血型正反定型不一致处理技巧VIP

血型正反定型不一致处血型正反定型不一致处 理技巧理技巧 2016年年11月月15日日 马春娅马春娅 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 血型鉴定方法血型鉴定方法 血型鉴定强度判定标准血型鉴定强度判定标准 血型正反定型不一致原因分析血型正反定型不一致原因分析 案例介绍案例介绍 主要内容主要内容 血型红细胞上抗原血清中的抗体基因型 A型 B型 AB型 O型 A B AB H 抗-B 抗-A 无 抗-AB A/A或A/O B/B或B/O A/B O/O ABO血型发现者：血型发现者：Karl Landsteiner，1900年年 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 H基因：基因： 遗传产生遗传产生-L-岩藻糖基岩藻糖基 转移酶转移酶，将岩藻糖基转，将岩藻糖基转 移到支链末端的半乳糖移到支链末端的半乳糖 上形成上形成H抗原抗原 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 A基因基因 产物：产物：N-乙酰氨基半乳糖转移酶乙酰氨基半乳糖转移酶 功能：从尿苷二磷酸（功能：从尿苷二磷酸（UDP）-N-乙酰氨基半乳糖转移一个乙酰氨基半乳糖转移一个N-乙乙 酰氨基半乳糖酰氨基半乳糖到到H物质的岩藻糖化半乳糖基上物质的岩藻糖化半乳糖基上 B基因基因 产物：产物：1，3-D半乳半乳 糖基转移酶糖基转移酶 功能：从功能：从UDP-半乳半乳 糖转移一个糖转移一个D-半乳糖半乳糖 到到H物质的岩藻糖化物质的岩藻糖化 半乳糖基上半乳糖基上 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 血型（表现型）血型（表现型）基因型基因型 A A B B ABAB O O AA, AOAA, AO BB, BOBB, BO ABAB O O A和和B基因是显性基因基因是显性基因 O型基因是隐性基因型基因是隐性基因 基因型相同血型一定相同基因型相同血型一定相同 血型相同基因型不一定相同血型相同基因型不一定相同 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 A1与A2量的差异 A1：8-12 105 A2：1-4105 A1B：5-9105 A2B：1105 A1和A2 质的差异 约有2%A2个体产生抗A1 约有25%A2B个体产生抗A1 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 A1和和A2 抗血清试剂红细胞唾液 （分泌 型） -A-B-AB-A1-HA1A2BO A14+04+2+W/0004+0A/H A24+04+03+0/W04+0A/H ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 抗血清试剂红细胞 唾液 （分泌型） -A-B-AB-A1-HA1A2BO A3mf0mf03+0/w04+0A/H Aendmf0mf04+0/w04+0H 出现双群时，要结合临床，由简至难排查：如白血病、骨髓移植、 不同型输血等 A3凝集细胞占多数，游离细胞占少数； Aend凝集细胞占少量，需多次离心才能被发现； ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 抗血清试剂红细胞 唾液 （分泌型） -A-B-AB-A1-HA1A2BO Axw01+-3+04+w0/w4+0Aw/H Ael00004+w0/w4+0H Am+/w0+/w04+004+0A/H Ay表现型与Am相似 与同样的血清孵育时，Ay上放散下来的抗A较Am少 Ay比Am分泌型唾液中A物质含量更少 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 B亚型血清学特征亚型血清学特征 抗血清试剂红细胞 唾液 （分泌型） -A-B-AB-HA1A2BO B30mfmf4+4+3+0/w0B/H Bend0mf04+4+4+0/w0H Bx0w1-3+4+4+3+w0H Bel0004+4+4+0/w0H Bm0-/w-/w4+4+3+00B/H ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 A2B、A3B、AxB、AmB、AelB、AendB、AB3、ABx、 ABm、ABel、Abend 同同A亚型和亚型和B亚型的血清学特点亚型的血清学特点 不同之处：与抗不同之处：与抗H的凝集强度弱，呈的凝集强度弱，呈w/0，同，同A1B ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 