第十四章-中药分析PPT课件

.,1,药物分析第14章中药及其制剂分析概论,谢智勇中山大学药学院,.,目的和要求,1、掌握中药及其制剂分析前的提取分离和纯化方法；2、掌握中药含量测定项目制定的基本原则；3、熟悉中药分析的基本程序；4、了解中药制剂的分类；5、了解中药指纹图谱技术,.,主要内容,第一节概述第二节中药及其制剂的分析方法第三节中药指纹图谱技术,.,第一节概述,一、中药及其制剂分析的特点二、中药及其制剂的分类与质量要点三、中药及其制剂中待测成分的提取分离与纯化方法（一）提取方法（二）纯化方法,.,第一节概述（续1）,中药应用源远流长，成绩巨大！中药的现代应用非常广泛，以中成药为主。中药质量不够稳定，质量标准不够完善，作用机理尚不明确，进行现代化研究势在必行。广东省的“中医药强省”战略值得重视！国家开展“中医药服务贸易”推动中药国际化的步伐！,.,一、中药及其制剂分析的特点,1、什么是中药？与化学药品有何区别？2、什么是中药制剂？与中成药是否相同？3、什么是中药分析？与常规药物分析区别？4、中药分析的特点有哪些？,.,一、中药及其制剂分析特点（续1）,1、什么是中药？中药是以中医药学理论体系的术语表达其性味、功效和使用规律，并且按中医药学理论指导其临床应用的传统药物。化学药品多为结构明确的单一化合物，用现代医学术语表述的药物。Q：单一成分、有效组分、提取物是否为中药？Q：中药与天然药物是否一致？,.,一、中药及其制剂分析的特点（续2）,2、什么是中药制剂？以中药为原料，根据中医药学理论基础配伍、组方，按一定的制备工艺和方法制成的一定剂型，称为中药制剂。一般又称为中成药。传统中医用药均是辨证论治，药物随证因人而变化，以汤剂为多。与固定处方的中成药有一定区别。Q：中药单味颗粒剂是否为中药？配伍后呢？,.,一、中药及其制剂分析的特点（续3）,3、什么是中药分析？中药（及其制剂）分析是以中医药理论为指导，应用现代分析理论和方法，研究中药及其制剂质量的一门应用学科，是中药学领域的一个重要组成部分。中药分析在技术和手段上与常规药物分析没有区别，只是在思路和方法上，需要根据中医药理论进行适当选择质量控制指标。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续4）,4、中药分析的特点有哪些？（1）中药及其制剂中化学成分复杂，有效成分往往难以确定。中药是多成分作用的结果，与化学药品明确的成分有区别。为保证质量，有必要采用道地药材，并采用相应的管理规范要求（如GAP、GMP）等尽可能保证质量稳定。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续5）,（2）中药制剂是按中医理论和用药原则组方而成，要根据药味的君、臣、佐、使地位，首选君药、贵重药和剧毒药建立分析方法。要选重点药物分析，不能太过随意！多君、多臣药物要尽可能都分析！在同样条件下，尽可能选择剂量大药物进行分析。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续6）,（3）中药制剂中原药材往往差异较大，分析时应考虑药材来源与炮制等方面的影响。中药品种繁多，同名异物、同物异名现象比较严重，其质量有较大差别。现在药典有倾向于同一药物用单一植物来源的趋势。同一药材，产地不同，采收季节不同，其质量也有区别。中药炮制方法不同，对质量的影响非常显著。中药炮制有其意义，可用现代分析技术证明。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续7）,（4）中药制剂工艺及辅料有一定的特殊性，应针对不同工艺、剂型和辅料等选择适宜的分析方法和检测项目。