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文档简介
.,蛋白质连接技术,.,蛋白质交联系指将小分子物质(如药物、半抗原等)或大分子物质(如酶、蛋白毒素等)以共价键的方式连接于蛋白质分子,以制备人工抗原、酶标抗体、载体释放药物、抗体导向药物和免疫毒素等。,.,交联方法,游离氨基游离羧基苯基酚基巯基羟基咪唑基吲哚基胍基,.,重氮化法:蛋白质连接分子酚羟基的邻位、咪唑环、吲哚环含芳香胺的化合物,副反应多,故一般限于人工抗原的制备,.,戊二醛法:连接两个伯胺,最温和的交联反应之一,可在440温度范围,pH6.08.0的缓冲水溶液中进行,但是缓冲组份中不得含有氨基化合物,本交联方法易形成相同蛋白间的连接;产物的均二性较差。因此,多用于酶标抗体的制备。,.,过碘酸盐氧化法:,蛋白质连接分子氨基邻二醇,比较温和,可在常温和中性pH的条件下进行,.,混合酸酐法:,蛋白质连接分子伯氨基羧基,.,碳二亚胺法:,蛋白质连接分子伯氨基羧基,由于碳二亚胺的缩合反应没有选择性;易形成蛋白分子间的自身聚合,产生非均一性产物;先将含羧基的药物或半抗原分子与EDC反应,活化羧基后,再加入蛋白反应物,可以减少蛋白分子交联,.,活泼酯法:,蛋白质连接分子伯氨基羧基,.,多元酸酐法:,蛋白质连接分子伯氨基氨基、羟基,.,二异氰酸酯法:,蛋白质连接分子伯氨基氨基,.,偶氮苯甲酸法:,蛋白质连接分子伯氨基苯基,.,O羧甲基羟胺法:,蛋白质连接分子伯氨基酮基,.,对-肼基苯甲酸法:,.,叠氮化法:,蛋白质连接分子伯氨基羧酸甲酯衍生物,.,氯乙酸钠法:,蛋白质连接分子伯氨基羟基,.,亚胺酸酯法:,蛋白质连接分子伯氨基氨基,.,卤代硝基苯法:,蛋白质连接分子氨基、羟基、巯基氨基、羟基、巯基,.,Mannich反应法:,蛋白质连接分子伯氨基酮、酚类,.,苯醌法:,蛋白质连接分子氨基、羟基、巯基氨基、羟基、巯基,.,E11man试剂法:,两分子蛋白的连接,E11man试剂即55二硫2,2双硝基苯甲酸(DTNB),该试剂可以与巯基作用,.,马来酰亚胺基类活泼酯法:,蛋白质连接分子伯氨基巯基,.,SPDP试剂法:,异型双功能交联剂N-羟基琥珀亚胺基-3(2-吡啶基二硫)丙酸酯(SPDP),蛋白质连接分子伯氨基巯基、氨基,.,苯丁酸氮芥衍生物法:,蛋白质连接分子伯氨基氨基,.,卤代乙酰衍生物法:,连接基团:氨基、巯基,.,双马来酰亚胺试剂法:,连接两个巯基,.,三氯三嗪试剂法:,蛋白
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