血栓与止血检测方法分析

,第三节血栓与止血检测,一、止血机理(Hemostaticmechanism)二、凝血机理(Coagulationmechanism)三、纤维蛋白溶解机理(Fibrinogenolysis)四、出血性疾病实验诊断、临床意义.（LaboratorydiagnosisandClinicalsignificance）,止血,血管壁损伤,血小板,粘附、聚集,血小板血栓(白色血栓),封住伤口,止血完成,神经反射体液调节,小血管收缩血流缓慢,释放ADP,激活凝血系统,血凝块(红色血栓),止血的三个基本条件：（1）血管结构与功能正常收缩，释放与激活血小板、凝血系统（2）血小板功能与量的正常凝集与释放vWF,ADP,5-HT,AGT,PF4,等（3）凝血系统的正常14个因子，(HMWKininogen,kallikreinK),凝血酶原,凝血酶,纤维蛋白原,纤维蛋白单体,可溶性纤维蛋白聚合体,可不性纤维蛋白聚合体,a,Ca2,A肽B肽,血液凝固机理示意图,内源性凝血途径12kpk,1211910,外源性凝血途径3,257910,胶原等带负电荷表面,组织损伤释放组织因子（因子）,激肽释放酶,蛋白质部分磷脂部分,a,a-Ca2+-,凝血酶aaa,a-Ca2+-,a,Ca2,Ca2+蛋白质部分,磷脂部分,a,血小板,PF3,PF3磷脂,X,凝血酶原,纤维蛋白原,凝血酶,A肽、B肽,纤维蛋白单体,可溶性纤维蛋白聚合体,Ca2+,不溶性纤维蛋白聚合体,作用转变复合物,a,凝血机理,Ca2+,凝血是一系列酶促反应，可归纳为：1、一种结局2、二条途径3、三项要素4、四组（14个凝血）因子凝血酶：FgFM,PT,5789,Plasmin,抗凝血系统细胞抗凝体液抗凝PCAPC/5a,13aTMPS其他抗凝蛋白,纤溶酶纤溶酶纤溶酶,纤溶激活酶UK,SK,Thrombin,纤溶酶原,纤溶酶Plasmin,纤维蛋白纤维蛋白降解产物（FDP）多种肽链碎片，如X、Y、D，A、B、C，E、D-dimer,纤维蛋白原片段X片段Y片段E纤维蛋白,小分子多肽片段D片段DA、B、C,纤溶机理,1、抗凝血酶作用2、和纤维蛋白单体结合，从而抑制了纤维蛋白的聚合3、抑制血小板的粘附和聚集功能4、抑制a活化因子作用。,出血、血栓性疾病的检查,1.毛细血管脆性试验（capillaryresistancetest,CRT)2.出血时间测定（bleedingtime,BT)3.血浆内皮素-1(ET-1)测定,一、血管壁结构与功能的检测,（一）毛细血管抵抗力试验（CRT）又称毛细血管抵抗力试验或束臂试验,原理给毛细血管一定的压力，观察其完整性及脆性。参考值5cm直径圆圈内新出血点：男性小于5个；女性及儿童小于10个。临床意义新出血点数超过正常为阳性：1、血管壁结构或（和）功能异常，如过敏性紫癜；2、血小板量和（或）质异常，如原发或继发性血小板减少症；3、血管性血友病等。,（二）出血时间（bleedingtimeBT）测定。原理将毛细血管刺破，血液自然流出到自然停止所需的时间。参考值测定器法：6.92.1min，超过9min为异常。临床意义BT延长见于：1、血小板明显减少，如血小板减少性紫癜；2、血小板功能异常；3、血管异常，如遗传性出血性毛细血管扩张症；4、药物，如服用乙酰水杨酸等。BT缩短见于某些严重的血栓前状态和血栓形成。,（三）血浆内皮素-1(ET-1)测定,参考值ELISA5ng/L内皮素-1(ET-1)是血栓形成的易患因素之一,二血小板检测,（一）血小板计数(PC/PLT)参考值（100-300）109/L临床意义血小板减少：PC100109/L。生成障碍，如再障；破坏或消耗增多，如ITP、SLE、DIC分布异常，如肝硬化致脾肿大等。血小板增多：PC400109/L。原发性增多，如原发性血小板增多症；反应性增多，如急性感染等。,（二）血块凝缩试验（clotretractiontest,CRT）原理：血液凝固血小板收缩酶血块收缩、血清析出血块凝缩影响因素：)血小板量和质。)纤维蛋白原浓度。3）XIII因子的水平。4）红血球的比积。,（二）血块凝缩试验（clotretractiontest,CRT）方法：静脉采用1ml，置于内径8mm，干试管内，加塞静止37水浴箱中,于1/2h、1h及24h分别观察血块凝缩情况。