梯度-分步-,1.用途:(1)去杂质：多为油脂类（脱脂）(2)分离：苷元；单糖苷或少糖苷；“多糖”苷。,2.原料：醇提物（混合物）3.流程实例：见下页,.,可抑制酶解,天然药材,乙醇提取,乙醇提取液,减压浓缩,浓缩物,(醇提物),见讲义,(1)去杂质：强亲脂性（脱脂）(2)分离：苷元/“多”糖苷/“少”糖苷或单糖苷,（）,石油醚提取,残留物,.,11,石油醚部分（多为强杂质）,目的,（脱脂）,可抑制酶解,亲脂性,残留物,天然药材,乙醇提取（）,乙醇提取液,减压回收乙醇,浓缩物,石油醚提取,t2O或HCl3提取,提取物（含）,苷元,(醇提物),见讲义,.,12,EtOAc提取,n-BuOH提取,残留物,EtOAc提取物（含或）,残留物,提取物（）,（）,残留物,小分子成分,含糖较多的苷,单糖苷,少糖苷,含,.,13,上一页,注：(1)各部分都有获得苷的可能。,(2)也可用水提分级法可初步分离各种不同性质的多糖,依次用冷水、冷稀碱液、热水、热稀碱液进行抽提分离,得到不同性质的多糖后,再合用它法纯化。,.,14,要求：能设计提取分离流程作业,提取分离上述天然药材中的苷类成分,试写出流程图。简要说明各步主要目的和原理,.,15,8.4.1.1溶剂处理法8.4.1.2试剂沉淀法,一.二.三.,8.4.1利用溶解度差异分离,一.铅盐沉淀法二.铜盐-三.加蛋白-剂,抽提法,沉淀法,萃取法,（试简述）,.,16,二.溶剂沉淀法分级沉淀法（分级溶解法）(一)水提醇沉法(二)醇溶醚沉法应用（用途）：分离多糖(分子量不同的各类多糖)溶解性不同,.,17,(一)水提醇沉法-乙醇分级沉淀（或分级溶解法）,实验装置图:,.,18,药材,水提,浓缩,浓缩液,(含混合多糖),逐次加乙醇（等量或数倍量）分别达到不同浓度,分段醇沉分段收集,一般分子量不同,.,19,注意事项：1.pH：通常是pH（稳定，免酸解）酸性多糖：pH（pH时，以离子形式存在，成盐，并非多糖原型）2.操作迅速，以免酸水解。,.,20,(二)醇溶醚沉了解,?,.,21,多糖,转化,多糖衍生物醇溶液,（如甲醚化合物、或乙酸酯等乙酰化合物）,分段醚沉分段收集,不同多糖粗品沉淀,反复醇溶醚沉,（直至物理常数恒定，如旋光度测定，电泳检查等）,终产品,（HPLC测定纯度）,.,22,二.溶剂沉淀法分级沉淀法（分级溶解法）(一)水提醇沉法(二)醇溶醚沉法应用（用途）：分离多糖(分子量不同的各类多糖)溶解性不同,.,23,.,24,溶剂处理法,一.抽提法二.沉淀法比较三.萃取法,利用溶解度差异分离,.,25,.萃取法原料：多糖水提液（浓缩液）应用：似抽提法溶剂：似抽提法，尤其是n-BuOH多用注意：应防止水解,.,26,8.4.1.1溶剂处理法8.4.1.2试剂沉淀法,一.溶剂抽提法二.溶剂沉淀法三.溶剂萃取法,8.4.1利用溶解度差异分离,一.铅盐沉淀法二.铜盐沉淀法三.加蛋白沉淀剂,.,27,8.4.1.2试剂沉淀法,一.铅盐沉淀法沉淀杂质，沉淀多糖中性醋酸铅:沉淀酸性成分(包括酸性多糖)碱式醋酸铅:沉淀酸性成分(包括酸性多糖)及部分中性成分(包括中性多糖),.,28,沉淀,母液（H2S脱铅）,含单糖、低聚糖、水溶性较大的中性苷类,.,29,二铜盐沉淀法沉淀多糖（与水溶性成分分离）硫化氢分解去铜*,.,30,分级沉淀法多糖通常有何杂质?答案:Pr怎样去除?答案:,.,31,三.加蛋白沉淀剂原料：多糖（分级沉淀法得到）要求：只沉淀Pr，不沉淀多糖(较难)种类：,.,32,（1）酸法,（2）温和法（3）酶法,蛋白沉淀剂,#,.,33,（1）酸法酸性试剂酚或三氯乙酸、鞣酸等。,（2）温和法“三氯”类试剂三氟三氯乙烷法或者Sevag法（氯仿：戊醇4：1）丁醇（3）酶法蛋白水解酶+Sevag法注意事项：酸法应低温、短时、避免多糖降解。