中药成分众多，不同工艺将导致不同量的成分溶出，起疗效的成分也有区别，有必要根据具体工艺等条件进行合适指标的分析。常见的是水提和醇提的成分差别很大。丹参的水溶性成分丹参素和脂溶性成分丹参酮为例。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续8）,（5）中药制剂杂质来源具有多途径的特点，应有针对性的进行控制。中药的杂质与化学药品的杂质有很大区别，有必要分清。相对来说，中药杂质多集中在安全性方面，如重金属、砷盐和残留农药等方面的检测。,.,一、中药及其制剂分析的特点（续9）,（6）中药制剂有效成分多为非单一性，应检测尽可能多的有效成分，综合进行质量评价。现在多强调中药是多成分综合作用的结果，往往难以用单一成分来表征其质量。但单一成分的质量控制对于稳定中药质量确有一定作用。采用与其疗效有关的多（有效）成分进行质量控制将是中药分析的发展趋势。（与第一个特点有些重合）,.,一、中药及其制剂分析特点（续10）,总之，中药及其制剂的药效物质基础多为化学成分的混合复杂体系，建立中药制剂质量标准和分析手段时，应采用准确、灵敏、可行的分析方法测定多种有效成分，才能更加科学、客观的评价中药质量。中药有多种已知成分又有未知成分，不确定因素诸多，分析难度大，存在问题多，因此非常具有挑战性，也具有非常广阔的发展空间！,.,二、中药及其制剂的分类与质量分析要点,中药的传统剂型有丸、散、膏、丹、酒、汤、茶、锭等，现代剂型有片剂、胶囊、注射液、口服液、滴丸、气雾剂等，制剂品种越来越丰富。中药及其制剂按物态进行分类，可分为中药材及其炮制品、液体制剂、半固体制剂、固体制剂和气体制剂等。,.,（一）中药材及其炮制品,中药材及其炮制品作为制剂的原料，其质量的稳定非常重要。对于中药材来说，国家正大规模的开展GAP种植基地建设，力争从源头保证质量稳定性。对于中药的炮制品，国家也正在积极制定相应政策，特别是对饮片的质量加强控制，以后也要实行饮片准入制度。“药材好，药才好！”,.,（二）液体制剂,液体制剂有口服液、酒剂、酊剂和注射液等：1、合剂与口服液：为汤剂的改进剂型，常含有糖类、蛋白和防腐剂等，分析前需要除去干扰，并用适当方法纯化处理。2、酒剂和酊剂：酒剂用蒸馏酒浸提，可加入糖或蜂蜜调味；酊剂用乙醇制成，不调味。成分中含糖类等较少，可挥发乙醇后直接分析。,.,（二）液体制剂（续1）,（3）注射液：是药材经提取、纯化后制成的供注入体内的溶液、乳状液及临用前配成溶液的粉末或浓溶液的无菌制剂。中药注射液的分析与质量控制，应与化学药品注射液有同样严格的要求！需要在装量差异、澄明度、无菌、不溶性微粒和pH等项目的检查。国内曾对注射液制定了必须进行指纹图谱研究的强制要求，但不作为质量控制标准！,.,（三）半固体制剂,主要有煎膏剂、流浸膏剂与浸膏剂、糖浆剂等1、煎膏剂：药材用水煎煮后浓缩制成的半流体制剂，有的还加入药材细粉。煎膏剂需要做密度和不溶物的检查。在分析时，需要加水稀释后提取或再纯化后分析。2、流浸膏剂与浸膏剂：药材用适宜的溶剂提取，然后挥去部分或全部溶剂后制成的制剂。除另有规定外，流浸膏剂每1ml相当于原药材1g，浸膏剂每1g相当于原药材25g。,.,（三）半固体制剂（续1）,一般情况下，需要做乙醇含量的检查。此类制剂除少数单独使用外，多数作为原料药制成其他剂型。在分析时，需要根据情况，选择合适的指标进行，可以用单一成分，也可以用某类物质的总量。（3）糖浆剂：药材提取物的浓蔗糖水溶液，分析时选择有效成分进行鉴别和含量测定。半固体制剂的质控与同类液体制剂类似。