SNT 1444-2004 大鼠流行性出血热间接免疫荧光试验_第1页
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文档简介

+l中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 1444of 1444标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人:胡永强、李树清、王巧全、徐红。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 1444行病学调查和免疫监测。2材料2. a 122. 2. aC l )。2. . . 0. 0200伊文斯蓝液和90%甘油缓冲盐水的配制见附录A。注;1单通道可调移液器及加样头。保湿盒。恒温箱。. 1多孔流行性出血热病毒抗原片(存)。流行性出血热阴性血清。记的兔抗大鼠坛采样被检大鼠无菌采血0. 5 0 血液凝固后，以2 000 r/离血清。血清经56C 30 一20保存备用。4操作方法4. 1准备抗原片从低温冰箱中取出流行性出血热病毒细胞抗原片，冷风吹干。 性及阴性血清1，20稀释。分别取。1 0l 4磷酸缓冲液1. 9 匀。4. 3加样抗原片编号后，取1:20稀释的被检血清10 张抗原片均设阴性血清、阳性血清对照及标本自发荧光对照。阴性血清、阳性血清也与被检血清同样取10 本自发荧光对照在对照孔内加人。. 01 4磷酸缓冲液10 700. 01 . 4磷酸缓冲液(中间更换一次)振荡洗涤三次，每次5 用蒸馏水漂洗一次，冷风吹干。文斯蓝液稀释. 7加荧光抗体抗原片中每孔加人10川工作浓度的荧光抗体。5操作。油缓冲盐水，封片置荧光显微镜下观察结果。5结果判定5. 1判定方法在荧光显微镜下观察，正常组织细胞被染成红色。细胞内病毒特异性免疫荧光为黄绿色颗粒，分布在感染细胞的胞浆内。出血热病毒的特异性荧光一般是散在的针尖大小的细颗粒，但亦可为粗颗粒、团块，甚至片状荧光。1自发荧光对照:无荧光，细胞被染成红色。荧光，3阳性血清对照:细胞内病毒特异性免疫荧光闪亮，呈针尖状或片状。检样本细胞浆内无荧光，细胞被染成红色判为阴性反应;被检样本细胞浆内出现明显黄绿色荧光颗粒，判为阳性反应。 1444范性附录)试荆配制A. 1 1/15 磷酸氢二钠的配制称12 g，加蒸馏水溶解后定容至1 000 1/15 磷酸二氢钾的配制称O, g，加蒸馏水溶解后定容至1 000 . 3生理盐水的配制称8.5 g 容至1 000 . 4 0. 01 4磷酸缓冲液的配制1/15 磷酸氢二钠81 5 磷酸二氢钾19 用1/15 0. 01 5 磷酸氢二钠73 5 磷酸二氢钾27 用1/15 磷酸盐液校正至2,121高压灭菌15 文斯蓝液的配制称0. 1 2
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