




全文预览已结束
版权说明:本文档由用户提供并上传,收益归属内容提供方,若内容存在侵权,请进行举报或认领
文档简介
第26卷第2期2010年3月OODMACHINERY霉T蕊掌VO126。NO2MAR2010海参多肽的抗氧化性能研究ANTIOXIDANTACTIVITYOFPEPTIDEFRACTIONSFROMSEACUCUMBERPROTEINHYDROLYSATES王静张京楼王铎喜河锺明。金海珠WANGJINGZHANGJINGLOU。WNGDUOXI。HEJONGMING。JINHAIZHU1烟台大学食品科学与工程研究所,山东烟台264005;2烟台鸿润海洋生物科技有限公司,山东烟台264003;3韩国新罗大学校生命工学科,韩国釜山6177361INSTITUTEOFFOODSCIENCEENGINEERING,YANTAIUNIVERSITY,YANTAI,SHANDONG264005,CHINA;2YANTAIHONGRUNOCEANSCITECHCO,LTDSHANDONGYANTAI,SHANDONG264000,CHINA;3DEPARTMENT0FBIOSCIENCEBIOTECHNOZ0G,SILLNUNIVERSITKORN,B甜SN617736,KOREA摘要利用海参自身的蛋白酶使其机体自溶,研究酶解液中不同分子量的海参多肽的抗氧化活性。采用超滤膜将海参酶解液分级分离,得到SPHI10KDA、SPHII510KDA、SPHILL35KDA、SPHIVSPHIIISPHIISPHI。说明海参多肽对3种活性氧均有良好的清除效果,并呈现量效关系。关键词海参多肽;分子量;自由基;抗氧化;化学发光法ABSTRACTTOIDENTIFYTHEANTIOXIDATIVEPEPTIDESOFDIFFERENTMOLECULARWEIGHTFROMTHESEACUCUMBER,GELATINWASHYDROLYZEDBYANAUTOLYTICPROCESSSEACUCUMBERFRAMEPROTEINHYDROLYSATESPHWASFRACTIONATEDACCORDINGTOTHEMOLECULARBASISINTOFOURMAJORTYPESOFSPHIABOVE10KDA,SPHII510KDA,SPHIII35KDAANDSPHIVBELOW3KDAUSINGANUHRAFIHRATIONUFMEMBRANEBIOREACTORSYSTEM,RESPECTIVELYTHEANTIOXIDANTACTIVITYOFSPHSW3SCOMPAREDBYDETERMININGTHEICS0HALFINHIBITC0NCENTRATIONAGAINSTSUPEROXIDEANIONOZ,HYDROXYRADICALOHANDHYDROGENPEROXIDEH202USINGCHEMILUMINESCENCECLANATURALANTIOXIDANT,ASCORBICACIDWASUSEDASPOSITIVECONTRO1THESPHSHAVEHIGHERANTIOXIDATIVEACTIVITYTHANVC;THEANTIOXIDATIVEACTIVITYOFTHEFOURPEPTIDESFROMSPHSDECREASEDINTHEORDERSPHIVSPHIIISPHIISPHITHESPHSHAVEREMARKABLEACTIVITYTOSCAVENGEREACTIVEOXYGENSPECIESROSAGOODCORRELATIONEXISTED基金项目中韩国际合作课题编号KOSEF06061HG00022作者简介王静1984一,女,烟台大学食品科学与工程研究所在读硕士研究生。EMAILWANGJING525518SINACORN通信作者金海珠收稿日期20091101BETWEENTHEAMOUNTOFPEPTIDESANDANTIOXIDANTACTIVITYKEYWORDSPOLYPEPTIDE;MOLECULARWEIGHT;ROS;ANTIOXIDANTPROPERTIES;CHEMILUMINESCENCEMETHOD人体在正常的生理代谢过程中会产生少量的含氧自由基,如0、OH和HZ0Z等,体内的自由基总处于不断产生与消除的动态平衡中。少量的氧自由基不但对人体构不成威胁,而且还可以帮助传递维持生命力的能量,增强免疫力,消除炎症,抑制肿瘤等。但如果人体内自由基的数量过多,就会攻击蛋白质、脂质、DNA等生物大分子,破坏细胞结构,干扰人体的正常代谢活动,引起疾病,加速人体衰老进程L_1。