,.,（四）、固体制剂,主要有丸剂、散剂、片剂、颗粒剂、胶囊剂等剂型，可用提取物或粉末作为原料制成。在分析特点上，固体制剂与其他物态制剂有相似之处，只是有不同剂型的单独要求。在分析时，同样需要考虑到提取溶剂造成的影响，选择合适的方法除去相应的干扰，选择合适指标成分或某类成分进行鉴别和含量测定。,.,（五）、气体制剂,主要包括气雾剂和喷雾剂，其内容物可以为溶液剂、乳状液或混悬剂。在分析时，需要针对此类剂型进行装量差异和喷射实验等。在质量控制方面和其他物态制剂基本一致。,.,三、中药及其制剂中待测成分的提取分离与纯化方法,中药原料药和制剂的成分非常多，一味中药含有成分众多，复方更是复杂，除此之外还有各种附加剂等。为了使得分析结果准确，有必要在测定前提取待测组分，有的还需要进一步纯化处理，使得其他成分尽量不干扰测定。因此，待测组分的提取、分离和纯化方法对于中药分析来说相当重要。,.,（一）提取方法,中药制剂分析常用的提取方法通常有萃取法、冷浸法、回流提取法、水蒸气蒸馏法、超声提取法和超临界流体萃取法。1、萃取法：利用溶质在两种互不相溶的溶剂中溶解度的不同，使物质从一种溶剂转移到另一种溶剂中，经过多次萃取，将测定组分提取出来的方法。萃取法主要用于液体制剂中待测组分的提取分离，多用有机溶剂将其萃取，以便于分析。,.,（一）提取方法（续1）,溶质在两相中的分配比越大，萃取效率越高。根据相似相溶的原理，中药分析中萃取的一般原则是：极性较强的正丁醇适用于提取皂苷类成分；乙酸乙酯多用于提取黄酮类成分；氯仿多用于提取生物碱类成分；乙醚和石油醚等宜于提取挥发油类成分等。,.,（一）提取方法（续2）,水相的pH值可影响酸碱性物质在两相中的分配。酸性有机组分在酸性条件下不电离，在有机相中溶解度增大而有利于提取。同理，碱性组分在碱性条件下也易被萃取。溶液的pH应根据组分的PKa来确定。对于酸性组分来说，溶液pH应比其PKa低12个pH单位；碱性组分提取时溶液pH应比pKa高12个pH单位。,.,（一）提取方法（续3）,提取时应在分液漏斗中进行，加入有机溶剂后，振摇，放置完全分层后分取有机相。若用做鉴别，一般提取一次即可；如用做含量测定，则需要提取完全，一般提取34次，是否完全可以通过提取回收率考察；提取过程中注意防止和消除乳化。实验中用水饱和正丁醇和正丁醇饱和水，是一种加速分层和减少乳化的方法之一。,.,（一）提取方法（续4）,酒剂和酊剂因为含有乙醇，所以在萃取前需要先挥去乙醇，否则因为乙醇既可以溶于水又可以与有机溶剂混溶的性质，可能导致两相溶剂无法分层。如果含有甲醇，也需要尽量除去。2、冷浸法：适用于遇热不稳定的成分提取，但所需时间较长。一般用乙醇将样品浸提。3、回流提取法：将样品在烧瓶中用有机溶剂加热回流提取的方法。适用于固体制剂提取，不适合热不稳定药物。较常用，但操作繁琐。,.,（一）提取方法（续5）,在含量测定时，可不断更换溶剂多次提取，尽量提取完全。现常用方法为：加入一定体积溶剂到供试品中，称定重量，加热回流至组分浸出达到平衡，放冷后称重，补足减失重量，滤过，取续滤液供测试。4、连续回流提取法：也称索氏提取法，即在索氏提取器中用溶剂连续提取的方法。该方法的提取效率较高，也节省溶剂。在提取时应选择低沸点的溶剂，如甲醇、乙醚等，提取组分对热应稳定。此外，该方法比较费时。,.,（一）提取方法（续6）,5、水蒸气蒸馏法：对于部分具有挥发性，并可随水蒸气流出的组分，可采用此法提取。挥发油、一些小分子生物碱，以及某些酚类化合物可以用此法提取。组分对热应稳定。6、超声提取法：超声波具有助溶的作用，可用于样品中测定组分的提取。操作简单，不需加热，提取时间短，一般先浸泡后再提取。,.,（一）提取方法（续7）,超声提取法与冷浸法相比速度快，一般仅需数十分钟即可达到平衡。