痰标本直接涂片镜检标准规程

痰标本涂片镜检标准操作规程1. 目的提高检出率，为临床诊断和治疗提供准确、及时、有效的依据，避免生物安全及职业暴露事故的发生。2. 方法2.1标本信息的录入2.1.1按照要求将检测时间、患者姓名、性别、年龄、送检医生、患者编号（初、复检）、标本性状等信息填写入结核门诊检测登记本中2.1.2仔细核对所填写的信息是否与申请单信息一致，若不一致将该列用红色笔划去，并在备注栏注明原因；不可直接修改已填写好的信息2.1.3标本信息录入完毕后，可进行标本的处理2.2.标本的处理2.2.1涂片的制备2.2.1.1选择经干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻片制备涂片2.2.1.2在玻片的毛样端注明检测序列号 2.2.1.3 小心打开盛装痰液标本的容器，防止产生气溶胶或标本外溢；仔细观察标本，使用折断棉签茬端，挑取标本中干酪样、脓样或可疑部分适量（约0.1ML），于玻片正面右侧2/3处，均匀涂抹成1cm2cm的椭圆形痰膜 注意：使用后的棉签茬应丢弃于黄色的专用塑料袋中2.2.1.4涂片自然干燥后，置于染色架上，玻片间的距离应大于1.5cm2.2.1.5用酒精火焰棒或酒精灯对涂片区域进行固定（58秒内将玻片置于火焰上迅速烤46次）2.2.2染色2.2.2.1将石炭酸复红染液滴加到制备好的涂片区域，火焰加热至出现蒸汽后脱离火焰，保持染色5分钟；染色期间应始终保持痰膜区域被染色液覆盖，必要时可持续加入染液。注意加温时不要使染液沸腾。2.2.2.2流水从玻片序列号端轻缓冲洗，冲去染液，沥去玻片上剩余的水，从痰膜上端外缘滴加脱色剂布满痰膜，脱色时间为1分钟。如有必要，需流水洗去脱色液后，再次脱色至痰膜可视红色为止.流水从玻片一端轻缓冲洗，冲去染液，沥去玻片上剩余的水。2.2.2.3滴加亚甲蓝复染液，染色30秒，流水从玻片一端轻缓冲洗，冲去复染液，沥去玻片上剩余的水，待玻片干燥后镜检。2.2.3待检涂片检查2.2.3.1染色合格的涂片，由于被亚甲蓝染色而呈均匀亮蓝色，且无红色斑块；染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂布面积的10%2.3镜检2.3.1油镜下观察300个视野以上或者连续观察5分钟2.3.2观察方法2.3.2.1使用10目镜双目显微镜读片；2.3.2.2取染色完毕且已经干燥的玻片，痰膜向上放置在玻片台上并以卡尺固定；2.3.2.3首先使用40物镜，转动卡尺移动玻片至痰膜左端，将光线调节至适当亮度，调节焦距至可见细胞形态；2.3.2.4移开40物镜，在玻片上滴1-2滴镜油，使用100油镜进行仔细观察。但应注意避免油镜镜头直接接触玻片上的痰膜。2.3.2.5读片时，首先应从左至右观察相邻的视野；当玻片移动至痰膜一端时，纵向向下转换一个视野，然后从右至左观察，以此类推；2.3.2.6在淡蓝色背景下，抗酸菌呈红色；其他细菌和细胞呈蓝色。2.3.2.7仔细观察完300各视野，一般需要5分钟；每个工作日，一位镜检人员阅读玻片量不超过25张，且连续阅读10-12张玻片后应休息20分钟左右。2.4结果判断2.4.1阴性：镜检300个视野以上或连续观察5分钟未发现抗酸杆菌2.4.2阳性：阳性（300个视野内有18条抗酸杆菌）阳性1+（100个视野内有39条抗酸杆菌） 阳性2+（10个视野内有19条抗酸杆菌） 阳性3+（每个视野内有19条抗酸杆菌） 阳性4+（每个视野内有9条以上抗酸杆菌）2.5结果报告与记录2.5.1将检测结果填写入申请单报告栏，报告格式如下: 涂片1：阴性（-）镜检结果：涂片2：阴性（-） 涂片3：阴性（-）2.5.2将检测结果记录于结合门诊检测登记册中： 涂片号 标本性状 检测结果 例： 1： D 阴性（-）2： D 阴性（-） 3： D 阴性（-）2.6痰涂片的保存2.6.1阅读完毕后的涂片，应及时用擦镜纸轻轻在涂片上揭取数次，彻底去除玻片上的镜油。2.6.2经脱油、干燥后的玻片，按实验室序号及涂片编号放置在玻片盒中，存放在阴凉干燥的环境中避光保存