基于人体衰老的自由基学说,近2O年来,活性氧和自由基的研究成为现代生命科学的前沿和热点,筛选和评价高效低毒的抗氧化剂已成为生物学、医学和食品科学研究的新趋势。研究发现海洋生物蛋白经酶解处理后会产生具有抗氧化功能的活性肽。WUHC等2分别用自溶法和商业用酶法酶解鲭鱼蛋白,得到了3种活性多肽,它们能抑制亚油酸的自动氧化,对DPPH也表现出很好的清除效果;JUNSY等L3从金枪鱼的水解产物中分离得到了多种抗氧化活性肽。多肽的功能特性与分子量大小密切相关,不同分子量的抗氧化肽,表现出不同的抗氧化性;邓成萍等4研究了大豆多肽不同分子量段大豆多肽功能特性,结果发现抗氧化肽主要集中在分子量10KDA、SPHII510KDA、SPHI1I35KDA、SPHIV3KDA4个组分,并采用化学发光法分别测定每个组分对0、OH和H0的清除率,以VC做阳性对照,从自由基生物学角度为海参多肽在功能性食品的应用提供理论依据。L材料与方法11材料与仪器鲜刺参产于烟台芝罘岛;硫酸铜、抗坏血酸、鲁米诺LUMINUO1、四硼酸钠、过氧化氢、碳酸钠、碳酸氢钠、邻苯三酚等均为分析纯,天津市天新精细化工开发中心;微弱发光仪BPCI一2一KG,中国科学院生物物理研究所;切向流超滤系统FS016,美国颇尔过滤器有限公司;精密PH计CYBERSCANPHLON510,新加坡EUTECH公司;全自动水解反应器B10TECH一10BGZ,上海保兴生物设备工程有限公司。12试验方法121工艺流程鲜海参一匀浆一调节浓度20一紫外照射25MIN一调PH75一自溶4H一沸水浴灭酶15RAIN一加入95的乙醇至体系达6O乙醇一静止12H一离心一上清液海参多肽混合物122不同分子量海参多肽的超滤分离采用FS016超滤系统,分别更换截留分子量为10,5,3KDA的切向流膜包,控制压力在190KPA下进行超滤,收集滤出液进行抗氧化性测定。123清除羟自由基能力的测定利用CUSO一IUMINUOLV。一H。0。产生OH体系,运用微弱发光测量仪检测不同分子量海参多肽清除0H的能力。向样品池依次加入5OI的待测样品,1MMOLL硫酸铜50UL,1MMOLL的抗坏血酸2O,I,1MMOLI的鲁米诺5OL,PH924的硼砂缓冲液780L,1MMOLL的H。OZ50L,整个反应体系为IML,迅速启动发光,记录100S内发光强度。本底不加H202。124清除超氧阴离子能力的测定采用邻苯三酚一鲁米诺化学发光体系。向样品池中依次加入不同浓度待测样品溶液5O“L空白试样为对照样,加入62410MOLL的邻苯三酚50“I于发光仪的反应池内,原位注人900,I鲁米诺5RETOOLL一碳酸盐缓冲液PH102,迅速启动发光,测定2OS内发光强度。本底不加邻苯三酚。68125清除过氧化氢能力的测定采用H2O一LUMINUOL化学发光体系8。向样品池中依次加入不同浓度待测样品溶液50L空白试样为对照样,1MMOLL鲁米诺5OUL,PH95碳酸盐缓冲液800L,3H2O2IO0L。反应总体积1ML,启动发光系统,间隔1S记数,记录100S内的发光强度。本底不加HZ0Z。126数据处理所有试验均重复5次,曲线面积积分表示相对发光强度,以ORIGIN70VERSION软件统计数据,按式1计算抑制率抑制率一二。O1式中CLT一空白对照组发光强度;CL。本底组发光强度;CL样品组发光强度;测量条件T3O,HIV900V。2结果与分析21清除羟自由基能力的测定以发光强度为纵坐标,发光时间为横坐标记录海参肽组分SPHI以SPHI为例抑制OH的发光动力学曲线见图1。由图1可知,SPHI可使发光曲线明显变化,主要表现为发光峰值和发光曲线面积的降低。计算抑制率与浓度之间的线性关系,得到回归方程式,并计算R。和线性范围,见表1。由表1可知,对回归方程式计算出5O对应的浓度,即ICJ。,来衡量抗氧化能力大小。随着浓度的增加,抑制率也增大,存在显著的量效关系,并在较广的浓度范围内呈现良好的线性关系,达到09943。SPHII,SPHIII和SPHIV对OH的抑制作用,与SPHI规律相似,抑制率与浓度之间的线性关系也很好,R均在099附近。营童8O0006OOOO40OO020O0O0OOO0800OO6OOOO400O020XOO20406080100L20时间TIMES图1SPHI抑制0H的发光曲线FIGURE1LUMINOUSCURVESOF0HINHIBITEDBYSPHI22清除超氧阴离子能力的测定图2所示的SPHI抑制0的发光曲线发光强度明显降低,出峰很迅速。859RR腑鲳0O011第26卷第2期王静等海参多肽的抗氧化性能研究时间TIMES图2SPHI抑制0的发光曲线FIGURE2LUMINOUSCURVESOFO2一INHIBITEDBYSPHI由表2可知,随着样品SPH1浓度的升高,峰值和面积明显降低,清除率呈上升趋势,但当浓度达到一定数值时,曲线趋近于平缓,因此线性范围较窄。