[实验室常用洗液配制方法]实验室洗液的配制方法

实验室常用洗液配制方法实验室洗液的配制方法 一：铬酸洗液: 配制浓度各有不同，从512%的各种浓度都有。配制方法大致相同：取一定量的K2Cr2O7（工业品即可），先用约12倍的水加热溶解，稍冷后，将工业品浓H2SO4所需体积 数徐徐加入K2Cr2O7不溶液中（千万不能将水或溶液加入H2SO4中），边倒边用玻璃棒搅拌，并注意不要溅出，混合均匀，俟冷却后，装入洗液瓶备用。新配制的洗液为红褐色 ，氧化能力很强。当洗液用久后变为黑绿色，即说明洗液无氧化洗涤力。 例如, 配制12%的洗液500mL 。取60克工业品K2Cr2O7置于100mL 水中（加水量不是固定不变的，以能溶解为度），加热溶解，冷却，徐徐加入浓硫酸：mL ，边加边搅拌， 冷后装瓶备用。 二： 碱性高锰酸钾洗液 用碱性高锰酸钾作洗液，作用缓慢，适合用于洗涤有油污的器皿。配法：取高锰酸钾（KMnO4)4克加少量水溶解后，再加入氢氧化钠（NaOH) mL 。 三：纯酸纯碱洗液 根据器皿污垢的性质，直接用浓硫酸（HCL ）或浓硫酸（H2SO4) 、浓硝酸(HNO3)浸泡 或浸煮器皿（温度不宜太高，否者浓酸挥发刺激人）。纯碱洗液多采用以上的浓 烧碱（NaOH) 、氢氧化钾（KOH) 或碳酸钠（Na2CO3) 液浸泡或浸煮器皿（可以煮沸）。 四：碱性乙醇洗液 溶解120克氢氧化钠固体于120ml 水中，用95%乙醇稀释至1L 。 在铬酸洗液洗涤无效时，用于清洗各种油污；由于碱对玻璃的腐蚀，玻璃磨口不能长期在该洗液中浸泡；须存放于胶塞瓶中，防止挥发、防火，久注易失效 五：碱性高锰酸钾洗液 4克高锰酸钾固体溶于少量水中，再加入100ml10%氢氧化钠溶液 清洗玻璃器皿内的有无或其他有机物质；浸泡后器壁上会析出一层二氧化锰，需用盐酸或盐酸加过氧化氢除去 六： 磷酸钠洗液 57克磷酸钠、28克油酸钠溶于470ml 水中 清洗玻璃器皿上的残留物；浸泡数分钟后用刷子刷洗 七：酸性硫酸亚铁洗液 含有少量硫酸亚铁溶液 清洗由于贮存高锰酸及洗液而残留在玻璃器皿上的棕色污斑；浸泡后洗刷 八：硝酸过氧化氢洗液 15%20的硝酸加等体积的5%过氧化氢 清除特殊难洗的化学污物 久存易分解，应存放于棕色瓶 九：有机溶剂 如三氯乙烯、二氯乙烯、苯、二甲苯、丙酮、乙醇、乙醚、三氯甲烷、四氯化碳、汽油等 清除玻璃器皿上的油脂类、单体原液、聚合体等有机污物，应根据污物性质选者使用 注意毒性、可燃性，用过的废液溶剂应回收 十：硫代硫酸钠洗液 10%的硫代硫酸钠溶液。可清洗衣物上的碘斑，浸泡后洗刷。 玻璃砂芯器皿清洗剂 过滤沉淀物 有效清洗剂 脂肪、脂膏 四氯化碳 有机物质 混有中铬酸钾的温热浓硫酸浸泡一昼夜 氯化亚铜、铁斑 混有氯酸钾的热浓盐酸 硫酸钡 热浓盐酸 汞渣 热浓硝酸 硫化汞 热王水 氯化银 氨水或硫代硫酸钠 铝质和硅质残渣 用2%氢氟酸、浓硫酸、蒸馏水、丙酮依次漂洗，重复至无酸痕为止 细菌 5.72ml 浓硫酸、2克硝酸钠、94ml 、蒸馏水混合液 水垢 盐酸 一、玻璃仪器的洗涤方法 1. 洁净剂及其使用范围 最常用的洁净剂有肥皂、合成洗涤剂（如洗衣粉）、洗液（清洁液）、有机溶剂等。 肥皂、合成洗涤剂等一般用于可以用毛刷直接刷洗的仪器，如烧瓶、烧杯、试剂瓶等非计量及非光学要求的玻璃仪器。 肥皂、合成洗涤剂也可用于滴定管、移液管、量瓶等计量玻璃仪器的洗涤，但不能用毛刷刷洗。 洗液多用于不能用毛刷刷洗的玻璃仪器，如滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊要求与形状的玻璃仪器；也用于洗涤长久不用的玻璃仪器和毛刷刷不下的污垢。 2. 洗液的配制及说明 铬酸清洁液的配制： 处方1 处方2 重铬酸钾（钠） 10g 200g 纯化水 10ml 100ml （或适量） 浓硫酸 100ml 1500ml 制法：称取处方量之重铬酸钾，于干燥研钵中研细，将此细粉加入盛有适量水的玻璃容器内，加热，搅拌使溶解，待冷后，将此玻璃容器放在冷水浴中，缓慢将浓硫酸断续加入，不断搅拌，勿使温度过高，容器内容物颜色渐变深，并注意冷却，直至加完混匀，即得。 说明：（1）硫酸遇水能产生强烈放热反应，故须等重铬酸钾溶液冷却后，再将硫酸缓缓加入，边加边搅拌，不能相反操作，以防发生爆炸。 （2）清洁液专供清洁玻璃器皿之用，它能去污去热原的作用的原因为本品具有强烈的氧化作用。重铬酸钾与浓硫酸相遇时产生具有强氧化作用的铬酐： K2CrO7H2SO4H2CrO7K2SO4 2CrO3H2OCr2O33O 浓硫酸是一个含氧酸，在高浓度时具有氧化作用，加热时作用更为显著： H2SO4H2OSO2O K2CrO73SO2H2SO4Cr2（SO4）3K2SO4H2O （3）铬酸的清洁效力之大小，决定于反应中产生铬酐（CrO3）的多少及硫酸浓度之大小。 铬酐越多，酸越浓，清洁效力越好。 （4）用清洁液清洁玻璃仪器之前，最好先用水冲洗仪器，洗取大部分有机物，尽可能仪器空干，这样可减少清洁液消耗和避免稀释而降效。 （5）本品可重复使用，但溶液呈绿色时已失去氧化效力，不可再用，但能更新再用。 更新方法：取废液滤出杂质，不断搅拌缓慢加入高锰酸钾粉末，每升约68g ，至反应完毕，溶液呈棕色为止。静置使沉淀，倾取上清液，在160以下加热，使水分蒸发，得浓稠状棕黑色液，放冷，再加入适量浓硫酸，混匀，使析出的重铬酸钾溶解，备用。 （6）硫酸具有腐蚀性，配制时宜小心。 （7）用铬酸清洁液洗涤仪器，是利用其与污物起化学反应的作用，将污物洗去，故要浸泡一定时间，一般放置过夜（根据情况）；有时可加热一下，使有充分作用的机会。 3. 洗涤玻璃仪器的方法与要求 （1）一般的玻璃仪器（如烧瓶、烧杯等）：先用自来水冲洗一下，然后用肥皂、洗衣粉用毛刷刷洗，再用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次（应顺壁冲洗并充分震荡，以提高冲洗效果）。 计量玻璃仪器（如滴定管、移液管、量瓶等）：也可用肥皂、洗衣粉的洗涤，但不能用毛刷刷洗。 （2）精密或难洗的玻璃仪器（滴定管、移液管、量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗等）：先用自来水冲洗后，沥干，再用铬酸清洁液处理一段时间（一般放置过夜），然后用自来水清洗，最后用纯化水冲洗3次。 （3）洗刷仪器时，应首先将手用肥皂洗净，免得手上的油污物沾附在仪器壁上，增加洗刷的困难。 （4）一个洗净的玻璃仪器应该不挂水珠（洗净的仪器倒置时，水流出后器壁不挂水珠）。 实验室各种洗液 1. 铬酸洗涤液 铬有致癌作用，因此配制和使用洗液时要极为小心，常用两种配制方法如下： 取100mL 工业浓硫酸置于烧杯内，小心加热，然后慢慢加入5g 重铬酸钾粉末，边加边搅拌，待全部溶解并缓慢冷却后，贮存在磨口玻璃塞的细口瓶内。 称取5g 重铬酸钾粉末，置于250mL 烧杯中，加5mL 水使其溶解，然后慢慢加入100mL 浓硫酸，溶液温度将达80，待其冷却后贮存于磨口玻璃瓶内。 2. 其他洗涤液 工业浓盐酸：可洗去水垢或某些无机盐沉淀。 5草酸溶液：用数滴硫酸酸化，可洗去高锰酸钾的痕迹。 510磷酸三钠（Na3PO4?12H2O）溶液：可洗涤油污物。 30硝酸溶液：洗涤二氧化碳测定仪及微量滴管。 510乙二胺四乙酸二钠（EDTA-Na2）溶液：加热煮沸可洗脱玻璃仪器内壁的白色沉淀物。 尿素洗涤液：为蛋白质的良好溶剂，适用于洗涤盛过蛋白质制剂及血样的容器。 有机溶剂：如丙酮、乙醚、乙醇等可用于洗脱油脂、脂溶性染料污痕等，二甲苯可洗脱油漆的污垢。 氢氧化钾的乙醇溶液和含有高锰酸钾的氢氧化钠溶液：这是两种强碱性的洗涤液，对玻璃仪器的侵蚀性很强，可清除容器内壁污垢，洗涤时间不宜过长，使用时应小心慎重。 实验室常用溶液配制 一. 常用贮液与溶液 1mol/L亚精胺（Spermidine ）: 溶解2.55g 亚精胺于足量的水中，使终体积为10ml 。分装成小份贮存于-20。 1mol/L精胺（Spermine ）：溶解3.g 精胺于足量的水中，使终体积为10ml 。分装成小份贮存于-20。 10mol/L乙酸胺（ammonium acetate ）：将77.1g 乙酸胺溶解于水中，加水定容至1L 后，用0.22um 孔径的滤膜过滤除菌。 10mg/ml牛血清蛋白(BSA）：加100mg 的牛血清蛋白（组分V 或分子生物学试剂级，无DNA 酶）于9.5ml 水中（为减少变性， 须将蛋白加入水中，而不是将水加入蛋白），盖好盖后，轻轻摇动，直至牛血清蛋白完全溶解为止。不要涡旋混合。