B（A）或）或A（B）表型）表型 B型糖基转移酶在某些条件下可以合成型糖基转移酶在某些条件下可以合成A物质物质 A1型糖基转移酶也能合成型糖基转移酶也能合成B物质物质 A型和型和B型糖基转移酶的叠盖功能型糖基转移酶的叠盖功能 cisAB 两条染色体相邻的基因交换，产生两种转移酶两条染色体相邻的基因交换，产生两种转移酶 A和和B基因的一个基因突变，只能产生一种酶，同时催化基因的一个基因突变，只能产生一种酶，同时催化A和和B抗抗 原的产生原的产生 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 cisAB和和B（A） cisAB的A抗原接近正常，B 抗原较正常弱很多； B(A)的B抗原接近正常，A抗原弱很多。 cisAB或B（A）血清中存在针对弱抗原产生的不规则抗体 cisAB与抗H反应强度仅次于甚至接近与O细胞。 带有cisAB或B(A)等位基因的个体，若与O型血的人（基因型 O / O）生育，子女的血型可能表现为AB型或O型，而不像通常 AB型血与O型血的父母只能生出A或B型血的子女。 血清学方法判断为AB亚型，需分子生物学验证 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 获得性B 表现在A型红细胞上 可能减弱A抗原的抗原性 获得性B消失后，红细胞A抗原性增强 唾液中只含有A和H抗原 PH6时，凝集消失 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 孟买型和类孟买型孟买型和类孟买型 抗血清试剂红细胞 唾液 （分泌型） -A-B-AB-A1-HA1A2BO Oh00004+4+4+3+- Omh 00004+4+4+wH Amhw0w00w04+wA/H Bmh0ww004+3+wwB/H ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 存在方式存在方式 颗粒性抗原（膜抗原）：存在于红细胞膜上颗粒性抗原（膜抗原）：存在于红细胞膜上 可溶性抗原（型物质）：存在于分泌型人群的体液中（如唾液）可溶性抗原（型物质）：存在于分泌型人群的体液中（如唾液） 形成时间形成时间 胚胎期抗原产生胚胎期抗原产生 出生时已经存在，但出生时已经存在，但较成人弱较成人弱 出生三月时与成人基本相同出生三月时与成人基本相同 以后逐步增强到成人水平以后逐步增强到成人水平 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 ABO血型系统抗原血型系统抗原 存在形式 A型与B型人以IgM为主，IgG很少 O型人含有抗A、抗B和抗AB，以IgG为主，IgM很少 AB型人既无抗A也无抗B 产生时间 新生儿出生时理论上无ABO抗体 3至6月后开始产生抗体 510岁时抗体水平达到高峰，并延续多年 老年后，随年龄增大而降低 ABO血型系统抗体血型系统抗体 ABO血型系统抗原抗体简介血型系统抗原抗体简介 正定型正定型 用抗用抗- -A A和抗和抗- -B B检测红细胞上是否存检测红细胞上是否存 在在A A和和/ /或或B B抗原抗原 反定型反定型 用已知的用已知的A1A1和和B B型红细胞检测血清型红细胞检测血清 或血浆中的抗或血浆中的抗A A和或和或B B抗体抗体 准确定型准确定型 必须进行正反定型必须进行正反定型 并且正反定型的结果必须相互对应并且正反定型的结果必须相互对应 一致，符合一致，符合Landsteiner规则规则 血型鉴定方法血型鉴定方法 ABO血型鉴定血型鉴定 单独单独的正定型或反定型都的正定型或反定型都 不能准确鉴定血型不能准确鉴定血型 正定型（检测抗原）正定型（检测抗原）反定型（检测抗体）反定型（检测抗体） 血型血型 红细胞悬液红细胞悬液+标准血清标准血清患者血清患者血清+标准反定红细胞标准反定红细胞 抗抗A抗抗BA细胞细胞B细胞细胞 -+O +-AB +-+A -+-B 血型鉴定方法血型鉴定方法 玻片法玻片法/ /纸板法纸板法/ /瓷板法瓷板法 优点优点 操作简单操作简单 费用低廉费用低廉 缺点缺点 反应不充分反应不充分 易污染易污染 边缘易干涸，造成假阳性边缘易干涸，造成假阳性 试管法试管法 优点优点 反应充分反应充分 快速、准确快速、准确 结果可靠结果可靠 适用于所有血型血清学适用于所有血型血清学 试验试验 对于有疑问的血型均需对于有疑问的血型均需 转入试管法处理转入试管法处理 缺点缺点 不适用于批量不适用于批量检测检测 血型鉴定方法血型鉴定方法 柱凝集法柱凝集法 ABO/RhD卡的微管中装填有葡聚糖凝胶（或玻璃微珠）颗 粒和抗A、抗B、抗D标准血清 如果红细胞表面存在A或B或D抗原，就会与对应的抗体发 生凝集反应 凝胶（或玻璃微珠）颗粒具有分子筛的作用，可以阻滞凝集 