自身抗体和风湿病临床

自身抗体测定在风湿病诊断中的意义,自身抗体与分类命名,自身抗体（autoantibodies）：各种原因造成B细胞产生针对自身组织成分的抗体。生理性（亲和力、滴度、阈值），病理性。分类：按照自身抗体在体内分布分为器官/组织特异性抗体和非器官/组织特异性抗体。按照基质不同分为细胞特异性抗体和非特异性抗体等等。细胞抗体主要为非器官/组织特异性抗体，组织抗体主要为器官/组织特异性抗体。命名：以抗体在细胞和组织位置命名（胞浆、核、核仁、线粒体），以靶细胞和靶组织命名等等。以患者名字命名（Sm、Ro）以疾病名字命名（SS-A、Scl-70）以抗原的化学性质命名（RNP、DNA）以抗原的部位命名（Anti-mDNA）。,自身抗体检测方法免疫荧光法（immunofluorescence,IF)酶联免疫吸附法(enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA)放射免疫法(radioimmunoassay,RIA)被动血凝法(passivehemagglulination,PHA)颗粒凝集法(particleagglutination,PA)对流免疫电泳法(countercurrentimmunoelectrophoresis,CIE)免疫双扩散法(agargeldoubleimmunodiffusion,IDorDID)免疫印迹法(immunoblotting,IB)免疫沉淀法(radioimmunoprecipitationassy,RIP)斑点酶免疫渗透试验(dotimmunoenzymefiltrationassy,DIEFA)斑点金免疫结合试验(dotimmnuogoldfiltration,DIGFA),间接免疫荧光法,原理,荧光显微镜下ANA的染色型别,均质型：与抗组蛋白和抗DNA有关斑点型：与抗ENA有关周边型：与抗dsDNA有关核仁型：4-6sRNA着丝点型：在SD及CREST中出现,ANA：均质型,EUROIMMUN,抗核抗体,ANA：斑点型,EUROIMMUN,抗核抗体,ANA：核膜型,EUROIMMUN,抗核抗体,WesternblotHEp-2cellextract,免疫印迹法检测ENA,原理,国内现状,自身抗体的测定不普遍欠规范对其意义了解尚少缺乏研究,自身抗体测定准确率欠佳的原因分析,1.测定方法不规范底物选择(鼠肝、Hep-2);试验方法(IIF、ELISA、IB)2.试剂(盒)标准化问题厂家不同，质量参差不齐3.技术人员专业水平严格的培训；操作方法及结果判定的差异,表1放置41d、3d、5d、7d、14d时血清APF转阴率Table1LostofpositiverateofAPFafterserumhadbeenseparatelystoredfor1,3,5,7,14daysat4,aP0.01vscontrols,表2室温分别放置1d、2d、3d、5d、7d时血清APF的转阴率Table2LostofpositiverateofAPFafterserumhadbeenseparatelystoredfor1,2,3,5,7daysatroomtemperature,aP0.01与对照组转阴率的比较值,2、抗原底物在不同温度保存不同时间对血清APF的检出率影响将抗原片于4保存至3天时已出现APF的检出率的丢失（10%），无统计学意义；到5天后已有35%的检出率的丢失，具有统计学意义（P0.05）；放置7天后检出率的丢失为40%，统计学意义显著（P0.01）；放置14天检出率的丢失已有一半（见表3）。而在-20下保存2周内检出率无变化。,表34时抗原底物保存时间对血清APF的检出率影响Table3InfluenceoftimeofantigenicsubstratebestoredontheoccurrenceofAPFinserum,aP0.05vscontrols,bP0.01vscontrols,2004年抗体结果正确率分析,参加医院,85.2,75.4,62.7,61.1,2002-2004年质控结果的比较,dsDNA,抗,自身抗体,检测的正确率,2002,2003,2004,ANA检测的意义,有助于疾病的诊断，如抗Sm是SLE标记抗体；抗ScL-70是SD的标记抗体，抗Jo-1是PM/DM的标记抗体观察疾病活动度和治疗反应研究发病机理,几种核抗原分子特性,几种核抗原分子特性,抗核抗体新概念（FANA）传统定义：顾名思义是指抗细胞核抗原成分的自身抗体的总称狭义定义现代定义：是指抗细胞内所有抗原成分的自身抗体的总称。