,蛋白沉淀剂,.,34,.,35,8.4.1.1溶剂处理法8.4.1.2试剂沉淀法,一.溶剂抽提法二.溶剂沉淀法三.溶剂萃取法,8.4.1利用溶解度差异分离小结,一.铅盐沉淀法二.铜盐沉淀法三.加蛋白沉淀剂,.,36,.,37,8.4糖和苷的分离方法(I)-按分离原理(或分离方法)分类,8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离,.,38,8.4.2利用酸碱性或解离度差异分离利用酸碱性差异8.4.2.1铅盐沉淀法（同前述）盐沉淀法8.4.2.2季铵氢氧化物沉淀法碱沉淀法利用解离度差异8.4.2.3离子交换法(1)离子交换法(2)离子交换纤维素法(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法,8.4.1.2试剂沉淀法,.,39,8.4.2.2季铵氢氧化物沉淀法碱试剂沉淀法是一类乳化剂结构式见教材应用：分离酸性、中性多糖，,并可再进一步细分为,不同类别的多糖。,.,40,原理：1.季铵氢氧化物通常只与酸性多糖生成沉淀,使之分离。2.升高PH，某些中性糖也能被沉淀。（-OH的解离度增大），方法：在不同pH下分步沉淀（酸性、中性、微碱性、碱性等）得到不同多糖。,-pH梯度沉淀法,.,(),利用解离度差异：,8.4.2.3离子交换法,应用：,1.去杂质,2.分离糖类,酸、碱、盐,注意事项：树脂选型,是否解离？,需改进应用,可解离杂质,(2)离子交换纤维素法,(3)硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂,组合法,增大解离度,络合,(1)离子交换法,.,42,(2)离子交换纤维素法阳-阴-常用型号：教材(3)硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂洗脱：不同浓度的硼酸盐溶液应用：单糖、低聚糖效果好缺点：洗脱液多后处理烦,.,利用酸碱性差异8.4.2.1铅盐沉淀法（同前述）盐沉淀法8.4.2.2季铵氢氧化物沉淀法碱沉淀法利用解离度差异8.4.2.3离子交换法(1)离子交换法(2)离子交换纤维素法(3)使用硼酸处理的强碱性阴离子交换树脂法,方法用途,8.4.2利用酸碱性或解离度差异分离,.,44,.,45,8.4.3利用吸附性差异活性炭吸附法纤维素柱层析见教材,静态-动态-,.,46,8.4.3.1活性碳静态吸附应用：去非糖杂质，对水溶性低聚糖几乎无不良影响注意事项：须用动物性骨碳否则对蔗糖吸附较多（回收率低，仅4387%）,.,47,8.4.3.2活性碳动态吸附（活性碳柱层析）应用：分离？分子量不同的成分去杂质：去无机盐，水洗最洗下分离糖：分离单糖和低聚糖（含单糖数目多者，下）,先,后,原理：选择性吸附,.,48,洗脱操作：水洗，除无机盐，得单糖渐增洗脱液中的乙醇浓度,逐步洗出二糖、三糖、及更大低聚糖,.,49,注意事项：活性炭预处理，除金属离子：盐酸液煮沸，水洗23mol/L需增加洗脱速度：（）装柱，拌等量硅藻土，弊，吸附容量降（）用稍粗的炭，-目,*,.,50,8.4.4利用差异,（分子量）,凝胶层析法（Gelfiltration）,应用：1.去杂质，无机盐及小分子化合物（进入凝胶内部）2.分离糖、苷,.,51,2.分离糖、苷(1)分子量不同例，低聚糖、苷、或多糖。大分子（）洗下，比较活性炭法：大分子（）下,先,后,?,吸附力强,（2）分子形状不同：如直链和支链多糖支链糖（）下,先,.,52,注意事项：凝胶选型,分离低聚糖和苷：用孔隙（）的-多糖-（）-多糖纯化去杂质-（）-,小,大,小,.,53,.,54,.,55,8.4糖和苷的分离方法(I)-按分离原理(或分离方法)分类,8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离,8.5糖和苷的分离方法(II)-按分离目的分类,.,56,8.5糖和苷的分离方法(II)-按分离目的分类8.5.18.5.2,分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷,去非糖杂质制备总糖、总苷,.,57,8.5.1除去非糖杂质的方法-制备总糖、总苷思路?