微生物培养TYppt课件

.,1,课题1微生物的实验室培养,专题2:微生物的培养与应用,.,2,（2）按培养基的物理形态分：液体培养基半固体培养基固体培养基,一基础知识:,（3）按培养基的功能分：基础培养基选择培养基鉴别培养基,（1）按培养基的化学成分分：天然培养基合成培养基,.,3,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,半固体培养基：,(是否运动),无动力,有动力(弥散),固体培养基：菌落,.,4,选择培养基在培养基中加入（缺少）某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。用以菌种的分离加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物,鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品。用以菌种的鉴别。,.,5,2.培养基的成分不管哪种培养基，一般都含有水、无机盐、碳源和氮源等营养物质。另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,生长因子(如维生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。,.,6,练习,1.不能作为异养微生物碳源的是（）A牛肉膏B含碳有机物C石油D含碳无机物,2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差别是（）A碳源B氮源C无机盐D生长因子,.,7,【典例解析】,例:关于微生物营养物质的叙述中，正确的是()A.是碳源的物质不可能同时是氮源B.凡碳源都提供能量C.除水以外的无机物只提供无机盐D.无机氮源也能提供能量,.,8,例右表是某微生物培养基成分，请据此回答：（1）右表培养基可培养的微生物类型是。（2）若不慎将过量NaCl加入培养基中。如不想浪费此培养基，可再加入，用于培养（4）表中营养成分共有类。（5）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是。,自养型微生物,含碳有机物,金黄色葡萄球菌,.,9,芽孢,有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体，叫做芽孢。特点：1、对恶劣的环境，如干旱、高温等，有很强的抵抗力2、小而轻，可随风飘散3、当环境适宜（如温度、水分适宜）的条件下，芽孢又可以萌发，形成一个细菌.,在生物体的一定部位产生一种特殊的生殖细胞叫孢子。孢子的特点是能直接长成新个体,孢子,.,10,思考：1.获得纯净培养物的关键？2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考）3.消毒和灭菌有何不同？4.常用的消毒和灭菌方法有哪些？,无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,.无菌技术,防止外来杂菌的入侵,.,11,（1）消毒：用温和的化学或物理方法，杀死物体表面或内部的部份微生物的过程。,2.消毒与灭菌的概念及两者的区别,（2）灭菌：以强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物，达到完全无菌的过程。灭菌与消毒技术是微生物有关工作中最普通也是最重要的技术。,.,12,1、煮沸消毒法:100煮沸5-6min2、巴氏消毒法：70-75下煮30min或80下煮15min3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源4、紫外线消毒：对实验室空气消毒,(1)消毒的方法：,3.常用的消毒与灭菌的方法,.,13,灼烧灭菌干热灭菌：160-170下加热1-2h。高压蒸气灭菌：100kPa、121下维持15-30min.,.灭菌的方法：,.,14,列表比较消毒与灭菌,较为温和,强烈,能,不能,部分生活状态的微生物,全部微生物,.,15,1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？,2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。（1）培养细菌用的培养基与培养皿（2）玻棒、试管、烧瓶和吸管（3）实验操作者的双手,答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。,答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。,旁栏思考,.,16,常识,1无菌技术包括：（1）对实验操作空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒；（2）将培养器皿、接种用具和培养基等器具进行灭菌；（3）为避免周围微生物污染，实验操作应在酒精灯火焰附近旁进行；（4）避免已灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。2消毒方法：（1）日常生活经常用到的是煮沸消毒法；（2）对一些不耐高温的液体，则使用巴氏消毒法（作简要介绍）；（3）对接种室、接种箱或超净工作台首先喷洒石炭酸或煤酚皂等溶液以增强消毒效果，然后使用紫外线进行物理消毒。（4）实验操作者的双手使用酒精进行消毒；（5）饮水水源用氯气进行消毒。3灭菌方法：（1）接种环、接种针、试管口等使用灼烧灭菌法；（2）玻璃器皿、金属用具等使用干热灭菌法，所用器械是干热灭菌箱；（3）培养基、无菌水等使用高压蒸汽灭菌法，所用器械是高压蒸汽灭菌锅。（4）表面灭菌和空气灭菌等使用紫外线灭菌法，所用器械是紫外灯。,.,17,二.实验操作(以培养大肠杆菌为例),.制备牛肉膏蛋白胨培养基,1.计算2.称量3.溶化4.灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121，灭菌1530min。5.倒平板:待培养基冷却到50左右时，在酒精灯附近倒平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。