结果判断：正常于1/21h开始，24h凝缩完全。（1）完全凝缩：血块与管壁分离，血清析出1/21/3。（2）部分凝缩：血块大部分凝缩，血清析出1/3。（3）凝缩不良：血块略有凝缩，少量血清析出。（4）不凝缩：血块维持原样，无血清析出。,（三）血小板相关免疫球蛋白测定（PAIg）参考值PAIgG为078.8ng/107血小板PAIgM为07.0ng/107血小板；PAIgA为02.0ng/107血小板。临床意义增高：见于ITP、输血后紫癜、SLE等。观察病情：治疗有效，PAIg水平下降；复发则升高。,（四）血小板粘附实验（PAdT）参考值65.2%8.61%临床意义增高：血栓前状态和血栓性疾病。降低:血管性血友病，血小板无力症，MDS、SLE等,（五）血小板聚集实验（PAgT）参考值临床意义增高：血栓前状态和血栓性疾病。降低:血管性血友病，血小板无力症，MDS、ITP等,（六）血浆B血小板球蛋白（B-TG）和血小板第四因子（PF4）测定参考值ELISAB-TG16.49.8ug/LPF43.22.3ug/L临床意义增高：血栓前状态和血栓性疾病。降低:先天性或获得性储存池病（血小板a颗粒缺陷症),三、凝血因子检测,(一)血浆凝血酶原时间测定(PT),血浆凝血酶原时间测定(PPT)通常称为凝血酶原时间(PT)测定，是在血浆中加入组织凝血活酶(兔脑粉)和钙离子后，测定凝血所需时间，为凝血酶原时间。血浆中纤维蛋白原、因子含量减少时，则凝血酶原时间延长。此试验是检测外源性凝血系统有无障碍的筛选试验。,【参考值】凝血酶原时间1113s。【临床意义】1.凝血酶原时间延长先天性凝血因子异常，见于凝血因子、之一或两种以上有质量异常时；后天性凝血因子异常，如严重肝病、维生素K缺乏(慢性肠道病、阻塞性黄疸等)、DIC后期、使用抗凝药物过多等。,【临床意义】2.凝血酶原时间缩短见于血液高凝状态、多发性骨髓瘤、心肌梗死等。3.用于抗凝疗法的监控INR为首选指标，国人以2.03.0为宜。,（二）活化部分凝血活酶时间测定（APTT）,原理受检血浆中加入APTT试剂和Ca2后，观察凝固时间。参考值3243秒，较正常对照值延长10秒以上为异常。,临床意义1.延长见于：因子、减少，如A、B型血友病；凝血酶原减少，如严重肝病；纤维蛋白原减少，如纤维蛋白原缺乏症；应用抗凝药物；纤溶亢进；循环抗凝物增加等。2.缩短：见于高凝状态。3.APTT监测肝素治疗的首选指标,（四）血浆纤维蛋白原测定原理：血浆纤维蛋白原与氯化钙作用生成纤维蛋白。方法：仪器法(定氮法)参考值：2-4g/L增高多发性骨髓瘤、心肌梗死等减低DIC严重肝病等,四、抗凝物质检测,(一)血浆抗凝血酶活性测定（AT:A)增高可导致出血降低可导致血栓形成（二）血浆肝素定量测定0.20.5IU/ml治疗有效且临床较少出血,五纤溶活性检查试验.3P试验(plasmaprotamineparacoagulationtest).血浆纤维蛋白降解产物测定(fibrindegradationproducts,FDP).D-二聚体测定(D-dimer,DD),1、血浆鱼精蛋白副凝试验,原理纤溶过程中FDP鱼精蛋白十游离纤维蛋白单体凝集参考值正常人阴性,（plasmaprotamineparacoagulationtestPPPT,3P试验）,意义,阳性：1提示血中FDP增多，见于DIC/纤溶亢进2溶栓治疗后3假阳性：大出血（创伤、手术、咯血、呕血），恶性肿瘤、人工流产等阴性：1正常人2原发性纤溶3DIC晚期,FDP（FibrinogenandFibrinDegradationProducts)是纤维蛋白原和纤维蛋白降解产物的总称。增高表明体内纤溶亢进，但不能鉴别原发和继发纤溶。Latexmethod参考值:5g/ml,.FDP的测定,D-Dimer是交联纤维蛋白降解特征性产物，是继发性纤溶的标志。增高是诊断DIC的辅助条件之一。但在深部静脉血栓、肺栓塞、动脉瘤、急性早幼粒细胞白血病时也增高。Latexmethod参考值:0.5g/ml,.D-Dimer的测定,六弥散性血管内凝血（DisseminatedIn