动物细胞融合与单克隆抗体课件(用).ppt

选修3：专题2细胞工程动物细胞融合与单克隆抗体,生物种间杂交想像图,已成功的动物细胞融合实例有很多，如人小鼠、人兔、人鸡、鼠兔、鸡鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌鸡、人胡萝卜等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。,有梦想，才会有创造！,一、动物细胞融合,请同学们阅读课本P52动物融合,1.概念：,动物细胞融合（cellfusion）也称细胞杂交，是指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。,融合和形成的具有原来两个或多个细胞遗传物质的单核细胞，称为杂交细胞。,2、原理：,细胞膜的流动性,一、动物细胞融合,3、动物细胞融合过程,为什么灭活的病毒能作诱导剂？,灭活丧失感染性保留融合活性,二.动物细胞融合,诱导融合的方法,物理法：化学法：生物法：,电激、离心、振动,聚乙二醇（PEG),灭活的病毒,4.意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。,5.应用：最重要的用途是制备单克隆抗体,总结：比较植物体细胞杂交和动物细胞融合,细胞膜的流动性、植物细胞的全能性,细胞膜的流动性,用纤维素酶、果胶酶去壁,用胰蛋白酶使细胞分散,物理、化学方法,物理、化学、生物方法,获得部分或完整植株,主要用于制备单克隆抗体,二、单克隆抗体,什么是单克隆抗体,单：克隆：抗体：,单个细胞？,无性繁殖,抗原抗体,特异性结合,抗体是由何种细胞产生的？2.抗体是如何产生的？,单克隆抗体,抗体不纯,筛选单一浆细胞,不能增殖产生大量抗体,产量少、纯度低、特异性差,单克隆抗体,4、传统制备抗体的缺点是？,3、传统制备抗体的方法是？,如何获得化学性质单一、特异性强的抗体？,单克隆抗体,问题讨论,提示：,1.什么样的细胞可以产生抗体？2.什么样的细胞可以无限增殖？,设计方案：一个B淋巴细胞:只分泌一种特异性抗体小鼠骨髓瘤细胞:能无限增殖,杂交瘤细胞,单克隆抗体,既能无限增值又能产生特异性抗体,特点,BBBB瘤瘤瘤瘤,细胞融合后培养液中有几种细胞？,已知细胞合成DNA有D和S两条途径，其中D途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两条DNA合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加PEG促融，获得杂种细胞。,单克隆抗体,思考：,单克隆抗体,思考：,1.小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合？2.制备过程中应用哪些细胞工程技术手段？,细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活,细胞融合技术、细胞培养技术,单克隆抗体,在基础理论研究中具有重要意义在疾病诊断、治疗和预防方面，具有特异性强、灵敏度高等优越性。生物导弹（作为载体，运载抗癌药物，形成“生物导弹”治疗肿瘤）,单克隆抗体的应用,动物特异性免疫分离B淋巴细胞（B）；找到骨髓瘤细胞（G）。注意B淋巴细胞是一个系列。（B1,B2,B3,-Bn）细胞融合三种融合方式:（BB;BG;GG）第一次筛选：在“选择培养基培养”上培养筛选杂交瘤细胞（只有BG杂交瘤细胞存活。但BG杂交瘤细胞也是一个系列：如B1G,B2G-BnG。而BB,GG在此培养基上不能存活。）第二次筛选：在“多孔培养板上”培养杂交瘤细胞系列，每孔只放一个杂交瘤细胞。“克隆化培养”每个杂交瘤细胞，并进行“单一抗体检测”，“检测阳性”的孔内即是所需要的杂交瘤细胞。选择所需要的杂交瘤克隆细胞群，体外培养或注射到小鼠腹腔内增殖。提取单克隆抗体。,单抗的制备过程要点：,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的实验方案,3、图中B为_过程，常用_作为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，既能_,又能_。,1、该实验方案的目的是_,2、A是从小鼠的脾脏中取得_,该细