SPHII,SPHIII和SPHIV表现出与SPHI相似的规律,具体数值见表2。23清除过氧化氢能力的测定本体系中,H0在碱性条件下氧化鲁米诺可产生化学发光。加入一定量的抗氧化剂,清除H0,可抑制化学发光。由图3和表3可知,随着样品SPHI浓度的增大,发光曲线逐渐降低,清除率逐渐增大,并在一定范围内呈量效关系,R。高达09964。其它样品对HZ0Z的清除作用更加显著,详见表3。时间TIMES图3SPHI抑制H20Z的发光曲线FIGURE3LUMINOUSCURVESOFH2O2INHIBITEDBYSPHI表2海参肽各组分清除超氧阴离子的能力TABLE2THEABILITYOFSCAVENGING02一BYTHESPHS69想昌LLL859IR勰“O001嘿营养与功能2010年第2期表3海参肽各组分清除过氧化氢的能力TABLE3THEABILITYOFSCAVENGINGHZO2BYTHESPHS24海参肽各组分清除各自由基的能力比较一般用发光抑制率为5O时的浓度ICS。来衡量样品对氧自由基的清除能力。IC。值越小,表明其清除氧自由基的能力越强,反之,IC。值越大,表明其清除氧自由基的能力越弱。由表4知,VC清除OH、O。和H0的ICS。分别为165,0175,0471MGML,4种不同分子量范围的海参肽样品对应的ICS。均比VC小,因此抗氧化效果均优于VC,其中SPHIII抑制OH、O。和H0所需的能力是分别相当于V的8倍、28倍和26倍。此外,SPHIII对0H、0一和HO3种氧自由基抑制效果表现都是最强的,SPHI均为最弱,SPHIII和SPHIV居于中间,因此4种组分抗氧化能力的排列顺序为SPHILLSPHIVSPHIISPHI表4海参肽各组分对氧自由基的抑制能力ICSOTABLE4THESCAVENGINGEFFECTSONOXYGENRADICALSBYTHESPHSIC504种样品对O的平均IC。比OH、和HZ0偏小,OH最大,因此4种组分的海参多肽对三种氧自由基的清除能力顺序为0。H。0。OH。3讨论人体内自由基失衡会导致机体衰老,引发各种疾病,如癌症、老年性痴呆症,动脉硬化、关节炎等,补充外来抗氧化剂能降低机体内活性氧含量,延缓衰老。本试验分别测定了SPHI10KDA、SPHII510KDA、SPHIII35KIA、SPHIVSPHIIISPHIISPHI。4种分子量范围的海参多肽清除0的效果最好,其次是H0Z,最后是OH。以上试验结果为进一步开发抗氧化功能显著的功能性食品提供了很好的依据。第26卷第2期王静等海参多肽的抗氧化性能研究参考文献1王建英,任引哲,王迎新氧自由基与人体健康EJ化学世界,2006,47161632WUHCCHENHM,SHIAUCYFREEAMIOACIDSANDPEPTIDESASRELATEDTOANTIOXIDANTPROPERTIESINPROTEINHYDROLAYSATESOFMACKERELSCOMBERAUSTRIASICUSJFOODRESEARCHINTERNATIONAL,2003369499573JUNSY,PARKPJ,JUNGWK,ETA1PURIFICATIONANDCHARACTERIZATIONOFANANTIOXIDATIVEPEPTIDEFROMENZYMATICHYDROLYSATEOFYELLOWFINSOLELIMANDAASPERAFRAMEPROTEINJEUROPEANFOODRESEARCHANDTECHNOLOGY,200221920264邓成萍,薛文通,孙晓琳,等不同分子量段大豆多肽功能特性的研究J食品科学,2006,2751091125吴拥军,石杰,屈凌波,等流动注射化学发光法及光度法用于八戟天提液抗氧化活性的研究_J光谱学与光谱分析,2006,269168816916张尔贤OH自由基产生的化学发光体系及对若干天然产物清除作用的评价M北京原子能出版社,19941531597许申鸿,杭瑚邻苯三酚一碳酸盐缓冲液化学发光体系的研究J生物化学与生物物理进展,1999,2654874918HUTX,CHENJW,XUJY,ETA1EFFECTSOFPOLYSACCHRIDEPEPTIDEOFCORIOLUSANDPOLYSACCHARIDEOFGANODERMAONONSCAVENGINGACTIVEOXYGENSPECIESJACTABIOCHEMICAETBIOPHYSICASINIEA,19922446547O9CHENHM,MURAMOTOK,