加水定容到10ml ，然后分装成小份贮存于-20。 1mol/L二硫苏糖醇（DTT ）：在二硫苏糖醇5g 的原装瓶中加32.4ml 水，分成小份贮存于-20。或转移100mg 的二硫苏糖醇 至微量离心管，加0.65ml 的水配制成1mol/L二硫苏糖醇溶液。 8mol/L乙酸钾（potassium acetate）：溶解78.5g 乙酸钾于足量的水中，加水定容到100ml 。 1mol/L氯化钾（KCl ）：溶解7.46g 氯化钾于足量的水中，加水定容到100ml 。 3mol/L乙酸钠（sodium acetate）：溶解40.8g 的三水乙酸钠于约90ml 水中，用冰乙酸调溶液的pH 至5.2，再加水定容到100ml 。 0.5mol/L EDTA:配制等摩尔的Na2EDTA 和NaOH 溶液（0.5mol/L），混合后形成EDTA 的三钠盐。或称取186.1g 的Na2EDTA?2H2O和20g 的NaOH ，并溶于水中，定容至1L 。 1mol/L HEPES：将23.8gHEPES 溶于约90ml 的水中，用NaOH 调pH （6.8-8.2），然后用水定容至100ml 。 1mol/L HCl：加8.6ml 的浓盐酸至91.4ml 的水中。 25mg/ml IPGT：溶解250mg 的IPGT （异丙基硫代-D-半乳糖苷）于10ml 水中，分成小份贮存于-20。 1mol/LMgCl2:溶解20.3g MgCl2?6H2O于足量的水中，定容到100ml 。 100mmol/L PMSF：溶解174mg 的PMSF （苯甲基磺酰氟）于足量的异丙醇中，定容到10ml 。分成小份并用铝箔将装液管包裹 或贮存于-20。 20mg/ml蛋白酶K （proteinase K）：将200mg 的蛋白酶L 加入到9.5ml 水中，轻轻摇动，直至蛋白酶K 完全溶解。不要涡旋混合。加水定容到10ml ，然后分装成小份贮存于-20。 10mg/mlRnase（无DNase ）（DNase free RNase ）：溶解10mg 的胰蛋白RNA 酶于1ml 的10mmol/L的乙酸钠水溶液中（pH 5.0）。溶解后于水浴中煮沸15min ，使DNA 酶失活。用1mol/L的Tris HCl 调pH 至7.5，于-20贮存。（配制过程中要戴手套） 5mol/L氯化钠（NaCl ）：溶解29.2g 氯化钠于足量的水中，定容至100ml 。 10N 氢氧化钠（NaOH ）：溶解400g 氢氧化钠颗粒于约0.9L 水的烧杯中（磁力搅拌器搅拌），氢氧化钠完全溶解后用水定容至1L 。 10SDS （十二烷基硫酸钠）：称取100gSDS 慢慢转移到约含0.9L 的水的烧杯中，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。用水定容至1L 。 2mol/L山梨（糖）醇（Sorbitol ）：溶解36.4g 山梨（糖）醇于足量水中使终体积为100ml 。 100三氯乙酸（TCA ）:在装有500gTCA 的试剂瓶中加入100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解。（稀释液应在临用前配制） 2.5 X gal （5-溴-4-氯-3-吲哚-半乳糖苷）：溶解25mg 的X gal 于1ml 的二甲基甲酰胺（DMF ）, 用铝箔包裹装液管，贮存于-20。 100Denhardt 试剂（Denhardts regent） 成分及终浓度 配制100ml 溶液各成分的用量 2%聚蔗糖（Ficoll ，400型） 2%聚乙烯吡咯烷酮（PVP-40） 2%BSA（组分V ） 水 2g 2g 2g 加水至总体积为100ml , 依照上表称取各组分，溶于水中定容。过滤除菌及杂质，分装成小份于-20贮存。 10标准DNA 连接酶缓冲液（standard DNA ligase buffer）（粘端、平端连接） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分的用量 0.5mol/L Tris-HCl:5ml1mol/L 贮液 ,100mmol/L MgCl2:1ml 1mol/L 贮液,100mmol/L DTT:1ml 1mol/L 贮液,2mmol/L ATP: 200ul 100 mmol/L 贮液,5mmol/L 盐酸亚精胺（可选）:50ul 1 mmol/L 贮液,0.5mg/ml BSA（组分V ）（可选）:0.5ml 10 mg/mL 贮液 , 水: 2.25ml 将配制好的缓冲液分装成小份，贮存于-20 。 