由于超声提取过程可能会造成损失，所以做在含量测定时，需要补足超声前后重量的减失部分。超声波功率不同，提取效率和重复性有差异。如果需要用超声波提取，需要考察提取功率、时间、温度、浸泡时间等的影响。,.,（一）提取方法（续8）,7、超临界流体萃取：是目前比较先进方法之一，常利用二氧化碳作溶剂，在适当温度和压力下提取，提取效率高，但仪器价格较昂贵。有时需要夹带剂，以提高提取的效率和成分种类。其他内容（自学）,.,（二）纯化方法,中药制剂经提取后，有时还会有较多的杂质和色素等，影响到进一步的分析，需进行分离精制后才能分析。纯化时应根据被测组分的理化性质，选择性的除掉杂质和干扰组分，而有尽可能的减少被测组分的损失。常见的纯化方法有：1、液液萃取法：和前边提取时原理基本一致，利用相似相溶原理提取某一类组分。可分别用不同溶剂萃取而获得某类较纯组分。,.,（二）纯化方法（续1）,2、柱色谱法利用柱色谱等对某些物质有强吸附的性质除去杂质的方法，应用越来越广泛。一般用于总类物质的提取，如总黄酮、总皂苷等。常用的固定相有硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂等。目前也有一些商品化的预处理小柱，重现性好，填料种类可选择范围较多，但是价格较贵。,.,第二节中药及其制剂的分析方法,中药质量受影响的因素较多，需要从原料、饮片和产品等几方面控制其质量。原料的鉴定与检验的依据为法定标准，如国家标准和地方标准或炮制规范；如果没有法定标准，应按照要求制定其质量标准。提取物和有效成分的法定标准仅为国家标准。中药分析的分析程序与一般分析相同。,.,一、取样与样品保存,中药分析的取样多为估计取样，即从整批中药中抽取一部分具有代表性的样品进行分析、观察，得到可代表整体样品的规律性结果。1、取样要有科学性、真实性和代表性。要做到均匀、合理。2、严格按照规定取样方法取样，应从四角及中央五处取样。取样后要详细记录相关情况。具体取样方法（自学）,.,二、中药及其制剂的鉴别,中药及其制剂的鉴别可以通过确认其中所含药味的存在与否或某些特征成分的检出而达到鉴别的目的。目前部分中药尚无含量测定项目（实际上含量测定也不能替代鉴别方法），因此鉴别成为中药制剂质量控制的重要环节。况且许多药材也无鉴别方法，在地方标准中普遍存在。鉴别的方法一般包括性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别和色谱鉴别、光谱鉴别等。,.,（一）性状鉴别,中药及其制剂的外观形状及感官性质等可以作为有效的鉴别特征和依据，主要是药材及其炮制品的形状、大小、色泽、质地、气味等，中药制剂的外观及内容物的形状、颜色、气味等，均可作为描述的内容。掌握各类药材的一般形态规律和特异点，并参照药典等标准，遵循药材鉴定规定操作，在一定程度上可以鉴别药材的真伪。性状鉴别往往具有很强主观性，仅作参考。,.,（二）显微鉴别,显微鉴别是利用显微镜来观察药材及含原药材粉末的中成药的组织构造，细胞形状以及化合物的特征，用以鉴别中药的真伪，此为组织鉴别法。同时也可以用显微化学反应鉴别方法确定某些品种中特殊化学成分的存在及在组织中的分布情况。显微鉴别通常在下列情况中应用：A:药材及炮制品外形鉴别特征不明显或外形相似而难以鉴别，但内部组织构造不同的鉴别,.,（二）显微鉴别（续1）,B：药材破碎或呈粉末不易肉眼辨认或区分；C：含原药材粉末的中药制剂，如大部分散剂、丸剂、片剂等以药材细粉掺和制粒成型的中成药。显微鉴别具有简便快速的特点。当处方中的主要药味及化学成分不清楚或尚无化学鉴别方法的药味，应做显微鉴别。