动物实验技术.ppt

,动物实验基本技术,一、实验动物标记编号的方法(一)染色法：1、单色涂染法：在每组动物不超过l0只的情况下适用。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂：3-5苦味酸溶液，可染成黄色。,第一节小鼠,方法步骤：(1)涂染顺序：从左到右、从上到下。(2)左前肢为l号、左侧腹部2号、左后肢3号。(3)头部4号、背部5号、尾根部6号。(4)右前肢7号、右侧腹部8号、右后肢9号。(5)不作染色标记为10号。,2、双色涂染法：在每组动物不超过100只的情况下适用。实验动物：大鼠、小鼠。常用染色剂：(1)3-5苦味酸溶液，可染成黄色。作为“个”位数。(2)0.5%中性红或品红溶液，可染成红色。作为“十”位数。,方法步骤：(1)用两种颜色同时进行染色标记。(2)用苦味酸(黄色)染色标记作为个位数，个位数的染色标记方法同单色涂染法。(3)用品红(红色)染色标记作为十位数，,（4）左前肢为10号、左侧腹部20号、左后肢30号，头部40号、背部50号、尾根部60号，右前肢70号、右侧腹部80号、右后肢90号第100号不作染色标记。,二、小鼠的抓取保定：器材：小鼠饲养盒+面罩1套。方法步骤：1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在饲养合的面罩上。2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后、颈背部的皮肤，将小鼠提起。,3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。,三、小鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入小鼠的胃内。器材：小鼠灌胃针1支、注射器1支、小鼠饲养盒+面罩1套、生理盐水、烧杯。,方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。2、左手捉持小鼠，使小鼠头部向上。3、右手将灌胃针头尖端从小鼠口角处进针放进小鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入小鼠的胃内。灌胃针插入约3cm.4、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的药液灌入小鼠的胃中。,剂量：约0.5ml10g体重。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。,（二）注射给药1、皮下注射给药：原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)注射部位：选小鼠项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一锐角角度刺入皮下，(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01ml0.03mlg体重。,2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1ml注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)操作时1人先将小鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住小鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位的皮肤。(3)将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角迅速刺入后注入药液。注射量：0.01m1g体重。,3、静脉注射给药原理：将药液注入小鼠的尾静脉。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、金属笼或小鼠固定器、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)将小鼠放在金属笼或小鼠固定器中，通过金属笼或小鼠固定器的孔拉出小鼠尾巴。(2)用左手捏住小鼠尾巴中部，用75酒精棉球反复擦拭尾部。,(3)注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴，以无名指夹住尾巴的末梢。(4)右手持4号针头的注射器，使针头与静脉平行（小于30度角）。,(5)从小鼠尾巴下14处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物。(6)拔出针头后，用干棉球压住注射部位约l、2min，防止出血。注射量：0.005m10.01m1g体重。,4、腹腔注射给药原理：将药液注入小鼠的腹腔。器材：注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)用左手将小鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。,(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量：0.01m10.02m1g体重。