寻找差异二者性质差异,.,成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量,分离方法,成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量,亲水,中性,酸性碱性中性,极性大,极性较大,不解离,小分子或大分子,分离方法,.,成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量,亲水,中性,酸性碱性中性,极性大,极性较大,不解离,小分子或大分子,.,成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量,亲水,中性,酸性碱性中性,极性大,极性较大,不解离,小分子或大分子,分离方法,.,(利用差异）,注意正确判断差异类型,分离目的方法举例,除亲脂性杂质,溶剂法吸附法,亲脂性溶剂抽提、萃取(例如石油醚脱脂)活性炭吸附静态或动态,极性,糖和苷的精制,(利用差异）,除亲水性杂质,溶剂法吸附法,正丁醇萃取提苷活性炭层析,极性,.,63,分离目的分离方法洗脱顺序及原理,除无机盐,离子交换法活性碳层析凝胶层析,后下先下后下,三种方法两类层析,被交换吸附,分子量小吸附弱,进入凝胶内部,(可解离小分子）,.,64,练习题简述脱盐常用方法及其洗脱顺序,.,65,不沉淀,酸碱性成分被交换吸附,中性糖苷成分流出除酸性成分()离子树脂除碱性成分()离子树脂,除去酸碱性成分及部分中性成分,铅盐沉淀,酸性、酚性成分含酸性多糖,酸根-阴,阳离子+阳,法,离子交换法,碱式醋酸铅,中性醋酸铅,另沉淀中性、成分含中性多糖,目的方法分离效果等,沉淀,单糖、低聚糖、极性大的苷,.,66,分子量大的杂质下分子量小的杂质下,粗分：醇沉蛋白沉淀剂透析法,细分凝胶法活性炭,沉淀多糖、蛋白质精制单糖低聚糖和苷用于精制多糖（只沉蛋白，不沉多糖）,.,67,1.酚或者三氯乙酸鞣酸等酸性试剂2.三氟三氯乙烷法或Sevag法（氯仿：戊醇4：1）丁醇“三氯”类试剂3.酶法酶+Sevag法,蛋白沉淀剂：#,.,成分亲水/亲脂酸碱性解离度分子量,亲水,中性,酸性碱性中性,极性大,极性较大,不解离,小分子或大分子,分离方法,.,8.5.2分离混合糖类或苷类-总糖、总苷,8.5.2.1分离为单糖、低聚糖、多糖1醇沉法（）糖可溶（）糖沉淀粗分,多,单糖、低聚,小,多,再分离,考点勿背理解,2活性炭层析3凝胶法选用（）孔隙（）糖先下细分,.,70,8.5.3单糖、低聚糖再细分活性炭层析吸附性差异凝胶层析离子交换层析改进离子交换纤维素硼酸处理-树脂,.,71,8.5.4多糖再分离（两类沉淀两类层析）粗分：醇沉：乙醇分级沉淀法（或乙醚分段沉淀法）不同分子量：季铵氢氧化物分段沉淀法不同酸碱性OH、POH细分：离子交换纤维素层析法凝胶层析法,.,72,8.5.5分离实例见教材能读懂会仿制,.,8.4糖和苷的分离方法(I)分离原理不同,8.4.1利用溶解度差异分离8.4.2利用酸碱性差异分离或解离度8.4.3利用吸附性差异分离8.4.4利用分子量差异分离,8.5糖和苷的分离方法(II)分离目的不同,分离混合糖类或苷类细分总糖、总苷,去非糖杂质制备总糖、总苷,8.5.18.5.2,.,74,第八章糖和苷,各论,结构性质提取分离检识,多羟基醛酮及其脱水缩合物,亲水中性,溶