牛磺酸对实验性Ⅱ型糖尿病大鼠治疗作用研究

上海畜牧兽医通讯2009年第3期1牛磺酸对实验性型糖尿病大鼠治疗作用研究赵赫林树梅杨建成刘梅胡建民沈阳农业大学畜牧兽医学院沈阳110161糖尿病是继肿瘤、心血管病之后列居第三位的非传染性疾病。其中，T2DM的发生，在国外占糖尿病患者的90以上，而在国内则更高。在饮食中添加牛磺酸可以防治STZ所致的糖尿病，并对自发产生型糖尿病的动物模型可能有良好的改善作用，但其对实验性T2DM的治疗作用尚未见报道。本研究的目的在于利用一种与普通T2DM发病机制和病理特点相符合，且相对简便经济的T2DM大鼠模型来研究牛磺酸对实验性T2DM的治疗作用。1材料与方法11试验材料111仪器与试剂STZ购自SIGMA公司，临用前以01MOLL、PH42的柠檬酸一柠檬酸钠缓冲溶液配制成05的溶液；蔗糖、胆固醇、胆盐均购于国药集团化学试剂沈阳有限公司；牛磺酸购自北京嘉康源有限公司；胰岛素放免试剂盒购于中国原子能科学研究院同位素研究所；血糖仪及同批号血糖试纸由罗氏公司提供；血液生化指标试剂盒购于南京建成生物工程研究所，其他由实验室提供。112试验动物清洁级雄性WISTAR大鼠110只，体重140180G，由长春高新医学动物实验研究中心提供。每笼4只，饲养于标准环境，自由摄食饮水，预饲一周。常规饲料购为通讯作者。23不同日粮组雏鸡卵黄囊内营养物质含量的变化由表4可知，随着时龄的增长，各采食组卵黄囊内的水分含量不断上升，粗蛋白的含量则不断下降。总体来看，相同时龄C组的卵黄囊水分含量略高，A组的卵黄囊水分含量略低；A组的粗蛋白含量略高，B组的粗蛋白含量略低，但三组之间卵黄囊内的水分及蛋白质含量元显著差异PO05。3讨论31不同日粮对雏鸡体重的影响有研究表明，在雏鸡饲养过程中，发现34日龄一般会出现一个死亡高峰，这与正常情况下绝大部分卵黄被吸收所需要的时间基本一致。检查死亡雏鸡可以发现，它们中大部分体内仍然有一个大的卵黄囊存在。这表明这些雏鸡不是死于卵黄不足，而是由于它们没有成功利用卵黄囊储备的能量【引。雏鸡的初期体重小于初生重，原因是由于雏鸡在03日龄主要以利用体内卵黄囊营养物质以弥补组织器官的生长，因此造成体重下降【5。83时龄A、B组与C组体重差异显著P005，表明全价配合饲料作为雏鸡的开食料效果较好。在107时龄以后三组雏鸡体重差异不显著，是由于83时龄后三组雏鸡均采食同一种日粮缩小了体重的差距。综上所述，可以得出C组有加快卵黄囊营养物质吸收的趋势，有利于降低在肉鸡饲养过程中雏鸡在34日龄左右没有成功利用卵黄囊储备的能量出现的一个死亡高峰。32不同日粮对雏鸡卵黄囊吸收的影响在对各时龄段各采食组卵黄囊营养成分进行分析时发现，在采食不同日粮条件下，3个采食组在1159时龄7O自沈阳市于洪区前民饲料厂。12试验方法121实验性T2DM大鼠模型的建立1饮食诱导IR随机选出20只大鼠作为A组，其余造模。高脂高糖饲料15猪油、25蔗糖、25胆固醇、1胆酸盐和565常规饲料饲喂M组大鼠一个月，诱导大鼠产生IR。2低剂量STZ腹腔注射诱导糖尿病1个月后，M组大鼠腹腔注射STZ25MGKG，1次倜，注射2次，对照组注射柠檬酸缓冲液。M组大鼠持续饲喂高脂高糖饲料，2个月后，测定大鼠空腹血糖、随机血糖和血浆胰岛素水平。空腹血糖的测定禁食12H，断尾采血，将第二滴血滴在血糖试纸上，血糖仪读数。随机血糖测定无需禁食，方法同上。胰岛素水平测定断尾后，接200300L全血，静置4H后，1500RMIN分离血清，按照说明书测定。3模型成立判断T2DM动物模型成立必须同时满足以下两个条件ISILN1空腹血糖值血浆胰岛素水平正常动物均值、正常大鼠随机血糖均值2个标准差随机血糖。4糖尿病模型大鼠并发症指标的变化随机挑选10只成模大鼠和5只正常对照组大鼠，颈静脉采血，静置12H后，1500RMIN离心取血清，一20留存。分别测定血清中丙二醛MDA、超氧化物歧化酶SOD、总抗氧化能力TAOC、高密度脂蛋白胆固醇HDLC、血清甘油三酯TG和总胆固醇TCH的含量。左右的卵黄囊干物质被利用，表明59时龄以内即3D以内是卵黄囊营养吸收利用的主要时期【5。因此，在饲养过程中，要设计好开食日粮，加速雏鸡对卵黄囊营养吸收利用的速度，提高雏鸡对卵黄囊的利用速度和利用效果，提高雏鸡的成活率和生长速度，为其日后保持较快的增长速度打好基础。A、B组雏鸡在更换饲料后，其卵黄囊的含量反而出现了增长，其机理尚不清楚，还有待进一步研究。33不同日粮对雏鸡卵黄囊内蛋白质吸收的影响卵黄囊鲜样中水分含量都在不断上升，但粗蛋白含量则不断下降，主要是由于卵黄囊中的营养物质被雏鸡吸收。在雏鸡出壳后1258H以内，卵黄囊内营养索的减少量大于同期全屠体含卵黄囊相同营养素的减少量，刚出壳的雏鸡前23D所需的能量、蛋白质、氨基酸完全由卵黄囊提供，而且还说明了卵黄囊内大量营养物质向雏鸡体内转移【6。