《色谱分析技术》PPT课件

色谱分析技术,济宁市中医院设备科科室业务学习,第一节色谱法概述,色谱法（chromatography）是一种物理分离技术，实质上是利用混合物中各个组分在互不相溶的两相（固定相和流动相）之间的分配的差异而使混合物得到分离的一种方法，也有人称之为色层法、层析法等。,第一节色谱法概述,固定相（stationaryphase）一个有大比表面积、相对固定不动的、可以是固体或以某种方式固定了的液体流动相（mobilephase）携带待分离混合物、流过固定相、可以是气体或液体两相及两相的相对运动构成了色谱法的基础,第一节色谱法概述,色谱仪（chromatograph）是利用色谱分离技术再加上检测技术，对混合物进行先分离后检测，从而实现对多组分的复杂混合物进行定性、定量分析。,第一节色谱法概述,色谱分析特点具有高分辨率、高灵敏度、样品量少且速度较快、结果准确等优点，是分析混合物的有效方法。,一、色谱法的研究进展,1903年至1906年俄国植物学家茨维特（Tswett）首先利用分离及分析技术进行植物色素方面的研究，“色谱”因此而得名。其色谱原型装置，如右图所示：,一、色谱法的研究进展,1931年，文特斯汀（Winterstein)开始将这种分离技术应用于无色物质的分离。1952年，马丁（Martin）等人提出了气液色谱法，正式推出了气相色谱技术液相色谱技术的发展相当缓慢。在70年代随高压技术、高效固定相、检测技术的发展以及电子、计算机技术等方面的新成就的不断涌现而迅速发展起来。计算机和自动控制技术的发展色谱仪的联用技术的发展，如气相色谱仪和质谱仪的联用已十分普及，液相色谱仪与质谱仪的联用也在不断发展。,二、基本原理,色谱是利用待分离的样品组分在两相中分配的差异而实现分离的。阻力小的移动速度快、阻力大的移动速度慢色谱分离的两要素是互不相溶的两相（流动相及固定相）以及样品（混合物）各组分在两相中分配的差异。,三、色谱仪的分类及其特点,气相色谱,气固色谱,气液色谱,流动相为气体（称为载气）固定相为液体,液相色谱,液固色谱,液液色谱,流动相为液体（淋洗液）固定相为液体,按分离柱不同可分为：填充柱色谱和毛细管柱色谱,流动相为气体（称为载气）固定相为固体吸附剂,流动相为液体（淋洗液）固定相为固体吸附剂,1.色谱仪的分类,三、色谱仪的分类及其特点,2.气相色谱仪的特点：流动相为气体（称为载气）。具有高分辨率、高速度、高灵敏度及选择性好等优点。只能用于被气化物质的分离、检测，使用范围较小,三、色谱仪的分类及其特点,3.液相色谱仪的特点：流动相为液体,适用于气化时易分解物质的分离、分析。,三、色谱仪的分类及其特点,4.色谱仪的特点（1）应用范围广，可用于几乎所有化合物的分离和分析。（2）样品用量少，用极少的样品就能完成一次分离及分析，可以实现痕量分析、微量分析。（3）高选择性是指对性质极为相近的物质，如同位素、同分异构体等，通过选取适当的固定相及流动相和分离条件，可实现分离及分析。,三、色谱仪的分类及其特点,4.色谱仪的特点（4）高效能，能够分析分配系数极为接近的组分，可分离并分析极为复杂的混合物。（5）高灵敏度，能分析含量极微的物质，如气相可检出10-11g1013g物质。液相也接近此精度。（6）分析速度较快，只需几分钟至几十分钟就可完成一个样品的分析工作。,四、色谱仪的输出信息,1.色谱图（chromatogram）,四、色谱仪的输出信息,2.基线（baseline）是图中与时间轴平行t的记录线b。它表明纯流动相流过检测器时所产生的响应。判断基线稳定与否的标准是基线稳定性，即基线b与时间轴t平行或偏离的程度。3.色谱峰检测器的输出信号随流入组分的浓度或质量的变化出一个个的峰形，即为色谱峰（chromatographicpeak）。,四、色谱仪的输出信息,4.保留时间从进样开始到出现色谱峰最大值所需的时间为保留时间（re-tentiontime）。常用tR（组分名）（或简写为tR）表示，如tR1、tR2等，单位为min。与保留时间有关的其他参数，如保留体积、校正保留时间等，统称保留参数。,四、色谱仪的输出信息,5.死时间死时间（deadtime）是指惰性物质组分，从注入到出现峰的最高点所需时间，若组分是空气，用符号t0表示，单位为min。死体积（deadvolume）指色谱柱内流动相的体积，在实际中包括从进样系统到检测器的体积。,五、色谱技术在临床检验中的应用,气相色谱仪常用于人体微量元素的快速分析，血与尿等体液中的化合物的分析，分析鉴定药物的组成和含量、检测人体的代谢产物，通过气相色谱仪串联质谱，在“兴奋剂”检测中可分析100余种违禁药品等。高效液相色谱仪可以应用在：分析人体体液内代谢物质；分析药物的组成和含量，在药物生产