对ANA的理解已不再局限于核成分，而是指抗核酸(nucleicacid)和核蛋白（nucleoprotein)抗体的总称广义定义靶抗原分布：细胞核细胞核、细胞浆、细胞骨架、细胞分裂周期,ANA由来,中性粒细胞,DNP(DNA-Histone)+抗DNP+补体,均质体,LE细胞,LE细胞：并非SLE特有，PM、SD、RA、SS等结缔组织病，药物过敏，慢活肝等亦可阳性。抗DNP取代LE细胞的检测,+,抗核抗体的分类,1.抗DNA抗体,抗双链DNA(dsDNA)抗体抗单链DNA(ssDNA)抗体抗左旋DNA(z-DNA)抗体,2.抗组蛋白抗体,总组蛋白抗体（AHA）H1、H2a、H2b、H3、H4,3.抗非组蛋白抗体,抗可溶性核抗原(ENA)抗体：Sm、RNP、SSA、SSB、Scl70、Jo-1、pM-1、PCNA、RANA、Ku、Mi-1、-2抗体、DNP抗体等。,抗着丝点抗体(ACA),4.抗核仁抗体:抗5rRNA、核小体、U3nRNP、Nor-90抗体。,5.抗其它细胞成分:线粒体、中心体等。,抗核抗体,类风湿因子（RheumatoidFactor）,抗人或动物的IgG的FC片段抗体。其本身是免疫球蛋白，因此，RF有IgG、IgM、IgA型等。RF无种族和种属特异性与DNP及半抗原（二硝基苯）有交叉反应。7SIgM(IgG)-RF主要参与关节外症状的免疫复合物形成，且与疾病活动性有关,如何评价类风湿因子,是诊断RA的标准之一，不是唯一标准，并非RA特有作为血清阴性脊柱关节病区分标准正常人2%阳性，老年人可达5%阳性RF与其他蛋白、半抗原有交叉反应多种结缔组织病（SLE，SD，SS，PM/DM）感染疾病（SBE，TB，hepatitis）,肝硬化，弥漫性肺纤维化，结节病等均可阳性病后半年才产生，有关节外表现者，滴度高。持续高滴度RF预示疾病严重，预后差,类风湿关节炎的自身抗体,名称,敏感性(%),特异性(%),类风湿因子RA33/36抗体Sa抗体抗角蛋白抗体抗核周因子抗CCP抗体抗CB10抗体抗BiP抗体,50-7025-45373338-6260-707270,8693.678-9787-9270-909670-8892,自身抗体与风湿病,62.3,74.3,84.3,40,50,60,70,80,90,RF,CCP,RF/CCP,敏感度（%）,不同抗体检测的敏感度,聚丝蛋白抗体群,不同抗体在RA诊断中的意义,聚丝蛋白抗体群,系统性红斑狼疮的自身抗体,抗体敏感性(%)特异性(%),抗核抗体(ANA)dsDNA抗体抗Sm抗体膜DNA抗体核小体抗体U1RNP抗体SS-A抗体SS-B抗体抗心磷脂抗体类风湿因子PCNA抗体组蛋白抗体核蛋白抗体,809599949287-9470407530955050,99702578855025-351520-4025530-8058,自身抗体与风湿病,抗双链DNA抗体（短膜虫免疫荧光法1:5）,抗组蛋白抗体（酶联免疫吸附法X2SD),系统性红斑狼疮50%其他结缔组织病23-30%服异烟肼12月以上53%服苯妥因钠6月以上18%服他巴唑6个月0活动期SLE90.2%阳性,抗H1H2AH2BH2A-H2BH3H4系统性红斑狼疮+长期服异烟肼+类风湿关节炎+SLE以IgG型抗组蛋白抗体为主，而长期服烟肼及RA病人以IgM型为主,抗组蛋白抗体（免疫印迹法）,几种ENA的由来及同义词,Sm：病人名：SmithRNP:u1RNP或nRNPNuclearRibonucleoproteinSSA:ROSjogrenssyndromeASSB:La,Ha,SjogrenssyndromeBJo-1:病人JohnScL-70:Scleroderma,常见结缔组织病的抗核抗体的阳性率,ANAdsDNAHistoneSmnRNPSSASSBScL-70Jo-1着丝点核仁SLE90（62）50（25）4039100006SS501530014（75）（59）0009SD75527012195300（20）（39）PM/DM501305000(20)010RA2310230020500015+,+有指端硬化ANA1:40（+），抗dsDNA30%(或1：5）（+）,磷脂抗体（Phospholipidantibody）,多见于SLE（70%），SS、白塞病、自身免疫性血小板减少、真性红细胞增多、免疫性血管炎、习惯性流产、恶性肿瘤、多发性硬化、传染性疾病、肾上腺出血和Addison病均可阳性,抗磷脂抗体检测,包括：狼疮抗凝物；抗心脂抗体，梅毒血清试验假阳性。