,三、小鼠的采血摘除眼球采血法：原理：将小鼠的眼球摘除后取血液的方法。器材：眼科弯镊、试管。,方法步骤：(1)左手抓住小鼠颈部皮肤，轻压在实验台上，取侧卧位;(2)左手食指尽量将小鼠眼周皮肤往颈后压，使眼球突出。,(3)用眼科弯镊夹去眼球，将鼠倒立，用试管接住流出的血液。(4)采血完毕立即用纱布压迫止血。采血量：每次0.6-1.0ml/次。,一、大鼠的抓取保定：器材：大鼠饲养盒+面罩1套。方法步骤：1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。,第二节大鼠,二、大鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入大鼠的胃内。器材：大鼠灌胃针1支、注射器1支、大鼠饲养盒+面罩l套、生理盐水、烧杯。,方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的药液。2、左手捉持保定大鼠，右手将灌胃针头尖端放进大鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内。灌胃针插入约5cm.,3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的生理盐水灌入大鼠的胃中。剂量：0.010.02mlg体重。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。,(二)注射给药1、皮下注射给药原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：5ml注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)注射部位：选大鼠的项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，用注射针头取一锐角角度刺入皮下。(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01mlg体重。,2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)操作时1人先将大鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住大鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位的皮肤。(3)将注射器针头在动物后肢大腿内侧肌肉丰富处呈90度角，迅速刺入后注入药液。注射量：0.01m1g。,3、静脉注射给药原理：将药液注入大鼠的尾静脉。器材：1ml注射器1支、生理盐水、烧杯、金属笼或大鼠固定器、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)将大鼠放在金属笼或大鼠固定器中，通过金属笼或鼠夹的孔拉出大鼠尾巴。(2)用左手捏住大鼠尾巴中部，用75酒精棉球反复擦拭尾部。(3)注射时，以左手拇指和中指捏住鼠尾两侧，用食指从下面托起尾巴。,(4)右手持4号针头的注射器，使针头与静脉平行(小于30度角)。（5)从大鼠尾巴下14或13处进针，仔细观察，如果无阻力，无白色皮丘出现，说明已刺入血管，即可注入药物。注射量：0.0050.01mlg体重。,4、腹腔注射给药原理：将药液注入大鼠的腹腔。器材：注射器1支、生理盐水、烧杯。,方法步骤：(1)用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。,(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。注射量：0.010.02m1g体重。,三、大鼠的麻醉原理：是使用非挥发性麻醉药对动物进行全麻术的方法。器材：3戊巴比妥钠、注射器。,方法步骤：(1)用左手将大鼠捉持保定，使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部。(2)右手持注射器将针头在下腹部靠近腹白线的两侧进行穿刺。,(3)针头刺入皮下后进针3mm左右，接着使注射针头与皮肤呈45度角刺入腹肌，穿过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后抵抗感消失。(4)固定针头，保持针尖不动，回抽针栓，如无回血、肠液和尿液后即可注射药液。,四、大鼠的采血眼眶后静脉丛(窦)取血：器材：毛细管(玻璃或塑料均可)、1肝素溶液、干燥皿、乙醚、试管、干棉球。,方法步骤：1、先将毛细管浸泡在1肝素溶液中数分钟，然后取出干燥备用。2、将大鼠进行麻醉，使大鼠保持侧卧位。,3、左手拇指、食指抓住两鼠耳之间的颈部头皮，并轻轻向下压迫颈部两侧，致大鼠静脉血回流障碍，眼球外突，眶后静脉丛充血。4、右手持毛细管由大鼠的内毗部插入结膜，使毛细管与眶壁平行地向喉头方向推进，深度约35mm。5、轻轻旋动毛细管，使其穿破静脉丛，让血流顺毛细管流出。采血量：0.40.6ml次。,一、豚鼠的抓取保定：器材：大鼠饲养盒+带面罩l套。,第三节豚鼠,方法步骤：1、先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。