临床真菌学检验基本技术.ppt

临床真菌学检验基本技术,河北医科大学第二医院皮肤科,郭兵申,郭兵申,临床真菌基础总论,一、真菌的基本介绍二、真菌分类及存在形式三、真菌的一般检查一般镜检常规染色培养及鉴定方式四、真菌的致病性五、真菌的防治原则,真菌(fungus)属真核细胞型微生物，有真正的核，单细胞或多细胞异养微生物，不含叶绿素，大都能形成硬的多糖细胞壁，细胞壁结构较细菌简单，细胞壁含几丁质和纤维素。估计有100-150万种，分布广泛，从30000米高空地表海洋都有真菌的生长。大多数真菌对人类是有益的，只有少数对人类有害。,一、真菌的基本介绍,二、真菌分类及存在形式,A、真菌分类从米奇里（P.A.Micheli，1729）开始，至今已有近280年的历史，这期间经过世界上无数真菌科学工作者的努力，使真菌分类的工作有了极大地发展。B、但是由于真菌分类存在着无数困难，现有的真菌分类系统还有待进一步发展与完善（尚未有一个大家供认的系统）。,（1）、真菌的分类,与医学有关的真菌有四个亚门接合亚门：毛霉、根霉等子囊霉亚门：酵母菌属、小孢子霉属等担子霉亚门：新生隐球菌、灵芝、食用菌等半知霉亚门：假丝酵母菌属、球孢子菌属等最新的真菌分类接合菌门子囊菌门担子菌门壶菌门,根据菌落形态分类：酵母菌酵母样菌霉菌双相真菌,二、真菌分类及存在形式,（2）、真菌的存在形式,菌丝和孢子,A、真菌的菌丝先端为生长点，通过顶端延长而生长。菌丝生长生出分枝，使其与营养基质接触面积增大，提高吸收力。菌丝内原生质从衰老部分流向幼嫩部分，使菌丝不断伸长，这就是生长。B、在一定条件下由生长转入发育阶段即产生繁殖体，生长与发育受环境控制，多数真菌在贫养和低温条件下转入有性阶段，少数菌在高温下转入有性阶段。还有些真菌在其不同的发育阶段，必须在不同的寄主植物上渡过，即转主寄主（现象）。C、只要是专门生殖的细胞，正常情况下不需要两两结合就可以单个细胞发育成一个个体，这就是孢子。,菌丝的形态：,螺旋状、球拍状、结节状、鹿角状、梳状等，菌丝形态有助于鉴别真菌。,孢子的形态：,有性孢子：同一个菌体或不同菌体上两个细胞融合成经减数分裂形成。无性孢子：细胞分化或出芽形成。形态有分生孢子、叶状孢子和孢子囊孢子。,菌丝和孢子,A、氢氧化钾法,将标本置于在玻片上，加一滴10%KOH浮载液，盖上盖玻片放置510分钟后或直接在火焰上快速通过23次微加热，轻压盖玻片驱逐气泡并将标本压薄后置于显微镜下检查。先在低倍镜下观察有无菌丝和孢子，然后用高倍镜观察孢子和菌丝的形态特征、大小和排列等。对于角质标本，必要时可在10%KOH溶液中，加入终浓度为40%二甲亚砜，促进其溶解。此法适用于皮屑、甲屑、毛发、痂皮、痰、组织、耵聍、粪便等标本的直接涂片检查。,B、胶带粘贴法,用透明胶带直接贴于取材部位，数分钟后揭下，充分展平后，直接置贴于加有一滴浮液的载玻片上此液可以是10%20%的KOH，也可以采用乳酸酚棉蓝染液（易于观察）。该法常用于花斑癣患处的直接检查。,乳酸酚棉蓝染色传统染色法，酵母菌细胞、菌丝体和产孢结构等皆可被染成亮蓝色；背景为暗淡的蓝色。过碘酸-雪夫染色（P.A.S）在寻找真菌孢子、鉴别真菌、观看真菌结构、等方面有意义其他染色法六胺银法、爱先蓝（alcianblue）法、革兰氏染色法、以及特殊染色法,乳酸酚棉蓝染色,革兰染色法在鉴别细菌、选择抗菌药物、研究细菌致病性等方面有意义（真菌的简单染色也可以）所有的真菌、放线菌均为革兰染色阳性，呈紫黑色。适用于酵母菌、孢子丝菌、组织胞浆菌、诺卡菌及放线菌等培养物的形态检查。,石膏样小孢子菌,A、培养特性,B、抵抗力,D、培养基种类,E、菌落形态,F、鉴定方式,A、真菌的侵犯部位不同，其致病性也不相同,浅部真菌侵犯表皮角质层、毛发和甲板深部真菌侵犯真皮及以下组织、粘膜和内脏。,B、真菌的致病性表现,1.浅部真菌感染（外源性真菌）:手足癣、体癣、股癣、甲癣2.条件致病性真菌感染（内源性真菌/机会致病性真菌）如：白假丝酵母菌（白色念珠菌）引起的鹅口疮3.深部真菌感染:新生（型）隐球菌：侵犯中枢神经系统引起慢性脑膜炎4.真菌毒素的致病作用:急性中毒：毒蕈中毒，慢性真菌中毒：黄曲霉素、青霉素（霉变食物）5.真菌超敏反应性疾病:敏感患者吸入真菌孢子，引起型超敏反应医学教育网搜集整理。如：寻痲疹、哮喘、变应性鼻炎等。,四、真菌的致病性,五、真菌的防治原则,卫生、干燥、消毒（福尔马林）