100 mmol/L dNTP 溶液（dNTP solutions） 可以购买到100mmol/L纯dNTPs 贮液，-80可贮存至少6个月。 10mmol/L dNTP混合液 成分及终浓度 配制20ul 溶液各成分的用量 10mmol/L dATP 10mmol/L dCTP 10mmol/L dGTP 10mmol/L dTTP 水 2ul 100 mmol/L dATP 贮液 2ul 100 mmol/L dCTP 贮液 2ul 100 mmol/L dGTP 贮液 2ul 100 mmol/L dTTP 贮液 12ul 20PEG 8000/2.5M NaCl 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分的用量 质量浓度为20聚乙二醇 2.5mol/L 氯化钠 水 20g 50ml 5 mol/L 氯化钠 或 14.6g 固体氯化钠 补足100ml 加聚乙二醇于含有氯化钠的烧杯中，加水至终体积100ml ，用磁力搅拌器搅拌溶解。 20SSC 成分及终浓度 配制1L 溶液各成分的用量 300mmol/L 柠檬酸三钠（二水） 3mol/L 氯化钠 水 88.2g 175.3g 补足1L 溶解柠檬酸三钠（二水）和氯化钠于约0.9L 水中，加几滴10N NaOH溶液调pH 为7.0，用水补足体积至1L 。 DEPC （焦碳酸二乙酯）处理水 加100ul DEPC 于 100ml 水中，使DEPC 的体积分数为0.1。在37温浴至少12h ，然后在15 psi 条件下高压灭菌20min ，以使残余的DEPC 失活。DEPC 会与胺起反应，不可用DEPC 处理Tris 缓冲液。 甲酰胺（deionized formamide） 直接购买或加Dowex XG8 混合树脂于装有甲酰胺的玻璃烧杯中，用磁力搅拌器轻轻搅拌1h ，可去除甲酰胺中的离子。经Whatman 1号滤纸过滤除去树脂后分成小份，充氮气于-80贮存（防止氧化）。 磷酸缓冲液（phosphate buffer） 按照下表所给定的体积，混合1 mol/L 的磷酸二氢钠（单碱）和1mol/L 磷酸氢二钠（双碱）贮液，获得所需pH 的磷酸缓冲液。配制1 mol/L 的磷酸二氢钠（NaH2PO4?H2O）贮液：溶解138g 于足量水中，使终体积为1L;1mol/L 磷酸氢二钠（Na2HPO4）贮液:溶解142g 于足量水中使终体积为1L 。 1mol/L 磷酸二氢钠（ml ） 1mol/L 磷酸氢二钠（ml ） 最终pH 值 877 850 815 775 735 685 625 565 510 450 390 330 280 123 150 185 225 315 375 435 490 550 610 670 720 6.0 6.1 6.2 6.3 6.4 6.5 6.6 6.7 6.8 6.9 7.0 7.1 7.2 TE （用于悬浮和贮存DNA ） 成分及终浓度 配制100ml 溶液各成分的用量 10mmol/L TrisHCl 1mmol/L EDTA 水 1ml 1mol/L Tris-HCl（pH7.4-8.0，25） 200ul 0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 98.8ml Tris 缓冲液（Tris-HCl buffer） 将121g 的Tris 碱溶解于约0.9L 水中，再根据所要求的pH （25下）加一定量的浓盐酸（11.6N ），用水调整终体积至1L 。 浓盐酸的体积（ml ） pH 8.6 14 21 28.5 38 46 56 66 71.3 76 9.0 8.8 8.4 8.2 8.0 7.8 7.6 7.4 7.2 二. 