乳酸菌的筛选与鉴定.ppt

乳酸菌的筛选与鉴定,4-5人一组共3组150ml无菌水200ml培养基9个平板1ml移液管若干支10ml移液管若干支试管若干支灭菌：药勺、剪刀、4个小烧杯材料：火腿、文山湖水样、植物叶片、花朵、果实等,乳酸菌简介,乳酸菌的分类乳酸菌泛指能发酵糖生成乳酸的细菌，分布非常广泛，发酵食品、植物、动物、自然水体中均有分布。大致包括下列属：乳杆菌属（Lactobacillus）、链球菌属（Streptococcus）、明串珠菌属（Leuconostoc）、双歧杆菌属（Bifidobacterium）、片球菌属（Pediococcus）等。多数乳酸菌为有益菌，在保健品的生产、发酵工业以及农业生产中应用广泛。,乳杆菌属（Lactobacillus）形态：细胞呈长或细长杆状、弯曲形短杆状，一般成链状排列。运动性：通常不运动，有的能够运动，具有周生鞭毛。营养类型：化能异养型。需氧情况：微好氧型。,链球菌属（Streptococcus）形态：细胞呈球形或卵圆形，成对或链状排列。运动性：一般不运动。营养类型：化能异养型。需氧情况：兼性厌氧型。,明串珠菌属（Leuconostoc）形态：细胞呈球形或豆状，成对或链状排列。运动性：一般不运动。营养类型：化能异养型。需氧情况：兼性厌氧型。,双歧杆菌属（Bifidobacterium）形态：细胞呈多样形态：Y形、V形、弯曲状、勺形，典型形态为Y形。运动性：不运动。营养类型：化能异养型。需氧情况：专性厌氧型。,片球菌属（Pediococcus）形态：细胞呈球形，成对或四联排列。运动性：不运动。营养类型：化能异养型。需氧情况：兼性厌氧型。,乳酸菌的筛选,乳酸菌的分布乳酸菌绝大多数都是厌氧菌或兼性厌氧菌，营养类型为化能异养型。生长繁殖于厌氧或微好氧、矿物质和有机营养物丰富的环境中。具体如下：与动物相关：乳汁、消化道、粪便等；与植物相关：花蜜、树液、植物残骸、果实损伤部位等；自然水体；发酵食品：酸奶等。,筛选方法利用碳酸钙溶解圈法筛选。,改良乳酸细菌培养基（MRS）,蛋白胨10.0g，牛肉膏8.0g，酵母膏4.0g，柠檬酸二铵2.0g，葡萄糖20.0g，吐温-601.0mL，乙酸钠5.0g，磷酸氢二钾2.0g，硫酸镁0.2g，硫酸锰0.05g，琼脂20.0g，碳酸钙30g，加自来水至1000mL，调pH6.26.4。,方法,1）称10g材料（水样取1ml逐级稀释）剪碎、研磨，放入装有90mL无菌生理盐水的三角瓶中，在旋涡振荡器上充分混合均匀，即为稀释度为10-1的样品液，继续将样品稀释至10-5。2）分别吸取10-3、10-4、10-5样品稀释液0.2mL涂布在MRS琼脂培养基上。置于37培养24h。3）挑取有透明圈的菌落，进行革兰氏染色。将革兰氏阳性菌在MRS琼脂平板上划线，于37培养24h。重复以上操作，直至得到纯菌落。4）培养获得的乳酸菌，通过形态分析对菌种进行鉴定。,乳酸菌蛋白酶活性试验,在添加了15%脱脂乳或0.5%干酪素的MRS固体培养基中,分别滴入0.2ml一定稀释度的试验菌液涂布均匀后,37恒温培养。当牛乳中酪蛋白分解时,菌落周围会出现透明圈。,耐盐性试验,在添加质量分数为0%、2%、4%、6%、8%食盐的MRS平板,划线接种分离菌种，在37培养24h后观察菌落生长情况。,