《位点特异性重组》PPT课件.ppt

第六章位点特异性重组和DNA转座,Introduction保守性位点特异性重组（conservativesite-specificrecombination,CSSR）转座重组（transpositionalrecombination）,1.保守性位点特异性重组（CSSR）,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.1重组位点,Duringintergration,recombinationalwaysoccursatexactlythesamenucleotidesequenceswithinthetworecombinationsites,oneonthephageDNAandtheotheronthebacterialDNA.,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.1重组位点重组酶识别序列对称分布交换区（crossoverregion）,重组位点,重组位点,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果DNA片段的插入,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果DNA片段的缺失,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果DNA片段的到位,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.2重组结果DNA片段的插入DNA片段的缺失DNA片段的到位,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.3重组酶1.3.1丝氨酸重组酶1.3.2酪氨酸重组酶,1.保守性位点特异性重组（CSSR）1.3.1丝氨酸重组酶1.3.1.1结构,LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.,R2,R1,R3,R4,1.3.1丝氨酸重组酶1.3.1.2功能重组酶丝氨酸残基的-OH攻击交换区特定磷酸二酯键，重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连另外一个断裂DNA的-OH攻击重组酶与DNA磷酸二酯键，重新形成DNA的磷酸二酯键，丝氨酸重组酶释放DNA,1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连,1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换,1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换,R2,R1,R3,R4,LiW,etal.Science.2005,309(5738):1210-1215.,1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组,1.3.1.3丝氨酸重组酶特异位点重组功能丝氨酸重组酶的4个亚基分别切断2个DNA分子的4条链，并且重组酶通过磷酸二酯键与DNA断裂端相连重组酶二聚体亚基旋转进行DNA片段交换DNA链上-OH攻击重组酶-DNA磷酸二酯键，重新形成DNA磷酸二酯，释放重组酶，完成重组,总结重组位点重组结果丝氨酸重组酶,2.转座,2.转座2.1转座因子（transposableelement）或转座子（transposon）从DNA上的一个地方移位到另外一个地方的遗传因子。,2.2转座因子的类型2.2.1DNA转座子2.2.2LTR(longterminalrepeat)反转录转座子2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子,2.2转座因子的类型2.2.1DNA转座子2.2.1.1自主转座子（autonomoustransposon）2.2.1.2非自主转座子（nonautonomoustransposon）,2.2转座因子的类型2.2.1.1DNA自主转座子反向重复序列（具有转座酶识别序列）转座酶基因,2.2转座因子的类型2.2.1.2DNA非自主转座子反向重复序列（具有转座酶识别序列）,2.2转座因子的类型2.2.1DNA转座子2.2.1.1自主转座子反向重复序列（具有转座酶识别序列）转座酶基因2.2.1.2非自主转座子反向重复序列（具有转座酶识别序列）,2.2转座因子的类型2.2.2LTR反转录转座子两端有LTR(longterminalrepeat)LTR中含有反向末端重复序列转座酶基因和反转录酶基因,2.2转座因子的类型2.2.3聚腺苷酸(poly-A)反转录转座子5-UTR:untranslatedregion3-UTR(聚腺苷酸序列的A-T碱基对)ORF1:编码RNA结合蛋白openreadingframeORF2:编码的蛋白质同时具有反转录酶和核酸内切酶功能,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体将DNA转座子从原始位置切除DNA单链交换，即转座子的3-OH与靶DNA的5-P相连DNA聚合酶和DNA连接酶修复缺口,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制将DNA转座子从原始位置切除,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制DNA单链交换，即转座子的3-OH与靶DNA的5-P相连,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制DNA聚合酶和DNA连接酶修复缺口,2.3DNA转座的剪切-粘贴机制转座酶识别并聚集转座子两端的反向重复序列，形成转座体将DNA转座子从原始位置切除D