,.,（二）显微鉴别（续2）,显微鉴别需要注意以下几点：（1）在鉴别时，应选择专属性强的特征进行，处方中多味药物共同拥有的现为特征不能作为依据，否则只投其中一味药物即显阳性；（2）显微特征还应明显、易查见，否则可能会作出假阴性的判定。（3）多来源的药材应选择其共有的显微特征（4）取样要有代表性，一般取10片（丸）研成细粉，混匀后取样。,.,（三）理化鉴别,理化鉴别法是根据中药及其制剂中所含主要化学成分的理化性质，采用物理、化学或物理化学的方法进行鉴别，从而判断其真伪。一般理化鉴别方法包括：显微化学反应、微量升华法、荧光和光谱法、色谱法等。,.,1、显微化学反应法,此法是将中药饮片或粉末置显微镜用的载玻片上，滴加各种试剂，在显微镜下观察产生的结晶、沉淀物，以及特殊的颜色变化等，作为中药鉴别的特征。此法也可将药材粉末用适当的溶剂浸提，将浸提液少许置载玻片上，滴加各种试剂，在显微镜下观察反应。,.,2、微量升华法,此法适用于一些含有升华性成分的药材及其制剂的鉴别，如大黄、牡丹皮、冰片、薄荷的升华物等的分析。此法可以通过观察升华物的结晶形态和颜色等，以及可加适当的化学试剂观察反应的结果等，来判断是否含有要分析的中药。,.,3、颜色反应与沉淀反应法,此法利用特定的化学试剂与中药及其制剂中特定的化学成分（或组分）发生反应，产生的颜色变化或生成沉淀，以判别中药及其制剂中某成分的存在与否，是常用的定性鉴别方法。此法在化学药品鉴别中应用非常广泛，但中药成分复杂，干扰因素较多，需要在分析前进行一定的提取和纯化排除干扰。,.,4、荧光法与分光光度法,此法利用中药及其制剂中某些组分的光谱特征，如在紫外光下能激发显示不同颜色的荧光，在紫外区或可见光波长区有明显的特征吸收峰等，可进行药物的定性鉴别，用以评价中药的真伪等。,.,5、色谱鉴别法,色谱法具有分离、分析的功能，相对于光谱法等只能对纯组分测定有效的情况来说，色谱法更适合于中药这些多组分共存的样品的分析。色谱法常用方法有纸色谱法、毛细管色谱法、薄层色谱法、气相色谱法和高效液相色谱法。其中的薄层色谱法因为操作简单、使用方便、灵敏度高，以及具有多种专属的检测方法和丰富的文献资料，是目前最常用的鉴别方法。,.,5、色谱鉴别法（续1）,气相色谱法适宜于制剂中含挥发油成分药材的鉴别，如冰片、麝香等。高效液相色谱法较少用于鉴别，若含量测定和检查中采用了HPLC方法，则可同时用于鉴别。薄层色谱法使用最多的是硅胶G板，虽然硅胶G本身含有锻石膏为粘合剂，但也会经常另加0.2%0.5%羧甲基纤维素钠（CMC-Na）的水溶液作为粘合剂铺板，则板更均匀且有一定硬度。要注意CMC-Na不易溶于水，需加热。生物碱的分析多采用氧化铝板较多。,.,5、色谱鉴别法（续2）,由于色谱法的定性能力较弱，所以在TLC鉴别中常需要对照药材、对照品等。TLC鉴别时，取供试品、对照药材或有效成分对照品，用相同方法制备试验溶液，分别取供试品溶液、对照药材溶液或对照品溶液适量，分别点于同一薄层板上，展开，检视，要求供试品溶液中应有与对照品主斑点位置上相对应的斑点，而且颜色也应该一致。,.,5、色谱鉴别法（续3）,TLC鉴别时，特征斑点最好选择已知有效成分或特征成分的斑点；若有效成分未知或无法检出，也可选择未知成分的斑点，但要求重现性好，斑点特征明显。TLC鉴别时需要做专属性验证，应取阴性对照与供试品和对照品在相同条件下试验，阴性对照种在鉴别特征斑点的位置应无斑点出现。此外，阴性对照的色谱加上对照药材的色谱应该大致等于供试品的色谱。