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骨髓细胞染色体制备与观察,实验目的实验原理实验用品实验步骤绘图思考,骨髓细胞染色体制备与观察,实验目的：掌握制备方法，计算分裂中期染色体数目，观察端着丝点的形态特点实验原理：小鼠骨髓细胞中的造血干细胞，具有高度的分裂能力，可得到较多的细胞中期的分裂相,骨髓细胞染色体制备与观察,实验用品：材料：小白鼠（2n=42）用品：显微镜、冰箱、恒温箱、恒温水浴锅、离心机、注射器、解剖剪、镊子、移液器、载玻片、烧杯等。药品：0.1%(W/V)秋水仙素、2%(W/V)柠檬酸钠溶液、0.07M氯化钾溶液、（或0.35%氯化钾溶液）、蒸馏水、Giemsa原液，甲醇、乙酸等。,骨髓细胞染色体制备与观察,实验步骤：预处理取股骨冲洗骨髓离心低渗固定离心滴片染色观察,骨髓细胞染色体制备与观察,1、取健康小白鼠（约65-90天龄），腹腔注射0.1%秋水仙素溶液0.1ml，剂量为4ml/Kg动物体重。2、2-3小时后，用损伤脊椎法处死小白鼠，取出股骨，把肌肉刮净，剪下，用2%柠蒙酸钠溶液洗净血污及残渣。3、剪去关节头，用3-5ml2%柠檬酸钠溶液冲洗股骨断面至粉白色，制备了骨髓细胞悬浮液。,骨髓细胞染色体制备与观察,4、将骨髓细胞悬液，1000rpm离心10分钟。5、吸去上清液，加入0.075M氯化钾溶液5ml，立即将细胞团吹打均匀，置37水浴25-30分钟。6、加入卡诺氏固定液5-6滴，搅拌均匀进行预固定10分。7、再以1000rpm离心10分钟。,骨髓细胞染色体制备与观察,8、弃上清液，仅留约0.2-0.3ml的细胞团与部分上清液，吹均匀制成细胞悬浮液涂片观察。注意：如果细胞分散的不好，可再按上述方法再固定1-2次，使染色体进一步分散。9、取预先冰冻的载玻片，滴2-3滴细胞悬浮液于其上，立即吹气均匀打散、过火、置室温中自然干燥。,骨髓细胞染色体制备与观察,10、用Giemsa染液,染色15-20分钟，自来水冲洗，空气干燥。11、在低倍镜下观察中期分裂相细胞，计算染色体的数目，以确定其细胞2n的染色体数目。,骨髓细胞染色体制备与观察,绘图：绘制一个图像清晰、形态典型的小白鼠染色体组形图。
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