细胞培养的应用和培养细胞的特性及条_第1页
细胞培养的应用和培养细胞的特性及条_第2页
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细胞培养,为什么要做细胞培养？,细胞在体外生长的基本条件,培养细胞的特性,主要讲3方面问题：,细胞培养的有益应用,细胞培养应用前景：（1）保存优良的动物品种（2）拯救濒临灭绝的珍惜动物（3）利用克隆动物工厂生产蛋白质药物（4）利用克隆技术生产人体器官,动物细胞规模化培养与现代医药,治疗性抗体,抗体药物,培养条件下细胞的特性,离体培养的动物细胞可分为：贴壁依赖型(anchorage-dependent)非贴壁依赖型(anchorage-independent)兼性贴壁细胞,1）贴壁依赖型简称为贴壁细胞，包括成纤维细胞型、上皮细胞型、游走细胞型、多形性细胞型。,2）非贴壁依赖型也称悬浮型，这类细胞培养时不贴附于支持物上，可在培养液中悬浮生长。来源于血液、淋巴组织的细胞，许多肿瘤细胞等均属于此类，细胞一般呈圆形。3）兼性贴壁细胞动物细胞培养中，有些细胞呈现双重性，既可以贴壁生长，也可以悬浮培养，如中国地鼠卵巢细胞、小鼠L929细胞等。,培养条件下动物细胞的生理特点,1）动物细胞的分裂周期长动物细胞分裂周期一般为1248小时，它不仅随细胞种属的不同而有差异，即使是同一种属，不同部位的细胞所需的时间也不同。此外，培养条件如温度、pH、培养基的成分等，也会影响分裂周期的长短。,2）接触抑制(contactinhibition)现象除少数悬浮培养细胞外，大多数正常二倍体细胞的生长都需要在一定的基质（如玻璃、塑料等）上贴附，伸展后才能增殖。当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称之为接触抑制或密度依赖抑制现象。,动物细胞的环境敏感性动物细胞与微生物和植物细胞相比，其培养难度要大一些，其主要原因是动物细胞只有细胞膜，而没有细胞壁的保护。动物相比对培养环境十分敏感，一切影响细胞膜变形的因素都会影响动物细胞存活。动物细胞培养对营养条件的要求也十分复杂。,1.动物细胞培养的环境要求,1）无污染环境2）温度昆虫细胞培养温度一般是2528哺乳动物细胞的培养温度一般是37。总体上讲，动物细胞忍受低温的能力比忍受高温的能力强。如哺乳动物细胞在45下只能存活1小时，但在25条件下仍然能慢速生长，并维持长时间不死，甚至在4下数小时后，再置于适宜温度下细胞仍然可以正常生长。液氮冻存。,3）pH动物细胞培养适宜的pH一般在7.2-7.4，低于6.8或高于7.6都不利于细胞生长，严重时会导致细胞死亡。培养细胞对pH的要求因培养时间长短有关，一般原代细胞要求较严格，而永久细胞系对pH具有较强的忍耐性。,4）气体环境及溶氧一般细胞在培养初期要求较低的溶氧水平，而在对数生长期或培养后期，对溶氧水平要求增加，如果供氧不足，将导致细胞缺氧而死亡。除了氧气供应外，还应注意培养基的氧气和CO2的平衡。,5）渗透压动物细胞培养渗透压包括两个方面的问题：培养基的渗透压维持细胞体内的渗透压维持大多数动物细胞对渗透压
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