YAMAUCHIFSTRUCTURALANALYSISOFANTIOXIDATIVEPEPTIDESFROMSOYBEANCONGLYCININJJOURNALOFAGRICULTURALANDFOODCHEMISTRY,19954357457810QJANZJ,JUNGWK,KIMSKFREERADICALSCAVENGINGACTIVITYOFANOVELANTIOXIDATIVEPEPTIDEPURIFIEDFROMHYDROLYSATEOFBULLFROGSKIN,RANACATESBEIANASHAWJBIORESOURTECHNO1,200899169O169811SAIGAA,TANABES,NISHIMURATANTIOXIDANTACTIVITYOFPEPTIDESOBTAINEDFROMPORCINEMYOFIBRILLARPROTEINSBYPROTEASETREATMENTJJAGRICFOODCHEM,2003511712DDVALOSA,MIGUELM,BARTOLOM4B,ETA1ANTIOXIDANTACTIVITYOFPEPTIDESDERIVEDFROMEGGWHITEPROTEINSBYENZYMATICHYDROLYSISJJFOODPROT,2004671939194413RAJAPAKSEN,MENDISE,JUNGWK,ETA1PURIFICATIONOFARADICALSCAVENGINGPEPTIDEFROMFERMENTEDMUSSELSAUCEANDITSANTIOXIDANTPROPERTIESJFOODRESINTERN,20053817518214CHENHM,MURAMOTOK,YAMAUCHIF,ETA1ANTIOXIDANTPROPERTIESOFHISTIDINECONTAININGPEPTIDESDESIGNEDFROMPEPTIDEFRAGMENTSFOUNDINTHEDIGESTSOFASOYBEANPROTEINJJOURNALOFAGRICULTURALANDFOODCHEMISTRY,1998,4614953上接第63页参考文献1张军辣椒素的药理与临床研究进展J国外医学中医中药分册,1996,1828112SRINIVASANKROLEOFSPICESBEYONDFOODFLAVORINGNUTRACEUTICALSWITHMULTIPLEHEALTHEFFECTSJFOODREVINT,2005211671883郭建明辣椒的风味化学及其在调味品中的应用J中国调味品,19987244林绮雯,杨得坡,黄世亮,等辣椒素的药理与临床研究概况EJ广东药学,
温馨提示
- 1. 本站所有资源如无特殊说明,都需要本地电脑安装OFFICE2007和PDF阅读器。图纸软件为CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.压缩文件请下载最新的WinRAR软件解压。
- 2. 本站的文档不包含任何第三方提供的附件图纸等,如果需要附件,请联系上传者。文件的所有权益归上传用户所有。
- 3. 本站RAR压缩包中若带图纸,网页内容里面会有图纸预览,若没有图纸预览就没有图纸。
- 4. 未经权益所有人同意不得将文件中的内容挪作商业或盈利用途。
- 5. 人人文库网仅提供信息存储空间,仅对用户上传内容的表现方式做保护处理,对用户上传分享的文档内容本身不做任何修改或编辑,并不能对任何下载内容负责。
- 6. 下载文件中如有侵权或不适当内容,请与我们联系,我们立即纠正。
- 7. 本站不保证下载资源的准确性、安全性和完整性, 同时也不承担用户因使用这些下载资源对自己和他人造成任何形式的伤害或损失。
最新文档
- 物资搬迁协议合同书模板
- 班班通安装劳务合同范本
- 精准扶贫房改造合同范本
- 销售店集体买车合同范本
- 牛肉面合作协议合同范本
- 物业消防水维修合同范本
- 燃气供货合同协议书模板
- 苗木移栽合同协议书样本
- 网签合同撤销协议书范本
- 甲状旁腺切除手术协议书
- 融资合作协议模板(2篇)
- GB/T 15370.3-2012农业拖拉机通用技术条件第3部分:130kW以上轮式拖拉机
- IATF16949-2016变更控制程序
- 药物竹罐临床应用课件整理
- 母乳喂养自我效能量表(BSES) (1)附有答案
- (品管圈)良肢位摆放演示教学课件
- 保姆级别CDH安装运维手册
- 园林绿化及广场施工方案
- 可下载打印的公司章程
- 129平米全包装修报价明细表
- --水库除险加固工程下闸蓄水验收建设管理工作报告
评论
0/150
提交评论