SNT 1376.1-2004 牛传染性胸膜肺炎病原分离鉴定

376. 1of 1376. 1标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位:中华人民共和国四川出人境检验检疫局。本标准主要起草人:李玉冰、严玉宝、曹同雪、曹宗君、胡娟、马勇。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 1376. 1标准适用于牛传染性胸膜肺炎病原的分离与鉴定。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准中引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 6682温培养箱。普通显微镜。穿刺针及注射器。净化工作台。.0%马血清肉汤培养基、10%马血清肉汤琼脂培养基、普通10%马血清肉汤琼脂培养基、葡萄糖生化培养基、精氨酸生化培养基和四氮哇盐生化培养基。,! 6682输和保存5. 1活牛的样品采集用灭菌拭子采集鼻分泌或用注射器无菌穿刺采取胸腔液。部淋巴结、胸腔液、有关节炎的采取关节滑液。4条件下48 将样品置一20保存。病料置于含500 IU/ 000乙酸铭的肉汤中磨碎，10倍稀释后40接种用。 1376. 1菌抽取的胸腔液、关节滑液可直接接种。1取。. 1 . 3 血清肉汤培养基中，置37培养直至第10 血清肉汤琼脂培养基上，每个样品共接种5个培养皿。每个培养皿用胶布或者蜡封口，置37培养直至第10 1接种后第3血清肉汤试管中，牛传染性胸膜肺炎病原的生长表现为:初期呈轻微混浊或白色点状或丝状，后逐渐均匀混浊，呈半透明稍带乳光，无菌膜或沉淀，也无颗粒悬浮。血清肉汤琼脂培养基上，牛传染性胸膜肺炎病原的生长表现为:生长迟缓，为水滴状圆形略带灰色的微小菌落，中央有乳头状突起，呈“煎蛋”样外观，菌落直径约0. 2 0 血清肉汤琼脂培养基，培养3传三代进行纯化，供病原鉴定用。7病原鉴定7. 血清肉汤培养基中3 . 血清肉汤琼脂培养基上，3传染性胸膜肺炎病原生长表现如6. 3. 3所述。于玻片上，自然干燥，用500铬酸水溶液固定2 洗，浸人用蒸馏水1:30稀释的姬姆萨氏染色液，4过夜，取出用蒸馏水轻轻冲洗，自然干燥后用800倍1 000倍显微镜观察。病原在显微镜下表现为多形态，以球形最常见，也可见杆状、丝状、环状、星状者，长度为125 氨酸生化培养基和四氮哇盐生化培养基，37培养3 传染性胸膜肺炎病原能分解葡萄糖产酸变色但不产气;不能分解精氨酸，试验管不变色;能还原四氮哇盐，培养基由无色变为红色。结果判定符合第7章所列条件的，判为牛传染性胸膜肺炎病原体。 范性附录)培养基A. 心浸液1 000 母浸膏100 g、琼脂3 g、青霉素500 000 酸花0. 14 g、马血清200 培养基的配制:先将乙酸蛇溶于15 心浸液中加人琼脂、酵母浸膏，煮沸溶解后，15磅灭菌15 培养基温度降至37以下时，将乙酸铂、青霉素及经56灭活30 匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置410%马血清肉汤培养基A. 2. 1培养基的成分:牛心浸液1 000 母浸膏100 g、马血清100 萄糖5 g,g、青霉素500 000 g,A. 2. 2培养基的配制:先将乙酸铭溶于巧心浸液中加人酵母浸膏、葡萄糖，煮沸溶解后，15磅灭菌15 培养基温度降至37以下时，将乙酸蛇、青霉素及经56灭活30 匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置4保存备用。10%马血清肉汤琼脂培养基A. 3. 1培养基的成分:牛心浸液1 000 母浸膏100 g、马血清100 萄糖5g、琼脂12 g,g、青霉素500 000 酸锭0. 14 g,A. 乙酸轮溶于15 心浸液中加人琼脂、酵母浸膏、葡萄糖，煮沸溶解后，15磅灭菌15 乙酸蛇、青霉素及经56灭活30 匀，分装至无菌的容器中。经无菌检验后置4保存备用。A. 4普通10%马血清肉汤琼脂培养基A. 4. 1培养基的成分:牛心浸液1000 母浸膏100 g、马血清100 萄糖5 g,g、琼脂12 葡萄糖、酵母浸膏、琼脂溶解于1 000 10磅灭菌15 人经560C 30 匀，分装至灭菌培养皿，经无菌检验后置4保存备用。5. 1培养基的成分:牛心浸液1 000 血清100 母浸膏250 g, l %酚红5 g,50%葡萄糖溶液10 心浸液中加人酚红，酵母浸膏，煮沸溶解，15磅灭菌15 菌加人萄糖溶液和经56灭活30 匀，无菌分装至无菌的生化试管中，经无菌检验后置4保存备用A. 6精氨酸生化培养基A. 6. 1培养基的成分:牛心浸液1 000 血清100 母浸膏250 g,l%酚红5 g, 氨酸盐溶液40 培养基的配制牛心浸液中加人酚红、酵母浸裔，煮沸溶解，15磅灭菌15 菌加人菌的精氨酸盐溶液和经56灭活30 匀，无菌分装至无菌的生化试管中，经无菌检验后置4保存备用。7. 1培养基的成分