安捷伦1260HPLC工作原理及简单操作.ppt

Agilent1260HPLC工作原理及简单操作,10-12-2012,Agilent1260HPLC工作原理及简单操作,培训目的：1.了解HPLC各模块的原理；2.掌握HPLC各模块日常维护的要点；3.掌握开机，关机。,Agilent1260HPLC工作原理及简单操作,内容：一、HPLC各模块的原理及维护；二、开机/关机操作；三、讨论；四、评估。,一、HPLC各模块工作原理及维护,HPLC：高效液相色谱仪（HighPerformancesLiquidChromatography）。由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几个部分组成。工作时储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经样品进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱（固定相）内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数，在两相中做相对运动时，经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。,关于溶剂,HPLC各模块的工作原理及维护,所有溶剂应为HPLC级，水应为二次超纯水；所有溶剂应经过过滤。过滤水应使用水相滤膜，过滤有机相应使用有机相滤膜，不能混用。每一次滤膜只能用一次，不能重复使用；如果没有在线脱气机，所有溶剂应经过超声脱气；水易滋生藻类，避免直接照射，过滤水最好使用不要超过两天；如果条件允许可向溶剂中加入0.001-0.0001M的叠氮化钠；注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂；避免使用强酸、强碱或有机氯等腐蚀性溶剂；在溶剂瓶中的溶剂过滤头可能会堵塞，必要时小心拿下用强酸（35%硝酸）浸泡时，用水冲洗，但不要使用超声处理。,关于在线真空脱气机,在线真空脱气机的管路容量为12ml，压力范围为110Torr-190Torr。为保证脱气机的良好使用性能，在下述情况下需要用注射器抽洗脱气机管路，每个通道使用不低于30ml的异丙醇。1，新的脱气机或新的管路；2，更换了溶剂，尤其是缓冲盐与有机相之间、两个不相容流动相之间的互换时；3，输液泵关闭了一段时间，或使用挥发性溶剂混合物。,HPLC各模块的工作原理及维护,关于泵：（四元泵）,HPLC各模块的工作原理及维护,关于泵（泵头组件）,出口球阀BOV,清洗阀PurgeValve,柱塞杆Piston,主动输入阀AV,HPLC各模块的工作原理及维护,活塞外框架,SealWash组件,泵头密封垫,泵腔,更换过滤白头,在清洗阀中的过滤白头需要更换，在清洗状态下，设置流量为5ml/min，此时系统压力如果超过10bar，则需更换过滤白头。更换步骤：1，关闭泵电源；2，用扳手去掉通往进样器上的毛细管，拔掉废液管；3，用专用扳手小心把清洗阀卸下来；4，轻轻去掉聚四氟乙烯密封垫和金密封垫，将过滤白头拿出；5，更换新的过滤白头，装上聚四氟乙烯密封垫和金密封垫；6，装上清洗阀；7，连接管路。,过滤白头,聚四氟乙烯密封垫,金密封垫,清洗阀PurgeValve,HPLC各模块的工作原理及维护,更换过滤白头,1，去掉毛细管，废液管,2，卸掉清洗阀,3，更换过滤白头,4，更换白头，装好清洗阀,HPLC各模块的工作原理及维护,泵的注意事项,1，溶剂的过滤、脱气；2，避免使用腐蚀性溶剂；3，在满足分析的前提下，尽可能使用较低的流速较低的系统压力。4，更换过滤白头；5，考虑溶剂的相容性；6，尽可能使用新鲜的水；7，使用0.01M以上浓度的缓冲溶液要选配柱塞清洗组件，清洗液不能干涸。