,.,5、色谱鉴别法（续4）,TLC方法作为中药鉴别的手段，其目的是鉴别而不是提取分离，因而在条件考察时，对吸附剂、展开剂的选择，不是一味追求如何将检品分离为单一组分，而是如何在某一规定的条件下将检品制成清晰、圆整，比移值稳定、可重复的色谱图谱，以便于对照品或对照药材、标准中成药等进行对照比较。,.,三、中药及其制剂的杂质检查,中药及其制剂的杂质检查是安全性评价的重要保证。一般质量控制项目包括：浸出物及总固体测定、挥发油、总氮测定、水分测定、干燥失重等。杂质检查包括：杂质限量检查、灰分、酸碱度、特殊杂质、掺伪品等。重金属包括：铅盐、砷盐、铁盐和其他重金属限量；此外还有有机磷和有机氯农药残留量，辅料的质量检验、与剂型有关的检查等内容。其中，有的检查项目和方法与化学药品及其制剂类似，有的在中药及其制剂检查中有特殊要求或更为必要,.,（一）、水分测定法,因为中药往往是药材或者提取物入药，水分的存在难以避免，但如果水分含量过高，可引起制剂结块、霉变或有效成分的分解。因此，水分是丸剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等固体制剂的常规检查项目，在相应的制剂中规定水分的限量。药典附录中收载的水分测定法共有四种：烘干法、甲苯法、减压干燥法和气相色谱法。,.,（一）、水分测定法（续1）,（1）烘干法是将称重后的样品放在100105度干燥5小时后，在干燥器中放置30min，称重，然后再烘干1小时，至连续两次称重的差异不超过5mg为止。本法适合于不含或少含挥发性成分的药品。如果供试品含水分较多，应在低温下先烘去大部分水分，然后再在规定温度下干燥至恒重。,.,（一）、水分测定法（续2）,（2）甲苯法甲苯法是利用水分可与甲苯再69.3度共沸蒸出，收集馏出液，待分层后由刻度管测定出所含水的量。具体操作过程可参见书上记录。甲苯法可用于含挥发性成分样品的水分测定，但不适合于微量水分的测定，由于中药中含水量较高（5%9%），可用本法测定。,.,（一）、水分测定法（续3）,（3）减压干燥法本法适合于含有挥发性成分的贵重药品。其中所用的干燥剂一般为五氧化二磷（见书上）。（4）气相色谱法该法使用无水乙醇浸提供试品，抽提出其中的水分，然后以纯化水为标准对照，在GC上分析，采用热导检测器检测。该法对于样品中是否含有挥发性成分，以及含水量的多少等，都不影响测定。而且该法结果较以前方法准确。,.,（二）、总灰分和酸不溶性灰分测定法,总灰分是指药材或制剂经加热炽灼灰化后遗留的无机物，包括除药物本身所含无机盐（称为生理灰分）外，还包括泥土、砂石等药材外表粘附的无机杂质。因此，测定灰分的目的主要是控制药材中泥土、沙土的量，同时还可反映药材生理灰分的量。,.,（二）、总灰分和酸不溶性灰分测定法（续1）,有的中药本身的生理灰分差异较大，特别是组织中含草酸钙较多的药材，差别可从8%20%以上，有时候总灰分不能说明外来杂质的量，因此需要通过测定酸不溶性灰分。一般情况下，碳酸盐等生理性灰分加盐酸能溶解，但泥土、砂石等硅酸盐则不能溶解，成为酸不溶性灰分。因此，酸不溶性灰分更准确反映外来杂质的量。,.,（三）重金属检查法,重金属，如铅、汞、铜等对人体均有害，由于环境污染和使用农药的原因，容易在药材中引入重金属。国际上对于重金属都有严格的规定和要求。中药中由于组成复杂，部分制剂含有药材粉末，需要有机破坏后方能检查。重金属以铅为代表。重金属的测定可以采用原子吸收分光光度法，目前先进的ICP-MS可以测定更多重金属。,.,（四）砷盐检查法,砷盐为剧毒的物质，中药材由于受到除草剂、杀虫剂和化学肥料的影响，容易引入砷。控制砷盐的含量是控制药物纯度和质量重要方面。砷盐检查有古蔡氏法和二乙基二硫代氨基甲酸银法，在中药分析前，需要对样品进行破坏。此法，砷盐的检查也可用原子吸收分光光度法分析，方法灵敏、专属，定量限低。