抗磷脂抗体还有抗磷脂氨酸（Anti-phosphotidylserine）和抗磷脂酸（Anti-phosphtidilacid）抗体等。,抗磷脂抗体检测,磷脂基因中具有抗原性：心磷脂、磷脂碱、酰丝氨酸、酰肌醇脂和酰乙醇脂等2GP1（载脂蛋白）与磷脂结合，使其改变表面结构，暴露中被识别的抗原决定簇，而呈现磷脂抗体特性。2GP1是必需的辅助因子，测2GP1可能比测ACL更有意义。,干燥综合征的自身抗体,自身抗体阳性率(%),ANA抗SSA抗体抗SSB抗体抗a-胞衬蛋白抗体抗M3受体抗体类风湿因子ANCA抗M2抗体ACA抗RNP抗体,60-8050-7030-6065-879260-8010-251327,自身抗体与风湿病,其他风湿病的自身抗体,硬皮病(PSS)皮肌炎/多肌炎(DM/PM)血管炎抗磷脂抗体综合征混合性结缔组织病(MCTD),Scl-70抗体抗着丝点抗体(ACA)抗核抗体(ANA)PM-1抗体Jo-1抗体抗核抗体(ANA)抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)抗内皮细胞抗体(AECA)抗磷脂抗体(Acl)狼疮抗凝物质U1RNP抗体(70kd)抗核抗体(ANA),自身抗体与风湿病,抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA),靶抗原：中性蛋白酶3（PR3），髓过氧化物酶（MPO），杀菌/通透性增高蛋白（BPI），丝氨酸蛋白酶，人白细胞弹性蛋白酶（HLE），乳铁蛋白（LF），组织蛋白酶G，葡萄糖醛酸酶，溶菌酶,抗中性粒细胞胞浆抗体（Anti-NeutrophilCytoplasmicAntibody,ANCA）,cANCA(PR3蛋白酶)中性粒细胞胞浆内荧光染色，其抗原是中性粒细胞颗粒内的和单核细胞溶酶体的丝氨酸蛋白酶，此种抗体主要与Wegeners肉芽肿相关，且与疾病活动性相平行，结节性多动脉炎也可阳性。,抗中性粒细胞胞浆抗体（Anti-NeutrophilCytoplasmicAntibody,ANCA）,pANCA（MPO）指核周染色，并非周边型核抗体。其抗原是胞浆内髓过氧化物酶，弹力蛋白酶及某些成分，此种抗体与特发性新月体肾小球肾炎相关，且与疾病活动度相平行。显微镜下多动脉炎，结节性多动脉炎也与之有关,类风湿关节炎抗CCP抗体、BiP抗体、AFA、抗GPI抗体、抗CB10抗体系统性红斑狼疮抗膜DNA抗体、抗核小体抗体、Hu抗体、SmD1抗体干燥综合征抗M3抗体、抗a-胞衬蛋白抗体、抗b-胞衬蛋白抗体其他AECA、抗Sp100抗体、抗Calpastatin抗体、抗a-enolase抗体,新发现的自身抗体,自身抗体与风湿病,抗聚丝蛋白抗体群,抗聚丝蛋白抗体群研究回顾,聚丝蛋白抗体群,Novelexcitingantibodies,inRheumatoidArthritis,对应抗原,颊黏膜前聚丝蛋白部分去磷酸化产物,聚丝蛋白的核心抗原多肽衍生物,抗聚丝蛋白抗体群,食道上皮前聚丝蛋白及其中/酸性异构体,纯化聚丝蛋白,聚丝蛋白抗体群,抗P68抗体新的类风湿关节炎特异性抗体,抗BiP抗体新的类风湿关节炎特异性抗体,以HeLa细胞为底物，分别加入待测血清和FITC标记的山羊抗人IgG,各在室温下孵育1小时，然后在荧光显微镜下观察（4010),图为抗BiP抗体阳性的荧光核型,P68,抗P68抗体在各种风湿性疾病中的阳性率,抗P68抗体在RA的敏感性和特异性,敏感性为67.76%特异性为91.28%,BiP,抗P68抗体和其他自身抗体敏感性及特异性的比较,类风湿关节炎,抗P68抗体在血清阴性RA患者的阳性率,类风湿关节炎的新抗原(1),类风湿关节炎的新抗原(2),核小体结构如图所示,抗核小体抗体和其他抗体的敏感性和特异性比较,阳性例数,敏感性,%,特异性,%,AnuA,37,67.3,97.4,dsDNA,25,45.5,95,Sm,15,27.3,99,AHA,18,32.7,30,DNP,15,27.3,80,AnuA,AnuA与dsDNA的关系,NAnuA(+)AnuA(-)阳性率%dsDNA(-)30171356.7dsDNA(+)25205阳性率%27.8,AnuA,统计学上差异显著（r=0.322,p=0.016）,AnuA与SLEDAI评分的关系,AnuA,抗细胞膜DNA抗体(mDNA)新的系统性红斑狼疮特异性抗体,以Raji细胞为底物抗mDNA抗体核型,抗mDNA抗体在不同疾病的阳性率,注：SLE与各组比较P值均0.01,cmDNA,抗mDNA抗体和其他抗体的比较,cmDNA,抗mDNA抗