8，使用正相溶剂比如环己烷时，建议使用聚乙烯密封垫，部件号为0905-1420，在0200Bar下使用聚乙烯密封垫比标准密封垫更耐磨损。,四元泵：四元泵多通道比例阀MCGV使用时注意，缓冲溶液要放在A、D通道，以避免盐颗粒析出。建议A通道：水；B、C通道：有机溶剂；D通道：缓冲溶液。,HPLC各模块的工作原理及维护,关于进样器,HPLC各模块的工作原理及维护,关于进样器,准备位置,调用样品瓶吸样品,进样和运行位置,标准进样过程.,HPLC各模块的工作原理及维护,自动进样器,样品要干净、经过过滤。洗针：把样品残留降低到最小限度，可降低进样的记忆效应，洗针瓶最好不要加瓶垫。多次吸液用于进样量大于100ul,HPLC各模块的工作原理及维护,关于恒温柱箱,控制范围：最高80C，低温低于室温10C。预热块体积左面为3ul，右面为6ul，除非有特殊要求，左右温度应保持一致。一定要关闭前面板。,HPLC各模块的工作原理及维护,关于原理,HPLC各模块的工作原理及维护,关于色谱柱保护,过滤所有的溶剂和样品使用保护柱仪器在使用完毕，要冲洗整个系统，移走系统中的缓冲液。柱子在不使用时，两端密封保存在适当的溶剂中保存柱子注意色谱柱的pH值使用范围不要高压冲洗柱子不要高温下过长时间使用硅胶键合相,HPLC各模块的工作原理及维护,检测器DAD,DAD(DiodeArrayDetector)二极管阵列检测器，是以光电二极管阵列作为检测元件的UV-VIS检测器.DAD的光源氘灯有一定的半衰期，一般为1000小时左右，所以在没有样品分析任务时要关闭氘灯，以延长氘灯的使用寿命,但是也不要频繁的开关,这样也会影响寿命。同时，打开灯需要预热10min左右，灯使用时间越长，预热的时间也要越长。流动池污染后，会造成灵敏度下降、噪声加大，应避免脏的样品进入流动池。定期使用异丙醇冲洗系统对保持流动池性能有一定好处。,HPLC各模块的工作原理及维护,检测器DAD,HPLC各模块的工作原理及维护,检测器FLD,HPLC各模块的工作原理及维护,FLD(FluorescenceDetector)荧光检测器：是利用某些溶质在受到紫外光激发后，能发射可见光（荧光）的性质来检测的。FLD是一款具有高度灵敏度和高度选择性的检测器。其激发光源是氙灯，此灯不需要预热。其流通池和DAD的一样，也要定期用异丙醇冲洗，以保证性能。,检测器RID,HPLC各模块的工作原理及维护,二、开机/关机操作,SealwashComputerPowerChemstationPurge,SCPCP,开机操作：1，打开计算机。2，打开LC各模块的电源，等待仪器自检完毕，1-2min。3，双击桌面上“Instrument1Online”图标，进入化学工作站,在工作站打开各工作模块。4，打开SealWash清洗液开关，清洗10min。5，打开清洗阀，排除系统中的气泡，平衡差不多30min.6,拧上清洗阀，将流量设为所需流速，平衡30min即可以打样。,关机操作：1，如果使用了缓冲溶液流动相应先用水冲洗系统30min。2，用纯有机相冲洗系统30min。3，在工作站上关闭各个模块。4，退出工作站，关闭计算机。5，关闭LC各个模块的电源。,二、开机/关机操作,指示灯状态,开机/关机操作,逆时针旋转打开清洗阀，清洗阀打开时，液体从废液管中流出，为清洗状态。更换溶剂后，打开清洗阀，设置流量5ml/min，冲洗5-10min.顺时针旋紧清洗阀为关闭状态,此时流动相由毛细管流向进样器.,逆时针打开清洗阀,顺时针关闭清洗阀,毛细管出口,流向进样器,废液管,清洗阀打开时溶剂由此流向废液瓶.,开机/关机操作,清洗阀PurgeValve,每次用过仪器后必须做!,整台液相色谱仪的维护,1.在使用过含盐缓冲液后必须清水冲洗泵15分钟，此时必须打开排放阀，不能使废液进入色谱柱。2.关上排放阀，用90%+10%的水、甲醇溶液冲洗整个系统，时间为1520分钟，流量1ml