隐球菌临床推广ppt

天津市一瑞生物工程有限公司,隐球菌抗原检测的临床意义,一瑞生物,隐球菌为圆形菌体，外周有荚膜，内有反光孢子，但无菌丝。隐球菌属已知有37个不同的种，但具致病性的多为新型隐球菌，其特点是菌体由一层很厚的多糖荚膜所包被。新型隐球菌主要包括新生变种、格特变种等,简介,流行病学,38个ICUsof27个意大利医院384例真菌感染(318例侵袭性念珠菌感染；63例霉菌感染；3例隐球菌感染),TortoranoAMetal.Mycoses.2011,55:7379.,HIV感染者器官移植患者接受大剂量皮质类固醇或单克隆抗体（如阿仑单抗、英夫利昔单抗）和/或其他免疫抑制剂治疗的患者其他无基础疾病的患者,JohnR.Perfect,etc.ClinicalInfectiousDiseases2010;50:291322,美国感染病学会的“隐球菌病治疗临床实践指南（2010年更新）”中指出，隐球菌病的易感人群主要包括：,宿主因素,流行病学,随着AIDS患者的增多，各种机会性感染的发病率也随之上升，新型隐球菌成为继白色念珠菌之后最常见的机会性感染真菌，其在HIV中的感染率已达8.5%。隐球菌性脑膜炎发生率和死亡率在发达国家达到10-30%，在发展中国家可达到50-100%。早期隐球菌感染临床表现缺乏特异性，脑脊液变化不典型，但是当发展为隐球菌性脑膜炎时，死亡率可达到20%。,早期、快速、准确地诊断很有必要,现有检测手段,墨汁染色（菌体）真菌培养（活菌）ELISA（荚膜多糖抗原）乳胶凝集法（荚膜多糖抗原）胶体金法（荚膜多糖抗原）,1.印度墨汁染色：敏感性差，阳性检出率很低2.脑脊液或血液培养（金标准）：阳性检出率低，培养（2-10天）及鉴定时间长，易误诊3.抗原检测试验：脑脊液和血清样本抗原检测的敏感性可达到97%和87%*，能实现早期快速诊断,*TylerWarkentien,MD.IntJSTDAIDS.2010October;21(10):679684.,现有检测手段,隐球菌荚膜多糖抗原,由3种不同的单糖聚合而成是引起病理变化的主要毒性因子在菌体生长和繁殖过程中，GXM不断分泌到胞外通过发挥免疫抑制作用和免疫调理作用影响宿主免疫系统,OscarZaragoza,etc.AdvApplMicrobiol.2009,68:133216,隐球菌荚膜多糖抗原GXM(Glucuronoxylomannan,GXM)：,荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，可以作为隐球菌感染的诊断依据,隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金法）原理,隐球菌抗原检测试剂盒（胶体金免疫层析法）,试剂盒组成隐球菌抗原检测试纸条50条样本稀释液滴定液阳性对照稳定性/储存方法2年有效期室温储存,特点,无需样本预处理10分钟得到结果定性或半定量测定结果客观血清，脑脊液，血浆,样本收集及制备,按照无菌操作收集脑脊液、血浆和血清样本。样本最多可以在2-8放置72小时。不反复冻融的情况下，样本可以在-20以下保存更长时间。样本在运输过程中应保持在2-8或者-20以下。,定性检测操作步骤,简单5步，10分钟得到结果,注意：若对照条带未出现，则说明该检测无效，应重新检测。,定性检测结果,半定量检测操作步骤,1、以1:5作为初始稀释浓度，依次1:2稀释至1:2560。分别放置于10个微离心管中并编号1-10。2、向1号试管中加入4滴样本稀释液。3、分别向标号2-10的试管中加入2滴滴定液。4、将40L样本加入1号试管并混匀。5、从1号试管中吸取80L样本混合液转移至2号试管并混匀，依次进行稀释直至10号试管。6、10号试管中吸取80L样本混合液并丢弃以保证试管内最终体积为80L。7、将试纸条的白端分别没入试管中。8、等待10分钟，读取并记录实验结果。,半定量检测操作步骤,半定量检测操作步骤-2,半定量检测(滴度)结果,对于半定量滴定检测，患者的滴度应报告为产生阳性结果的最高稀释度。,质量控制,阳性对照：将1滴样本稀释液加入试管中，再加入1滴隐球菌抗原阳性对照。阴性对照为：将2滴样本稀释液加入试管中。分别插入试纸条，10分钟后读取结果。依据本地、国家的法规及认证机构的指导方针或要求，可能需要做额外的质控检测。,胶体金法和培养/墨汁染色对比,CrAgLFApackageinsert(IMMY),胶体金法和ELISA/乳胶凝集法对比,TRKozel,Clin.VaccineImmunol.(2011)18:1292TRKozel,8thInternationalConferenceonCryptococcusandCryptococcosis(2011),灵敏度远远高于其他方法,隐球菌抗原分布,AdaptedfromKozelandBauman,ExpertOpin.Med.Diagn.(2012)6:245,胶体金法和乳胶凝集法对比,适用科室及临床意义,新型隐球菌感染可发生于全身多个部位，最常见的感染主要发生在中枢神经系统、肺部、皮肤等。,中枢神经系统隐球菌病-神经内科隐球菌侵犯中枢神经系统最常见，包括脑膜炎或亚急性脑膜炎、散播型脑膜炎等。临床症状：首发症状间歇性头痛、恶心及呕吐，伴低热、周身不适、精神不振等非特异性症状。随病情发展，头痛渐加重转为持续性、精神异常、躁动不安，严重者出现不同程度意识障碍。肺隐球菌病-呼吸科肺部是隐球菌侵入的门户,适用科室及临床意义,皮肤黏膜隐球菌病-皮肤科10%15%的隐球菌病患者出现皮肤损害，比如出现丘疹、水疱、脓疱、传染性软疣样丘疹、痤疮样脓疱等症状。儿童脑膜炎-儿科儿童由于免疫系统不健全，也容易被隐球菌感染，一般儿童的脑脊液样本都会做隐球菌筛查免疫缺陷人群-感染科、器官移植科、ICU等新型隐球菌作为一种机会性感染真菌，主要侵犯免疫缺陷人群，如器官移植患者以及AIDS患者及使用免疫抑制剂人群等。,适用科室及临床意义,临床意义,在撒哈拉以南的非洲地区，隐球菌脑膜炎是造成艾滋患者死亡的一种重要疾病，隐球菌抗原可以在病症发生的几周前被检测到。隐球菌抗原的检测对于隐球菌脑膜炎的预防有非常积极的作用。,临床意义,筛查了HIV感染病人进行隐球菌抗原预防的成本效益，使用隐球菌抗原可以显著降低成本,临床意义,荚膜多糖抗原是隐球菌特有的分泌物，是隐球菌感染确诊的依据。在感染的初期，荚膜多糖抗原就被检测到，因此是隐球菌病早期诊断的标志物。随着病情的发展，荚膜多糖抗原的含量会随之发生变化，还可作为病情监测的指标。,G实验：检测真菌细胞壁特有成分1,3-D-葡聚糖吞噬细胞将菌吞噬消化后释放1,3-D-葡聚糖到血液不能检测到的真菌：隐球菌和接合菌（包括毛霉菌、根霉