3、用右手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定。,二、豚鼠的给药方法：(一)灌胃给药原理：将药液直接注入豚鼠的胃内。器材：大鼠灌胃针1支、注射器1支、生理盐水、烧杯。,方法步骤：1、将灌胃针连接在注射器上，吸入一定量的生理盐水。2、左手捉持保定豚鼠，右手将灌胃针头尖端放进豚鼠口咽部，顺咽后壁轻轻往下推，灌胃针会顺着食管滑入大鼠的胃内。灌胃针插入约5cm。,3、用右手食指将针栓慢慢往下压，将注射器中的生理盐水注入豚鼠的胃中。剂量：15ml。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。,(二)注射给药1、皮下注射给药原理：将药液注入皮下结缔组织，经毛细血管、淋巴管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)注射部位：选豚鼠的项背部的皮下。(2)常规消毒注射部位的皮肤，注射针头取一锐角角度刺入皮下。(3)将针头轻轻向左右摆动，易摆动则表示已刺入皮下，再轻轻抽吸，如无回血，可缓慢地将药物注入皮下。注射量：0.01mlg。,2、肌肉注射给药原理：将药液注入动物的肌肉组织，经毛细血管吸收进入血液循环。器材：1m1注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)操作时1人先将豚鼠捉持保定好。(2)另1人用左手抓住豚鼠的1条后肢，右手拿注射器，常规消毒注射部位。(3)将注射器针头在动物后肢大腿外侧肌肉丰富处呈60度角，迅速刺入后注入药液。注射量：0.01mlg。,一、兔的抓取保定：(一)方法1：步骤：1、用右手把兔的两耳拿在手心并抓住颈后部皮肤，把兔提起。2、然后用左手托住兔的臀部。,第四节兔,(二)方法2：器材：兔保定架1个。步骤：1、打开保定架的上盖，抓取并将兔放进架内，迅速关上保定架的上盖。2、右手抓住兔耳朵将头部拉过保定架的卡栓，将兔的脖子保定。3、如果兔挣扎，可用手在它的背上轻轻抚摸，使其安静。,二、兔的给药方法(一)灌胃给药原理：将药液直接注入兔的胃内。器材：兔开口器、14号胃管、注射器1支、生理盐水、烧杯、石蜡油。,步骤：1、将兔放进保定架内，助手用手轻轻压住兔的背部，避免兔的挣扎。2、灌胃者用在手拇指和中指挤压兔两颊，将下颌挤开使兔被动张口。,3、右手将开口器从一侧口角插入口腔并固定。4、用泡在石蜡油中的胃管，经开口器的孔插入，向前推进约15cm，可达胃内。,5、在插管时应将胃管另一端泡在水中确认没有冒气泡，即可用注射器经胃管注入药液。灌胃量：80-150ml只次。注意：在灌胃过程中，避免误插入气管。,三、兔耳缘静脉或兔耳中央动脉穿刺（用于兔的给药、抽血）：原理：穿刺兔的耳缘静脉或耳中央动脉。器材：兔保定架、注射器1支、生理盐水、烧杯、酒精、碘酒、棉球。,方法步骤：(1)将兔放在保定架内保定。(2)酒精消毒并揉搓血管，使兔的耳缘静脉或耳中央动脉充盈。,(3)用左手食指和中指夹住兔的耳缘静脉或耳中央动脉近心端，拇指和小指夹住耳郭边缘部分，无名指和小指放在耳郭下作垫。(4)右手拿注射器，针尖的斜面朝上，将针头插入血管，放松对静脉近心端的压迫，缓慢把地药液注射进血管，或将血液抽出来。注射或采血量：5一10ml。,一、注意事项：1、应遵循安乐死的原则。2、要保证实验人员的安全。3、要确认实验动物已经死亡。4、要注意环保，避免污染环境，还要妥善处理好尸体。,第五节实验动物处死方法,二、处死方法：（一）颈椎脱臼处死法1、是将实验动物的颈椎脱臼，断离脊髓致死，为大、小鼠最常用的处死方法。2、用右手抓住鼠尾根部并将其提起，放在鼠笼盖或其他粗糙面上,3、用左手拇指、食指用力向下按压鼠头及颈部。4、右手抓住鼠尾根部用力拉向后上方，造成颈椎脱臼，脊髓与脑干断离，动物立即死亡。,（二）断头处死法：此法适用于鼠类等较小的实验动物。（三）击打头盖骨处死法：主要用于豚鼠和兔的处死。,（四）放血处死法：此法适用于各种实验动物，详见教材。（五）空气栓塞处死法：处死兔、猫、犬常用此法，详见教材。（六）过量麻醉处死法：此法多用于处死豚鼠和家兔，详见教材。（七）二氧化碳吸入法：让实验动物吸入大量C02等气体而中毒死亡。,一、基本要求（一）实验动物背景资料记录1、实验动物来源、种类、年龄、性别、原编号、体重、临床症状等。2、剖检时间、地点，麻醉方法、时间、麻醉者，处死方法、解剖者、记录者、温度、湿度。3、其它指标：动物剖杀前禁食（不禁水）时间一致，为12h。,第六节实验动物的病理剖检,（二）病理取材基本要求1、病理检查应分层次进行，先进行一般外观观察，然后剖检观察，再进行光镜详细检查。2、通常选择正常与病变交界处组织，即包括病变本身及病变周围组织。,3、对照组动物相同器官取材时，选材部位应尽量一致。4、肉眼看不到明显病变时，各试验组选取标本位置应一致。5、所选组织应包括脏器全部层次结构或重要结构，如肾应包括皮质、髓质和肾盂。,6、体积大和分叶的器官，应视不同组织选取多个部位，小器官可整体取材并固定，如淋巴结、扁桃体、甲状腺等。7、胃肠标本应将内容物冲洗掉，以免内容物影响组织的固定，产生自溶。,8、所取材料应尽量保持肉眼标本的完整性，不宜过厚或过薄，一般厚约3-5mm，大小为1.5-2cm。9、切取组织时不要挤压，使用锋利刀具，少用剪刀，