维生素A棕榈酸酯粉含量测定

饲科广2OO9年第10期37检测分析DEATONANDANALYSIS维生素A棕裥酸酯粉含量测定杨金枢盛翠凤胡建权毛丽萍章良英郑乐友摘要本文通过研究，建立了一种用液相色谱法测定维生索A棕榈酸酯含量的方法本方法具有重复性和再现性好、适应性强、准确度高等特点。适用于以合成维生素A棕榈酸酯为主要原料以变性淀粉等为辅料，加入适量抗氧化剂以喷雾法工艺生产的维生素A棕榈酸酯粉的含量测定关键词维生素A棕榈酸酯粉；液相色谱；外标法含量测定1原理维生素A棕榈酸酯和维生素A乙酸酯在四丁基氢氧化铵的作用下，水解成维生素A醇，用外标法定量。2试验方法21试剂和溶液211菠萝蛋白酶活性2003GDUG。212异丙醇色谱纯。213正戊烷分析纯。214维生素A乙酸酯对照品含量2800000IU，G。215BHT2，6一二叔丁基一4一甲基苯酚。21610四丁基氢氧化铵水溶液。217BHT异丙醇溶液LRJL取BHT215LG，用异丙醇212稀释到1000ML，摇匀。218四丁基氢氧化铵异丙醇溶液01MOLL取杨金枢浙江新和成股份有限公司。盛翠凤、胡建权、毛丽萍、章良英、郑乐友单位同第一作者。10四丁基氢氧化铵水溶液216130ML，用异丙醇稀释到500ML，摇匀。22仪器和设备221高效液相色谱仪带紫外检测器UV。222分析天平223超声水浴装置23含量测定231试样溶液制备称取试样适量约相当于维生素A棕榈酸酯50000IU精确至00002G于100ML棕色容量瓶中加入菠萝蛋白酶2030MG。水5ML及异丙醇015ML。于6065水浴中超声5MIN；加入01MOLL四丁基氢氧化铵异丙醇溶液21940ML，置于6065水浴中反应10MIN。取出，流水冷却至室温，用BHT异丙醇溶液稀释至刻度摇匀精密移取该溶液10ML于50ML棕色容量瓶中。用异丙醇稀释至刻度摇匀即为试样溶液约含维生素A棕榈酸酯100IUML。232对照溶液制备精确称取维生素A乙酸酯对照品004G于100ML棕色容量瓶中加入正戊烷5ML01MOLL四丁基氢氧化铵异丙醇溶液40ML。置于6065水浴温度中反应LOMIN。取出，流水冷却至室温，用BHT异丙醇溶液稀释至刻度，摇匀。精密移取该溶液5ML于50ML的棕色容量瓶中，用异丙醇稀释至刻度摇匀即为对照溶液。233色谱条件色谱柱CL8柱5M150MMX46MM；检测分析DERMATI。N耐ANDYSS流动相甲醇水955；流速10MLMIN；检测波长325NM进样量2OL。2_34测定步骤分别取对照品溶液及试样溶液经0451M有机滤膜过滤，按色谱条件233进样分析，用外标法定量235计算和结果表示维生素A棕榈酸酯粉中维生素A棕榈酸酯的含量，以国际单位IUG表示，按式1计算XALXCSXRNLX5001A2XM2X1000式中A试样溶液中维生素A醇的峰面积；C广一维生素A乙酸酯对照品的含量IU；M，称取维生素A乙酸酯对照品的质量G；50维生素A棕榈酸酯粉试样的总稀释体积A广对照溶液中维生素A醇的峰面积；M厂称取试样的质量G；10O维生素A乙酸酯对照品的总稀释体积3结果与讨论31重复性取同一试样测定结果实验1为251万IUGN6，RSD055；实验2为252万IUGN6，RSD043，两者的重复性、精密度都很好。32再现性3批不同的样品于3个不同的实验室进行测定，测定结果如下样品1分别为252万IUG、252万IUG、249万IUG；2分别为254万IUG、255万IUG、250万IUG；样品3分别为252万IUG、253万IUG、250万IUG。铂蝌广2009年第10期I一33线性以峰面积为Y轴。溶液浓度为X轴进行线性回归。线性方程为Y31512XO3635，相关系数R为0999997即在样品测试浓度在66659941A,GML范围内时，有良好的线性关系。34准确度准确度实验采用加标回收的方法来测定测定结果平均回收率为1001N12RSD为055。35耐用性351溶液稳定性实验取试样溶液放置4H每隔1H上机测定一次测得试液不同时间的相应结果1248初始值、1255T1H、1255T2H、1258T3H、1256T4H。说明样品溶液在4H内测定，不影响测定结果。352更换色谱柱对测试结果的影响用ZORBAXC185URN46MMXL50MM及AT1ANTISTMDC185UM46MMXL50MM，两种牌子的色谱柱，对同一试样进行测定，测定结果一致，均为251万IU，G。353反应时间的影响分取3份平行试样控制加人四丁基氢氧化铵溶液后的反应时间分别为8MIN、10MIN、12MIN测得维生素A醇峰面积与试样的质量比依次为5350、5361、5338。即LOMIN的反应时间比较适宜354容量实验分别取同一试样015G、019G、022G、025G，进行测试测得试样的含量依次为252、250、252、25