自身抗体检测及应用PPT课件

.,1,自身抗体的检测及意义,.,2,自身免疫(autoimmunity)免疫系统针对自身成分发生免疫应答反应出现自身抗体或致敏淋巴细胞的现象自身抗体(autoantibody)针对自身组织、器官、细胞及其成分的抗体。自身免疫性疾病(autoimmunedisease，AID)自身免疫反应导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。免疫系统紊乱,几个概念,.,3,自身抗体,自身免疫性疾病的重要标志高滴度存在于自身免疫性疾病患者与疾病的活动性相关性参与免疫病理性改变损伤,.,4,常用的检测方法,间接免疫荧光法（IIF）ELISA免疫印迹法（Western-blot）酶免疫斑点法,.,5,常检测的自身抗体,类风湿因子（RF）抗核抗体（ANA）抗可提取性核抗原抗体（ENA）抗中性粒细胞胞浆抗体（ANCA）抗环瓜氨酸抗体（CCP）抗心磷脂抗体（ACA）,.,6,类风湿因子（RHEUMATOIDFACTOR,RF）,抗变性IgGFc的自身抗体，主要类型是IgM型,检测方法：1.胶乳颗粒凝集实验定性、半定量，敏感性和特异性不高，测定IgM-RF2.速率散射比浊法（ARRAY、IMAGE）定量、准确、快速，测定IgM-RF3.ELISA定量、准确，可测定不同类型的RF,.,7,临床应用：,（1）RF在多种自身免疫性疾病患者中均可被检出。,（2）RF滴度与RA患者临床表现呈正相关，IgM-RF效价80IU/ml并伴有严重关节功能障碍时通常提示患者预后不良。,.,8,抗核抗体（ANTINUCLEARANTIBODY，ANA）,真核细胞（如HEp-2细胞、肝细胞）的各种细胞核成分为靶抗原检测的自身抗体的总称。,.,9,ANA概念,指抗细胞核成分（DNA，RNA，蛋白质和酶）的抗体。广义：抗核酸（Nucleicacid）和核蛋白（Nucleoprotein）抗体的总称某些核抗原成分在核仁和胞浆内比核质内更丰富,.,10,ANA,中性粒细胞,DNP(DNA-Histone)+抗DNP+补体,均质体,LE细胞,LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物过敏，慢活肝等亦可阳性。抗DNP取代LE细胞的检测,+,.,11,间接免疫荧光法,.,12,间接免疫荧光法,.,13,分类和命名,以首先检出该抗体的患者名字命名，如抗Sm、抗Sa抗体等；以相关疾病命名，如抗Scl-70、抗SS-A、抗SS-B抗体等；以抗原的部位命名，如抗核仁抗体、抗线粒体抗体、抗核膜抗体、抗细胞浆抗体等；以抗原的化学性质进行分类命名，如抗DNA、抗RNP、抗组蛋白抗体等。,.,14,抗核抗体检测方法,间接免疫荧光法（indirectimmunofluorescence,IIF）酶免疫斑点法ELISA免疫印迹法（Western-blot）,.,15,ANA谱条法,ENA斑点法,.,16,细胞核细胞浆细胞骨架细胞周期均质型核糖体型肌蛋白型中心体型斑点型线粒体型波形纤维蛋白型纺缍体型核仁型高尔基体型细胞角蛋白型纺缍丝型着丝点型溶酶体型原肌球蛋白型中间体型周边型颗粒型纽带蛋白型PCNA型核点型(dots)结蛋白(桥粒)型,IIF检测ANA荧光染色模型,.,17,斑点型（nRNP/Sm）,高滴度的抗U1-nRNP为MCTD的特征。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性。,斑点型（SSA/SSB）,抗SSA最常出现于SS及新生儿红斑狼疮（100%）。抗SSB抗体几乎仅见于女性，可出现于SS和SLE。,.,18,均质型,抗dsDNA抗体抗组蛋白抗体(histone)抗ssDNA抗体抗核小体抗体(nucleosome),.,19,抗dsDNA抗体,SLE特异性抗体，与病情活动度相关。