电泳缓冲液、染料和凝胶加样液 电泳缓冲液 50Tris-乙酸（TAE ）缓冲液 成分及终浓度 配制1L 溶液各成分的用量 2mol/L Tris碱 1mol/L 乙酸 100 mmol/L EDTA 水 242g 57.1 ml的冰乙酸（17.4 mol/L） 200ml 的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 5Tris-硼酸（TBE ）缓冲液 成分及终浓度 配制1L 溶液各成分的用量 445 mmol/L Tris碱 445 mmol/L 硼酸盐 10 mmol/L EDTA 水 54g 27.5g 硼酸 20 ml的0.5 mol/L EDTA（pH 8.0） 补足1L 染料 1溴酚蓝（pomophenol blue） 加1g 水溶性钠型溴酚蓝于100ml 水中，搅拌或涡旋混合直到完全溶解。 1二甲苯青FF （xylene cyanole FF） 溶解1g 二甲苯青FF 于足量水中，定容到100ml 。 10mg/ml的溴化乙锭（ethidium pomide） 小心称取1g 溴化乙锭，转移到广口瓶中，加100ml 水，用磁力搅拌器搅拌直到完全溶解。用铝箔包裹装液管，于4贮存。 凝胶上样液（gel loading solutions） 6碱性凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.3 N 氢氧化钠 6 mmol/L EDTA 18聚蔗糖（400型） 0.15溴甲酚绿 0.25二甲苯青FF 水 300ul 10N 氢氧化钠 120ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.8g 15mg 25mg 补足到10ml 6聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 15聚蔗糖（400型） 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 1.5g 补足到10ml 6溴酚蓝/二甲苯青/聚蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.25溴酚蓝 0.25二甲苯青FF 15聚蔗糖（400型） 水 2.5ml 1溴酚蓝 2.5ml 1二甲苯青FF 1.5g 补足到10ml 6甘油凝胶上样液（4贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 50甘油 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 3ml 3.9ml 6蔗糖凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.15溴酚蓝 0.15二甲苯青FF 5 mmol/L EDTA 40聚蔗糖 水 1.5ml 1溴酚蓝 1.5ml 1二甲苯青FF 100ul 0.5mol/L EDTA（pH8.0） 4g 补足到10ml 10十二烷基硫酸钠/甘油凝胶上样液（室温贮存） 成分及终浓度 配制10ml 溶液各成分用量 0.2溴酚蓝 0.2二甲苯青FF 200 mmol/L EDTA 0.1SDS 50甘油 水 20mg 20mg 4ml 0.5mol/L EDTA(pH8.0) 100ul 10 SDS 5ml 补足到10ml 三. 常用培养基 LB 培养基 将下列组分溶解在0.9L 水中： 蛋白胨 10g 酵母提取物 5g 氯化钠 10g 如果需要用1N NaOH（1ml ）调整pH 至7.0，再补足水至1L 。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 SOB 培养基 将下列组分溶解在0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 5g 氯化钠 0.5g 1 mol/L 氯化钾 2.5ml 用水补足体积到1L 。分成100ml 的小份，高压灭菌。培养基冷却到室温后，再在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L氯化镁。 SOC 培养基 成分、方法同SOB 培养基的配制，只是在培养基冷却到室温后，除了在每100ml 的小份中加1ml 灭过菌的1mol/L氯化镁外，再加2ml 灭菌的1mol/L葡萄糖（18g 葡萄糖溶于足够水中，再用水补足到100ml ，用0.22um 的滤膜过滤除菌）。 