参考文献1SAKIAAEFFECTOFPOSTHATCHFEEDINGONBROILERPERFORMANCEJINTERJPOULTSCI，2005，41462NOYY。SKLANDYOLKUTILIZATIONINTHENEWLYHATCHEDPOULTCJBRITISHPOULTRYSCIENCE，1998A，394464513赵红波，谢幼梅新生雏鸡卵黄囊阶段的营养研究进展J中国家禽，2001，2314304KUENZE1BASALMETABOLICRATEINGROWINGCHICKSGALLUSDOMESTICUSPOULTSCI，1977。566196275莫棣华03周龄肉用雏鸡卵黄囊等组织中蛋氨酸、胱氨酸含量的变化规律J动物营养学报，1994，6246王和民肉用鸡雏在绝食条件下卵黄囊营养和维持需要J畜牧兽医学报，1994A，113198上海畜牧兽医通讯2009年第3期122牛磺酸治疗试验方法其余成模大鼠随机分为四组自然恢复组B组、牛磺酸高剂量组C组、中剂量组D组和低剂量组E组。分别灌胃0、34MGKG、26MGKG和21MGKG70牛磺酸混悬液，A、B组同。15个月后，颈静脉采血，指标测定同上。13统计学处理应用SPSS160系统软件进行分析，试验数据采用MEANSSD形式表示，组间差异的显著性用T检验方法进行统计学处理。2结果与分析21模型成立判断A组和M组大鼠的随机血糖水平及ISI见表1。从中我们可以看出，结果符合T2DM大鼠模型成立条件。有74只大鼠成模，成模率达82。表1A组和M组大鼠随机血糖水平及ISI结果22造模试验结果各试验组大鼠血清中MDA、SOD、TAOC、TG，TC和HDLC含量见表2。从表中可以看出，M组血清中SOD、TAOC、HDLC显著低于A组；而MDA、TG、TC极显著高于A组。表2生化指标测定结果23牛磺酸治疗试验结果饲喂牛磺酸后，试验大鼠随机血糖、胰岛素敏感指数、MDA、SOD、TAOC、TG、TC和HDLC结果见表3。由表中可以看出，B组随机血糖、TG、TC和MDA显著高于其它各组；而ISI、HDLC、SOD和TAOC显著低于其它各组。表3各组大鼠随机血糖、胰岛素、MDA、SOD、TAOC、TGTC和HDLC结果3讨论T2DM病因可归纳为IR及胰岛素分泌障碍两方面。IR是指全身性胰岛素感受性下降的一种状态，因此，正常浓度的胰岛素不能正常发挥胰岛素的相应效应。大量糖和脂肪摄人会导致肌肉和脂肪组织IR，提示高糖高脂饮食在诱发IR及导致糖尿病中可能起至关重要的作用。依据国内外文献报道，并通过提高饲料中糖、脂的含量，使大鼠产生较强的IR；并分两次注射STZ，使模型更加稳定。高糖高脂饮食1个月后，因机体尚未产生细胞分泌功能下降，故利用反映机体对胰岛素敏感性的一项指标ISI来判定。本试验成模判断标准中的血糖指标是随机血糖，人医临床实验表明糖尿病大鼠与正常大鼠的空腹血糖无明显差异，而糖尿病大鼠的随机血糖却远远高于正常大鼠。本试验的结果也充分证明了这一点。高糖高脂饮食1个月后，M组大鼠血清TG和TC水平明显高于A组大鼠P001，而HDLC明显降低，表明试验大鼠体内出现脂质代谢紊乱现象，这与以往的报道相同，符合T2DM的特点。而M组大鼠血清SOD水平显著低于A组，MDA水平显著高于A组，说明T2DM大鼠体内自由基清除出现障碍，自由基在体内蓄积，MDA和SOD问的平衡被打乱，这与孙桂菊等的报道相似。而且机体的防御体系总抗氧化能力TAOC降低，这说明T2DM大鼠体内的抗氧化防御机制被破坏。从上述现象的概括可以看出，本试验模型大鼠不但表现较强的胰岛素抵抗，且伴随着胰岛8细胞受损而导致的胰岛素分泌缺陷，糖、脂代谢紊乱，机体抗氧化机能被破坏。更接近临床疾病的实际发病情况，成功率高，重复性好，是研究T2DM发病机制、相关并发症及药物评价的理想模型。据报道，牛磺酸能够改善脂质代谢和型糖尿病大鼠的胰岛素抵抗，与本试验结果相似。试验中，B组ISI与A组差异极显著，而灌胃牛磺酸后，其余各组ISI均升高与A组差异不显著。这说明牛磺酸能够提高实验性T2DM大鼠的胰岛素敏感性，使其恢复到接近正常水平，即牛磺酸对实验性T2DM有一定的治疗作用。牛磺酸组大鼠HDLC、MDA、TG和TC与A组的差异不显著，而B组与A组差异极显著，此外牛磺酸组大鼠血清中SOD和TAOC上升，均与A组差异不显著，而B组与A组差异显著，表明了牛磺酸能够明显改善实验性T2DM大鼠的血脂代谢，也能够提高其抗氧化能力，减轻了体内的氧化损伤。其中，SOD的B组与D组差异极显著，与其他各组差异显著，这种情况的出现可能是由于受到了某些客观因素的干扰。本试验中，牛磺酸组大鼠血糖下降接近正常水平，而B