,.,（五）农药残留量测定法,残留农药分析主要针对有机氯和有机磷农药。有机氯农药主要测定总氯量，将农药用石油醚萃取后，再用氧瓶燃烧法破坏成可分析离子状态，再用比色法测定总氯含量。有机磷农药测定过程类似。气相色谱法是测定残留农药常用方法，具有分离效能高和灵敏度高特点。样品分析一般先用非极性溶剂萃取出农药，然后再用电子捕获检测器测定有机氯，用火焰光度法测定有机磷。,.,四、中药及其制剂的含量测定,中药及其制剂含有众多化学成分，其药效也应该是多种化学成分协同作用的结果，所以仅仅测定其中的某一有效成分的含量，一般不能完全反映该中药的实际疗效。但建立含量测定项目，以尽量保证每批药材或制剂的稳定性，仍然具有积极的意义。在实际工作中，含量测定方法主要根据待测成分性质（哪类成分），并参考有关文献资料，选择适宜的有效成分或特征（指标）成分分析,.,四、中药及其制剂的含量测定（续1）,中药分析中含量测定项目的选择原则：1、单方制剂所含成分类别必须清楚，要搞清是有效成分还是指标性成分，应有针对性的建立含量测定项目。2、复方制剂应首选君药及贵重药（三七、人参、熊胆等）建立含量测定方法；若上述药物基础研究薄弱或无法进行含量测定的，也可依次选臣药或其他药味进行含量测定。,.,四、中药及其制剂的含量测定（续2）,对于中药和化学药品组成的复方制剂，不仅要求建立中药君药的测定项目，而且所含化学药品也必须建立含量测定项目。3、含有毒性药物（如马钱子、川乌、草乌、蟾酥、斑蝥等），必须建立含量测定项目，并作为重点研究。若含量太低无法测定时，则应在检查项下规定限度检查项。4、有效成分或指标成分清楚的药物，应首选测定其有效成分或指标成分的含量。,.,四、中药及其制剂的含量测定（续3）,有效成分类别清楚的，可测定某一类成分的含量，如总黄酮、总生物碱、总皂苷、总有机酸和总挥发油等。其中的有效成分（有效部位）指其药理作用、功能与主治一致的成分（或部位）。5、测定成分应尽可能与中医理论、用药的功能主治相近。如山楂在制剂中若以消食健胃功能为主，应测定其有机酸含量；若以治疗心血管疾病为主，则应测定其黄酮类成分。,.,四、中药及其制剂的含量测定（续3）,6、测定成分需考虑与生产工艺的关系（这点应与功能主治结合起来分析）。对于在炮制、加工、制备和贮藏过程中易损失或破坏的成分应进行含量测定或限量检查。7、测定成分应归属于某一单味药，若两味或以上药材均含有的成分，则不应选为含量测定指标。8、若无法进行含量测定，可测定药物的总固体量，以简介控制其质量。,.,四、中药及其制剂的含量测定（续4）,中药分析的含量测定方法以色谱法为主，高效毛细管电泳（HPCE）方法也有部分应用。其他方法如光谱法、化学分析法、电化学方法和生物学方法等，一般因为对于多组分的分离分析能力较弱，所以应用范围有限。在色谱法中，中药的含量测定主要为：高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱法（GC）、薄层扫描法（HPTLC）为主。,.,（一）高效液相色谱法,HPLC方法具有分离效能高、分析速度快，应用范围广的特点，其重现性和准确度均明显优于薄层色谱法，是中药制剂含量测定的首选方法。1、色谱条件选择一般多选用十八烷基硅烷键合相作为固定相，以水为基础溶剂组成流动相，检测器有紫外检测器、荧光检测器、电化学检测器等，以紫外检测器最为常用。,.,（一）高效液相色谱法（续1）,HPLC的洗脱方式可分为等度洗脱和梯度洗脱两种。等度洗脱是在同一分析周期内流动相的组成保持恒定不变，适用于组分少、性质相差不大的样品分析。梯度洗脱是在同一分析周期内程序控制流动相的组成（流速一般保持不变），适用于组