TB 培养基 将下列组分溶解在0.9L 水中： 蛋白胨 12g 酵母提取物 24g 甘油 4ml 各组分溶解后高压灭菌。冷却到60，再加100ml 灭菌的170mmol/L KH2PO4/0.72 mol/L K2HPO4的溶液（2.31g 的KH2PO4和12.54gK2HPO4溶在足量的水中，使终体积为100ml 。高压灭菌或用0.22um 的滤膜过滤除菌）。 2YT 培养基 将下列组分溶解在0.9L 水中： 蛋白胨 16g 酵母提取物 10g 氯化钠 4ml 如果需要用1N NaOH（1ml ）调整pH 至7.0，再补足水至1L 。注：琼脂平板需添加琼脂粉12g/L,上层琼脂平板添加琼脂粉7g/L。 YPD 培养基 将下列组分溶解在0.9L 水中： 蛋白胨 20g 酵母提取物 10g 葡萄糖 20g 用水补足体积为1L 后，高压灭菌。建议在高压灭菌之前，对色氨酸营养缺陷型每升培养基添加1.6g 色氨酸，因为YPD 培养基是色氨酸限制型培养基。为了配制平板，需要在高压灭菌前加入20g 琼脂粉。 四. 常用抗生素 氨苄青霉素（ampicillin ）（100mg/ml） 溶解1g 氨苄青霉素钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 羧苄青霉素（carbenicillin ）（50mg/ml） 溶解0.5g 羧苄青霉素二钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以25ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 甲氧西林（methicillin ）（100mg/ml） 溶解1g 甲氧西林钠于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以37.5ug/ml终浓度与100ug/ml氨苄青霉素一起添加于生长培养基。 卡那霉素（kanamycin ）（10mg/ml） 溶解100mg 卡那霉素于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以 10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 氯霉素（chloramphenicol ）（25mg/ml） 溶解250mg 氯霉素足量的无水乙醇中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以12.5ug/ml25ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 链霉素（streptomycin ）（50mg/ml） 溶解0.5g 链霉素硫酸盐于足量的无水乙醇中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 萘啶酮酸（nalidixic acid）（5mg/ml） 溶解50mg 萘啶酮酸钠盐于足量的水中，最后定容至10ml 。分装成小份于-20贮存。常以15ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 四环素（tetracyyline ）（10mg/ml） 溶解100mg 四环素盐酸盐于足量的水中，或者将无碱的四环素溶于无水乙醇，定容至10ml 。分装成小份用铝箔包裹装液管以免溶液见光，于-20贮存。常以10ug/ml50ug/ml的终浓度添加于生长培养基。 几种溶液的配制方法 1、PBS: 取ZLI-9061 PBS溶于1000ml 的蒸馏水中，混匀，测pH 值应在7.27.4之间，若偏离此范围，请用0.1N 的HCL 或NaOH 调整。 2、TBS ： 2.1 Tris缓冲液配方：（0.5 M pH7.6） Tris（三羟甲基氨基甲烷） 60.57g 1N HCL 约420ml 双蒸水 加至1000ml Tris缓冲液配制方法： 先以少量双蒸水（300500ml）溶解Tris ，加入HCl 后，用HCl （1N ）或NaOH （1N ）将pH 调至7.6， 最后双蒸水加至1000ml 。