《抗与基因工程抗体》PPT课件.ppt

单克隆抗体与基因工程抗体,中山医科大学免疫学教研室张春艳,多克隆抗体(Polyclonalantibody),一.概念给动物接种抗原所获得的免疫血清或抗血清是多种抗体的混合物,它是由多种抗原决定簇刺激多株B细胞增殖分化所产生的,称为多克隆抗体.,二.多克隆抗体的应用免疫学检测被动免疫治疗和紧急预防三.存在问题特异性差,用于免疫学检测容易出现交叉反应,单克隆抗体(Monoclonalantibody,McAb),一.概念:通过B细胞杂交瘤技术,获得特异性针对某一种抗原决定簇的细胞克隆，产生均一性的抗体.二.B细胞杂交瘤的类型小鼠-小鼠大鼠-大鼠小鼠-人人-人,三.杂交瘤技术的原理1.亲本细胞的选择小鼠骨髓瘤细胞次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核苷转移酶(HGPRT)缺陷型免疫脾细胞经抗原免疫的BALB/c小鼠的脾脏,2.细胞融合骨髓瘤细胞PEG杂交瘤细胞脾细胞融合后细胞的类型:未融合的脾细胞杂交瘤细胞未融合的瘤细胞,3杂交瘤细胞的选择性培养DNA合成的途径：糖+氨基酸氨基喋呤(Aminopterin,A)TK核苷酸DNA胸腺嘧啶核苷TMP(Thymidine,T)核苷酸前体次黄嘌呤HGPRTIMP(Hypoxanthine,H),融合后细胞在HAT培养基中存活情况脾细胞（HGPRT+,TK+,不能长期生长）骨髓瘤细胞（HGPRT-,TK-，不能生长）杂交瘤细胞（HGPRT+,TK+，能够生长）,4.杂交瘤细胞的筛选和克隆化筛选：免疫荧光ELISA等克隆化：有限稀释法单个细胞显微操作法软琼脂培养法,5.单克隆抗体的生产体内：BALB/c小鼠体内诱发含有单抗的腹水体外：无血清培养基悬浮培养等6.单克隆抗体的纯化硫酸铵沉淀法离子交换层析A蛋白-Sepharose亲和层析,四.单克隆抗体的特性高度均一性：纯度很高的均一性抗体高度专一性：只对抗原分子上某一抗原决定簇起反应大量产生及稳定性：杂交瘤细胞能在体内外无限繁殖之传代,五.单克隆抗体在医学上的应用,（一）用作诊断试剂1.检测淋巴细胞表面分子，区分不同分化阶段的淋巴细胞，鉴别淋巴细胞。2.鉴定病原体，准确诊断传染病。3.用于肿瘤的诊断和分型4.激素类单抗用于测定体内激素含量，判断内分泌的功能状态,（二）用作研究工具纯化抗原分析和探查抗原结构分析抗原决定簇分子的功能（三）用于疾病的治疗抗细胞表面分子单抗，用于移植排斥反应的防治抗细胞因子单抗用于自身免疫性疾病的治疗抗肿瘤单抗用于肿瘤的导向治疗,单克隆抗体用于免疫治疗存在的问题单克隆抗体的特异性由于肿瘤特异性抗原较少，缺乏对肿瘤有严格特异性的单抗，对正常组织有交叉反应异种抗体反应鼠源性单抗用于人体，导致异源性超敏反应,基因工程抗体(Geneticengineeringantibody),概念：根据研究者的意图，采用基因工程方法，在基因水平，对免疫球蛋白基因进行切割、拼接或修饰后导入受体细胞进行表达，产生新型抗体。主要包括嵌合抗体、单链抗体、人源化抗体、双价抗体和双特异性抗体。,一.嵌合抗体(chimericantibody)从杂交瘤细胞分离出功能性可变区基因，与人Ig恒定区基因连接，插入适当表达载体，转染宿主细胞，表达人-鼠嵌合抗体。特点：减少了鼠源性抗体的免疫原性，同时保留了亲本抗体特异性结合抗原的能力。,二.单链抗体(singlechainantibody)用基因工程方法，将抗体重链和轻链可变区通过一个连接肽连接而成的重组蛋白。特点：能保持与抗原结合的性能，分子量小，穿透性强，体内循环半衰期短，免疫原性低。,单链抗体的应用：用于肿瘤的导向治疗肿瘤的影像分布基因治疗细胞内抗体：在细胞内表达特异性识别某一基因产物的抗体，可干扰该基因产物的生物活性。4。研究基因结构与功能的关系,三.人源化抗体(humanizedantibody)1.将小鼠的CDR序列移植到人抗体可变区框架中，产生的抗体称为CDR移植抗体。2.将小鼠Ig基因敲除，转染人Ig基因，在小鼠体内产生人Ab，再经杂交瘤技术，产生大量完全人源化抗体,四、双价抗体与双特异性抗体(bispecificantibody)许多抗原抗体反应要求双价的抗原结合位点，使抗