大鼠胰腺炎模型制备

大鼠急性胰腺炎模型制作0.5%戊巴比妥钠（剂量50mg/ kg）腹部皮下注射进行麻醉，大鼠麻醉后正中切口进入腹腔；在十二指肠对系膜缘无血管区上用5号皮试针头戳一小孔，通过肠壁穿刺孔将另一钝头5号皮试针插入十二指肠粘膜内的胆胰管开口并深入1cm；用两枚显微血管夹临时夹住胆胰管肝门部和穿刺针，以防注射牛磺胆酸钠时液体流人肝脏和十二指肠；用1ml注射器向胆胰管内匀速注射3.5%牛磺胆酸钠（用药剂量1.6ml/kg，注射速度0.2ml/min）；注射完毕后继续阻断胆胰管上下端5min，可观察到大鼠的胰腺出现明显的局限性或弥漫性充血水肿，表面肿大变硬，包膜张力增高，并可有少量血性腹水产生，说明动物模型已建立，移去夹在胆胰管上下端的显微血管夹；用6个“0”丝线荷包缝合穿刺孔，两层关腹。分笼安置大鼠。慢性胰腺炎动物模型自发性慢性胰腺炎大鼠使用自发性慢性胰腺炎大鼠(WBN/Kob rats)可以用在许多方面的研究中,如在研究药物对慢性胰腺炎的治疗时,Redding等使用WBN/Kob rats研究炎症因子COX-2抑制剂对慢性胰腺炎的治疗作用,发现大鼠的炎症浸润和纤维化均明显减轻。Hisada等给WBN/Kobrats服用troglitazone,4周后大鼠-平滑肌动蛋白的表达,I、III型胶原的沉积均明显减轻4。自发性慢性胰腺炎大鼠也可以用于对慢性胰腺炎发病机制的探讨,如Meili等发现WBN/Kob rats中分泌抑制蛋白(secretory tress protein,SSP)的合成和分泌增多5,Graf R发现WBN/Kob rats中胰蛋白酶分泌抑制蛋白(pancreatic secretory trypsin inhibitor,PSTI-I)分泌增多。由此可见自发性慢性胰腺炎大鼠模型稳定可靠,用途广泛,方法简便。但此模型的缺点是实验周期长,成本很高。该模型主要表现为慢性胰腺炎的早期特征,缺少晚期并发症的表现。胰管结扎法Widdison等不完全结扎杂种猫的主胰管,3周后,肉眼可见胰体、胰尾轻微萎缩和纤维化,光镜下表现为小叶内纤维化和腺泡萎缩。5周时肉眼可见明显的胰腺萎缩和纤维化,光镜下表现为典型的慢性胰腺炎特征,间质纤维化增厚,慢性炎症细胞浸润,部分腺泡破坏、纤维化,而未阻塞的副叶组织学表现正常。其机理可能为胰管压力升高,胰液逆流入胰腺间质,腺泡破坏,引发组织炎症和纤维化7。Boerma D等结扎了猪的胰管,发现在4周后即可出现胰腺功能、组织和生化的改变。如胰腺萎缩,胰导管内压明显升高,腺泡萎缩,同时有大量的胰腺星状细胞增生,胶原明显沉积,检查胰液的分泌量和含有的淀粉酶和脂肪酶都明显减少。Kishi S等结扎大鼠胰管的方法研究慢性胰腺炎胰腺纤维化的机制,发现在结扎7 d后,出现-平滑肌动蛋白的表达,10d后明显增多9。此模型模拟慢性胰腺炎发病中胰管阻塞的病理过程,可用于研究慢性胰腺炎的发病机理及外科治疗,结果稳定可靠,但手术具有一定的创伤,制备有一定困难,用显微外科制备效果更佳。蛙皮素注射法蛙皮素是胆囊收缩素和胃泌素的肽类似物,它可以刺激胰腺的外分泌,使胰蛋白水解酶分泌大量增加,达到能引起腺泡自溶的水平。