,.,18,倒平板操作,.,19,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。,2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。,问题讨论,1.培养基灭菌后，需要冷却到50左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,.,20,3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。,.,21,关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中，错误的是（）A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸C.待培养基冷却至50左右时，进行倒平板D.待平板冷却凝固约5min10min后，将平板倒过来放置,.,22,.纯化大肠杆菌,平板划线法和稀释涂布平板法。,微生物的接种的常用接种方法有：,1.平板划线的操作方法,.,23,.,24,答：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。,问题讨论,1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,.,25,2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？,答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,.,26,答：应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等等。,问题讨论,涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？,2.稀释涂布平板的操作方法,.,27,三.结果分析与评价,.培养基的制作是否合格如果未接种的培养基在恒温箱中保温12d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。.接种操作是否符合无菌要求如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。.是否进行了及时细致的观察与记录培养12h与24h后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能观察到其他一些细微的变化。,.,28,4.菌种的保存,固体斜面培养基上4保存，菌种易被污染或产生变异,3.微生物的恒温培养,.长期保存：,20甘油管在冷冻箱中保藏,.临时保藏：,.,29,例1某小组同学为了调查湖水中细菌的污染情况而进行了实验。实验包括制备培养基、灭菌、接种及培养、菌落观察计数。请回答与此实验相关的问题。（1）培养基中含有蛋白胨、淀粉分别为细菌培养提供了和。除此之外，培养基还必须含有的基本成分是和。（2）对培养基进行灭菌，应该采用的方法是。（3）为了尽快观察到细菌培养的实验结果，应将接种了湖水样品的平板置于中培养，培养的温度设定,氮源,碳源,无机盐,水,高压蒸汽灭菌,恒温箱,.,30,在37。要使该实验所得结果可靠，还应该同时在另一平板上接种作为对照进行实验。（4）培养20小时后，观察到平板上有形态和颜色不同的菌落，这说明湖水样品中有种细菌。一般说来，菌落总数越多，湖水遭受细菌污染的程度越。（5）如果提高培养基中NaCl的浓度，可以用于筛选耐细菌，这种培养基被称为。,无菌水,多,高,选择培养基,盐,.,31,练习,对买回来的菌进行扩大培养,首先制备试管培养基,写出制备固体牛肉膏蛋白胨培养基所需的原料：_其中提供氮源的主要是_；提供能源的主要物质是_；琼脂的作用是_，它不提供营养。,牛肉膏、蛋白胨、水、无机盐、琼脂,蛋白胨,牛肉膏,凝固剂,.,32,练习,微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.,.,33,练习,微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.,比例,.,34,练习,微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.,比例,搅拌,.,35,练习,微生物在生长过程中对各种成分所需量不同,故制备培养基时各成分要有合适的_,在烧杯加入琼脂后要不停地_,防止_.,比例,搅拌,琼脂糊底引起烧杯破裂,.,36,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,.,37,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,高压灭菌锅,.,38,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,高压灭菌锅,100KPa,.,39,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,高压灭菌锅,100KPa,121,.,40,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,高压灭菌锅,100KPa,121,1530min,.,41,练习,将配制好的培养基转移到锥形瓶中，加棉塞后包上牛皮纸并用皮筋勒紧放入_中灭菌，压力为_，温度为_，时间_，灭菌完毕拔掉电源，待锅内压力_，将试管取出。,高压灭菌锅,100KPa,121,1530min,自然降至零后,.,42,练习,使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.,.,43,练习,使用高压蒸汽灭菌锅时注意,先向锅内倒入_，把锅内水加热煮沸并将基中原有冷空气彻底排除后将锅密闭.,适量水,.,44,练习,从一支试管向另一支试管接种时注意，接种环要在酒精灯_焰灭菌.并且待接种环_后沾取菌种，试管口不能离开酒精灯火焰附近,将接种的试