的红细胞在离心力的作用下通过凝胶（或玻璃珠）颗粒，使 其悬浮在凝胶（或玻璃珠）颗粒中 未凝集的红细胞则可以通过凝胶（或玻璃微珠）颗粒间的微 小空隙到达微管底部 反定型将患者血清与标准红细胞分别加入微柱孔内，其反应 原理同正定型 血型鉴定方法血型鉴定方法 柱凝集法柱凝集法 优点优点 标准化程度高标准化程度高 重复性强重复性强 试验结果准确可靠试验结果准确可靠 标本用量少标本用量少 仪器检测可拍照存档仪器检测可拍照存档 便于查找结果，提供法律证据便于查找结果，提供法律证据 缺点缺点 抗蛋白干扰能力较差抗蛋白干扰能力较差 对细胞浓度要求较高对细胞浓度要求较高 血型鉴定方法血型鉴定方法 微孔板法微孔板法 聚氯乙烯（PVC）或聚苯乙烯（PS）制成的U型 底微板 在其孔中添加受检者红细胞悬液和标准血清（或 受检者血浆和反定红细胞） 经室温孵育后，振荡、离心 平铺于微孔底部为阳性者；在微孔底部聚集成纽 扣状为阴性 优缺点 适用于批量检测 需要专用的仪器设备 血型鉴定方法血型鉴定方法 试管法血型操作技巧 红细胞浓度约为3%-5%(1ml生理盐水+1d压积红细胞） 正定型：1d标准血清+1d患者红细胞（3%-5%） 反定型：1d试剂红细胞+2d患者血清 离心力：1000g,15s 结果判读：用液体轻轻冲刷细胞扣边缘，仔细观察细胞扣的变化 边缘齐整脱落，为阴性 边缘呈不规则形状脱落，如月牙边，锯齿等，为阳性 强度判断：离心完后立即看结果，以细胞扣刚刚脱落完时状态， 判断强度 血型鉴定方法血型鉴定方法 何谓有疑问的血型？何谓有疑问的血型？ 正定型与反定型结果不一致正定型与反定型结果不一致 正定型正定型 凝集强度凝集强度3+ 质控孔阳性质控孔阳性 反定型反定型 凝集强度凝集强度2+ 不该凝集的一端出现任意凝集强度不该凝集的一端出现任意凝集强度 O型反定强度不平行型反定强度不平行 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 4+4+ 红细胞凝集成一大块，红细胞凝集成一大块， 液体背景透明，无游离液体背景透明，无游离 红细胞红细胞 3+ 一个大凝块，周围有一个大凝块，周围有 少量小凝块或数个大凝少量小凝块或数个大凝 集块，液体背景透明，集块，液体背景透明， 无游离红细胞无游离红细胞 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 2+ 有很多小凝集有很多小凝集 块，液体背景透明，块，液体背景透明， 无游离红细胞无游离红细胞 1+ 有许多很小的有许多很小的 凝集块，肉眼可见，凝集块，肉眼可见， 液体背景不透明，液体背景不透明， 有游离红细胞有游离红细胞 1+ 2+ 3+ 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 双群双群 游离红细胞与凝集红细胞游离红细胞与凝集红细胞 同时存在，试管法呈“油同时存在，试管法呈“油 煎蛋样”；镜下可见少数煎蛋样”；镜下可见少数 红细胞凝集，而绝大多数红细胞凝集，而绝大多数 红细胞仍呈分散分布红细胞仍呈分散分布 溶血溶血 红细胞崩解红细胞崩解 呈红色透明外观呈红色透明外观 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 镜下红细胞镜下红细胞 凝集状态凝集状态 阴性阴性 缗钱状凝集缗钱状凝集 真凝集真凝集 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 反应强度反应强度具体描述具体描述 4+ 红细胞凝集成一大块，液体背景透明，无游离红细胞 3+ 数个大凝集块，液体背景透明，无游离红细胞 2+ 有很多小凝集块，液体背景透明，无游离红细胞 1+ 有许多很小的凝集块，肉眼可见，液体背景不透明，有游离红细胞 微小的凝集块，肉眼很难看清，需要用显微镜观察；镜下可见数个 红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细胞 混合外观 游离红细胞与凝集红细胞同时存在，试管法呈“油煎蛋样”；镜下 可见少数红细胞凝集，而绝大多数红细胞仍呈分散分布 溶血红细胞崩解，呈红色透明外观 阴性无凝集，无溶血，完全都是游离红细胞 玻片法玻片法/ /纸板法纸板法/ /试管法凝集强度判断试管法凝集强度判断 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 4+ 红细胞全部凝集在微柱顶部 3+ 凝块绝大部分在微柱顶部，微柱的上1/2处有少量凝集红细胞存在 2+ 凝块大部分在微柱的中部，少部分在微柱中下部 1+ 凝块大部分在微柱底部，少部分在微柱下1/2处 +/- 凝块绝大部分在微柱底部，在微柱下1/3处有极少数散在红细胞凝块 -凝块清楚的沉淀在微柱底部，微柱内无任何凝块 溶血溶血 