此液为储备液，4冰箱中保存。 2.2 TBS配方： Tris-HCI缓冲液（0.5M pH7.6） 100ml NaCI 8.59g (0.15mol/L) 双蒸水 加至1000ml TBS配制方法： 先以少量双蒸水溶解NaCl ，再加入Tris-HCl 缓冲液，最后加双蒸水至1000ml ，充分摇匀。 3、枸橼酸盐缓冲液（Citrate buffer）： 3.1 储存液： A. 0.1M枸橼酸溶液：称取21.01g 枸橼酸（C6H8O7?H20）溶于1000ml 蒸馏水中。 B. 0.1M枸橼酸钠溶液：称取29.41g 枸橼酸钠（C6H5Na3O7?2H20）溶于1000ml 蒸馏水中。 3.2 液： 取9ml A液和41ml B液加入450ml 蒸馏水中，溶液pH 值应为6.0 0.1 4、胰酶（Trypsin ）： 4.1 ZLI-9011胰蛋白酶消化液： 常用浓度为0.125%，即使用前将一滴试剂1胰酶溶液和三滴试剂2胰酶稀释液均匀混 合（1:3稀释），则可直接滴加使用。胰酶的最终浓度可以根据使用者的要求进行调整，浓度范围可以从0.05%（1:10稀释）至0.25%（1:1稀释）。 4.2 ZLI-9010胰蛋白酶： 取0.05g 或0.1g 胰蛋白酶加入到100ml 0.05%或0.1% pH7.8的无水氯化钙水溶液中，溶解即可。 5、胃酶（Pepsin ）： 4%胃蛋白酶，用0.1mol/L HCL配制。 （我公司备有ZLI-9013胃蛋白酶消化工作液，不需稀释直接滴加使用，欢迎选购） 6、DAB ： 6.1 ZLI-9032/9033 DAB Kit： 使用前只需将试剂盒提供的A 、B 、C 三种试剂各一滴加至1ml 双蒸水中，即可获得1ml DAB工作液，简单易用。 6.1 ZLI-9030 DAB： 6mgDAB溶于10mlTBS （0.05M pH7.6），再加入0.1ml 浓度为3的H2O2，过滤掉沉淀物，即可。 7、AEC ： 4mg AEC溶于1ml 二甲基甲酰胺中，加入14ml 浓度为0.1M 的醋酸缓冲液（pH5.2），然后加入0.15ml 3%H2O2，过滤掉沉淀物。 8、RIPA ： 1PBS ，1%NP 40，0.5 sodium deoxycholate，0.1% SDS（此液体可长期保存）。以下抑制剂以储存液方式保存，临用前加入RIPA 中。 8.1 10mg/ml PMSF异丙醇溶液（用量为10l/ml） 8.2 Aprotinin（Sigma ，用量为30l/ml） 8.3 1000mM sodium orthovanadate冷冻液 （用量为10l/ml） 9、Blotto A： 常规使用1PBS ，5% milk，0.05% Tween 20。 10、Blotto B： 与Phosphotyrosine 抗体共用，1PBS ，1% milk，0.05% Tween 20。部分实验中milk 可完全去除，但可能引起背景增高。 玻璃仪器的洗涤SOP 玻璃仪器的洗涤SOP 1 范围 本规程规定了本公司分析室玻璃仪器的洗涤。 本规程适用于本公司分析测试室，也适用于本公司其他实验室。 2 引用标准 yyt0188?61995药品检验操作规程 3 洁净剂 3.1 分类 常用的洁净剂有肥皂、洗衣粉、去污粉、洗液（清洁液），有机溶剂等。 3.2 使用范围 3.2.1 洗衣粉、去污粉等一般用于： 可用刷子直接刷洗的仪器，如烧瓶、烧杯、量杯、试剂瓶等。 3.2.2 洗液可用于以下仪器的洗涤： 3.2.2.1 不便于用刷子清洗的仪器，如滴定管、移液管、容量瓶、比色管、玻璃垂熔漏斗、凯氏烧瓶等特殊要求与形状的仪器。 3.2.2.2 长久不用的玻璃仪器 3.2.2.3 新购回的玻璃仪器 3.2.2.4 刷子刷不下的污垢 4 洗液的配制法及注意事项 4.1 重铬酸钾洗液（清洁液） 取500ml 烧杯置天平上，称取已经研细重铬酸钾（k2cr2o3）10g ，加水16ml ，加热，搅拌使溶解，等冷后，在不断搅拌下缓慢地加入工业硫酸 200ml ，冷却后，置细口瓶中密闭保存。如工业硫酸浓度不够时，所配制的洗液常有红色沉淀析出，克服的方法为：先将工业硫酸置烧杯中，在沙浴上加热，以蒸去