20世纪70年代初开始,用蛙皮素注入动物腹腔诱导急性水肿型胰腺炎。依据急性胰腺炎的反复发作,最终形成慢性胰腺炎的病理过程,Neuschwander等给小鼠皮下注射蛙皮素,10周后形成典型的慢性胰腺炎纤维化特征10。Westerloo DJ等研究troglitazone对慢性胰腺炎的治疗作用,将小鼠腹腔注射蛙皮素,发现在第7周时小鼠出现慢性胰腺炎的特征,如胰腺纤维化、胰腺星状细胞数量增加,此药治疗可减轻胰腺损伤和炎症,减轻纤维化。用此种方法诱导慢性胰腺炎的方法符合慢性胰腺炎发病的过程,可用于探讨慢性胰腺炎的发病机理和研究病理生理改变,模型稳定,但蛙皮素的成本很高。二丁基二氯化物注射法二丁基二氯化物(dibutyltin dichloride,DBTC)是一种脂溶性物质,可经肝脏、胆囊排泄至胰管,引起胰管的细胞坏死和上皮增生,进而阻塞胰管。近年使用DBTC诱导慢性胰腺炎模型明显增多。如Inoue等给大鼠尾静脉注射DBTC,分别检测注射后1、3、7、14、28 d后胰腺组织的病理改变,发现在1、3 d可见明显的炎症细胞浸润,728 d可见单核细胞浸润明显,在第7 d后可见胰腺实质纤维化,28 d时小叶间的纤维化,腺泡萎缩明显,组织中的胰酶、淀粉酶含量均下降12。Sparmann等将DBTC注入SD大鼠,也得到了相类似的结果。Otte JM等为了研究慢性胰腺炎的发病机制,给予大鼠DBTC,发现一些生长因子对慢性胰腺炎纤维化形态的出现具有重要作用14。这种病理过程符合人慢性胰腺炎的病理过程,可用于慢性胰腺炎发病机制的探讨,尤其在近年来探讨胰腺纤维化的机制及寻找有效的抗纤维化药物中被广泛地加以使用。采用单次注射的方法也较方便,模型成功率约80 %,成本较低。三硝基苯磺酸胰管注射法王兴鹏等将SD大鼠的胆总管注射三硝基苯磺酸(trinitrobenenze sulfonic acid,TNBS)溶液。肉眼见动物在注射后即刻显示胰腺组织的水肿,第4周胰腺组织的表面苍白呈不规则结节状,部分大鼠可见胰腺萎缩。在光镜下第3周可见出现局限性纤维化,第4周见典型的病理学改变,即胰管周围及腺体周边区小叶内纤维化,伴炎症细胞浸润,局部腺体萎缩15。TNBS诱导慢性胰腺炎的机制可能是在胰管内注入溶于乙醇的TNBS时,乙醇作为有机溶剂溶解胰管上皮细胞的粘膜屏障,使TNBS与细胞内组织蛋白结合形成抗原,激发针对胰管上皮细胞的免疫反应。或通过与抗坏血酸的相互作用,产生氧自由基导致胰管上皮细胞的毒性作用。该模型的重复性好,成功率高,且TNBS价廉,成本较低,但手术中需开腹进行胰管注射,手术有一定难度。乙醇灌注法有大量报道指出单独灌注乙醇无法诱导慢性胰腺炎,但乙醇可加剧其他方法导致胰腺损伤的进程和强度。Portocarrero等采用大鼠注射DBTC,并在饮水中加入乙醇来加强胰腺打击强度16。还有用灌注乙醇联合不完全胰管结扎的方法诱导犬的慢性胰腺炎;将小鼠连续8周喂以含食物热量24 %的乙醇,再腹腔注射蛙皮素诱导慢性胰腺炎17;Tsnkamoto等发现给予喂食乙醇和高脂的Wistar大鼠,160 d后,有20 %30 %观察到慢性胰腺炎的病理学特征,如间质的纤维化、腺泡的萎缩等。这些模型的改变与人类慢