微柱内无游离或凝集的红细胞，呈清澈透明红色 双群双群 凝集红细胞位于微柱顶部和未凝集红细胞位于微柱底部 血型鉴定判断标准血型鉴定判断标准 漏加试剂漏加试剂 耗材效期耗材效期 离心力离心力 污染污染 记录错误记录错误 检查标本质检查标本质 量量 检查操作检查操作 程序程序 查阅相关信查阅相关信 息息 试管法复查试管法复查 溶血溶血 乳糜乳糜 凝块凝块 黄疸黄疸 蛋白析出蛋白析出 血液稀释血液稀释 诊断诊断 输血史输血史 妊娠史妊娠史 移植史移植史 初检血型初检血型 细胞浓度细胞浓度 手法轻柔手法轻柔 镜检镜检 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 正定型凝集强度较弱（正定型凝集强度较弱（ A2B B A1 A1B 4加强，需做对照 吸收放散吸收放散 人源血清 不是所有单克隆血清都适宜做吸收放散 唾液型物质试验唾液型物质试验 分泌型人群 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 正定型凝集强度过强（不该凝集的出现凝集）正定型凝集强度过强（不该凝集的出现凝集） 冷抗体冷抗体 温盐水洗涤温盐水洗涤 置于置于37水浴反应水浴反应 包被抗体包被抗体 2-Me DTT 二磷酸氯喹二磷酸氯喹 45热放散热放散 56热放散热放散 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 反定型凝集强度偏弱（反定型凝集强度偏弱（A2A2BBA1A1B A2c；是否产生抗A1 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 正反定型不一致正反定型不一致 多见于亚型、异基因移植后、新生儿 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 正定凝集强度正定凝集强度2）、抗体减弱、异基因）、抗体减弱、异基因 移植后等移植后等 正反定型不一致原因分析正反定型不一致原因分析 正定血型偏弱发现亚型一例 方法方法抗抗A抗抗B抗抗DAcA2cBcOcCtrl 卡氏+4+4+0/0/0 试管法 国产04+4+0000/ 进口+4+4+0000/ 患者徐某，女，患者徐某，女，56岁，因手术备血岁，因手术备血 案例介绍案例介绍 吸收放散 吸收前后效价无变化 放散液：Ac:2+,Bc:0,Oc:0 抗抗H：3+ Oc徐徐cBc 抗抗A1：0 结论结论:A亚 亚B 正定血型偏弱发现亚型一例 案例介绍案例介绍 黄某，男，黄某，男，47岁，因肝占位手术备血岁，因肝占位手术备血 反定型偏弱发现亚型一例 方法方法抗抗A抗抗B抗抗DAcA2cBcOcCtrl 卡氏04+4+2+/0/0 试管法 室温04+4+2+000/ 室温15min04+4+2+000/ 6d加强/2+s+/-00/ 410min04+4+2+s+/-+/-+/-/ 案例介绍案例介绍 其他其他检测检测 抗抗H：3+ 吸收放散吸收放散 吸收前后效价无变化吸收前后效价无变化 放散液：放散液：Ac:2+, Bc:0, Oc:0 结论：结论：A亚 亚B 案例介绍案例介绍 反应条件 正定反定 -A-BAcBcOc自身c IS0+/-4+1+w00 二次0+/-4+1+w00 4*10 min0+4+2+ B亚型一例 正定型凝集强度偏弱；B抗原减弱 反定型不该凝集的出现凝集：与BC反应的弱不规则抗体 怀疑B亚型 加做抗加做抗AB：2+ 加做抗加做抗H：Oc(4+)=Pc(4+)Bc(2+) 吸收吸收放散实验：放散实验：Ac:-; Bc:3+；Oc- 不规则抗体筛查：阴性不规则抗体筛查：阴性 与与2名名B型献血者配血：阳性型献血者配血：阳性 与与2名名O型献血者配血：阴性型献血者配血：阴性 疑似疑似Bx亚型产生不规则抗亚型产生不规则抗B，需进一步分子生物学鉴定，需进一步分子生物学鉴定 吸收放散注意事项：吸收放散注意事项： 最好人源与单克隆血清同时进行 吸收前洗涤细胞 ，4生理盐水吸收 ，吸收过程充分摇匀 吸收前后效价比对，吸收弱，放散强； 用 4 生理盐水洗涤 ，充分洗涤无残存抗体 放散过程充分混匀，迅速离心，离心力为2000g/1min ，离心后立即将放散液转移到另一试管 6、人源血清吸收放散，应用抗人球试剂检测放散液 自身抗体干扰血型及配血一例 刘某：急诊科，女，刘某：急诊科，女，62岁，重度贫血，申请岁，重度贫血，申请B型红细胞型红细胞4U 血清学实验室结果：血清学实验室结果： 案例介绍案例介绍 抗A抗B抗DAcBcOcCtrl Auto-VUE1+4+4+4+2+/3+ 试管法+/-4+4+4+00/ Auto-VUE3+2+S2+S 盐水法000 自身抗体干扰自身抗体干扰血型及血型及配血一例配血一例 抗体鉴定结果抗体鉴定结果 方 法 1234567891011