,.,20,周边型,可见于胶原病、PBC、CAH等患者,.,21,核点型（DOTS）,见于SLE、SS、PBC、风湿病。,抗着丝点型,PSS局限型标志抗体。,.,22,抗PM-Scl（PM-1）抗体,见于重叠综合征（多发性肌炎PM/皮肌炎DM/弥漫性PSS）,.,23,抗核糖体P蛋白（rib-P）抗体,抗线粒体抗体（AMA）,SLE标志抗体,原发性胆汁性肝硬化标志抗体,.,24,抗Jo-1抗体,抗高尔基体抗体,多发性肌炎（PM）标志抗体,偶见于SLE和SS,.,25,抗肌动蛋白抗体,见于自身免疫性慢性活动型肝炎,.,26,抗ENA抗体谱,ENA(extractablenuclearantigen)：可提取核抗原的总称临床常检测的抗ENA抗体谱主要包括：抗Sm抗U1-RNP抗SSA抗SSB抗Jo-1抗Scl-70抗rib-P蛋白,.,27,检测方法,双向免疫扩散（ID）对流免疫电泳（CIE）免疫印迹法（Western-blot）ELISA酶免疫斑点法,.,28,免疫印迹法,SDS-PAGE电泳,转移电泳,酶免疫检测,.,29,是一组以人中性粒细胞胞浆成分为靶抗原，与临床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体，对系统性血管炎、炎症性肠病等疾病的诊断与鉴别诊断具有重要意义。,抗中性粒细胞胞浆抗体（anti-neutrophilcytoplasmicautoantibodies,ANCA）,.,30,荧光染色型,靶抗原,ANCA荧光染色型与靶抗原,.,31,周边型抗中性粒细胞胞浆抗体（pANCA）,主要见于炎症性肠病（溃疡性结肠炎和克罗恩病）,.,32,胞浆型抗中性粒细胞胞浆抗体(cANCA),主要见于Wegeners肉芽肿及微小多动脉炎,.,33,ANCA临床应用,髓过氧化物酶（MPO）与显微镜下多血管炎、坏死性新月体型肾小球肾炎、过敏性肉芽肿性血管炎相关、,杀菌/通透性增高蛋白（BPI）主要见于肺部炎症性疾病并与长期慢性绿脓杆菌感染有一定关系,蛋白酶3（PR3）与Wegeners肉芽肿（WG）密切相关。仅cANCA诊断WG的特异性大于90%，联合PR3可超过95%，活动期几乎100%阳性。,组织蛋白酶G(Cath-G)白细胞弹性蛋白酶(HLE)乳铁蛋白(LF),可见于SLE、IBD、PBC、PSC等,.,34,AKA主要见于RA，阳性率36%59%，特异性95%99%，其出现可以先于临床表现；高滴度可预示较严重的RA类型。,抗角蛋白抗体（AKA）,.,35,一组针对含有磷脂结构抗原物质的自身抗体，主要包括抗心磷脂抗体、抗磷脂酸抗体和抗磷脂酰丝氨酸抗体。类型：IgG、A、M型，IgG型最常见，其次是IgM型，IgA型与自身免疫性疾病的关系较小。,抗磷脂抗体（anti-phospholipidantibody,APLA）,.,36,检测方法：常用ELISA临床应用：在SLE中总阳性检出率达70%80%，与病情活动显著相关；ACA阳性者发生血管炎、溶血性贫血、心脏及中枢神经精神系统损伤的几率明显。在RA患者阳性率为33%49%。ACA阳性是脑出血及脑梗塞的危险因素。与反复自然流产和胎儿发育迟缓有一定的相关性,.,37,部分自身免疫性疾病中自身抗体的检出率,.,38,ANA在自身免疫性疾病中的检出率,.,39,系统性红斑狼疮(SLE),.,40,混合性结缔组织病（MCTD）,.,41,类风湿性关节炎（RA）,.,42,原发性干燥综合征（SS）,.,43,进行性系统性硬化症（PSS）,.,44,多发性肌炎/皮肌炎(PM/DM),.,45,自身免疫性慢性活动性肝炎(AIH),抗原类型,阳性率（%）,肌动蛋白（Actin）,4090,ANA(板层素，SSA等),3040,肝肾微粒体（LKM-1）,7,可溶性肝抗原（SLA）,100,线粒体2型（AMA-M2）,510,线粒体9型（AMA-M9）,10,.,46,原发性胆汁性肝硬化(PBC),.,47,怀疑SLE，