Agilent1100色谱工作站操作培训.ppt

2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,Agilent1100/化学工作站操作培训,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,Agilent1100日常开机步骤,打开计算机，进入Windows系统，CAGBootpServer程序将自动运行；打开HPLC1100各模块电源，等仪器自检通过，并且与计算机通讯成功（约12min）后，进入Online工作站系统初始化：（主要目的：排除系统中的气泡）；打开Purge阀；加大泵流量并开启泵，快速冲洗实验所用的各个通道，至无气泡从废液管排出，（eg.设A通道100%，5mL/min，冲洗A通道至无气泡排出；再分别依次冲洗所需其余通道B、C、D等）；降低流量及溶剂比例成实验初始条件，并单击OK确认执行；（eg.实验二的条件Flow:1.0mL/min，A：20%(H2O),B:80%(MeOH)；关闭Purge阀，完成系统初始化。系统平衡：（主要目的：平衡、稳定色谱柱、柱温以及灯的能量）调出本次实验所需方法，保持泵继续工作，以实验初始的流动相冲洗、平衡柱子一段时间。（一般约30min，可自己根据本人的仪器配置情况计算，要求至少以色谱柱几何体积510倍体积的流动相冲洗、平衡系统。）；在适当时间，开启柱温箱和检测器，使得柱温稳定，检测器灯的能量稳定。（一般灯需要20min左右的稳定时间。）点击SystemOn图标，可以同时打开柱温箱和检测器；打开View菜单下的OnlineSignal窗口，单击Change键，选择需要监测的色谱信号并设定合适的X、Y轴范围，观测色谱基线；基线稳定后可以进样分析（经验上，基线波动12mAU（常规分析）或0.5mAU（痕量分析）就可算是基线稳定。）填写SampleInformationRunMethod(或手动打针进样并切换进样阀),2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,编辑一个完整的方法EditEntireMethod,TCC,ALS,All,最窄峰的半峰宽,PeakWidth,Save,BWrefBWsam,BWref,尽量靠近样品的最大吸收,样品没有吸收/吸收比较弱处,WLref,Slit,吸收光谱的半峰宽,BWsam,大于溶剂的截止波长20nm以上,样品的最大吸收,WLsam,DAD,WLsam,VWD,压力限PressureLimits,时间表Timetable,后运行Posttime,停止时间Stoptime,溶剂Solvent,流量Flow,泵Pump,二、仪器控制/数据采集参数Instrument/Acquisition,描述性的文字,一、方法信息Methodinformation：,PeakWidth,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,手动积分（Manualevents）,积分事件（Integrationevents）,自动积分（AutoIntegrate）,3、积分优化：,Full,Range,2、谱图优化：,1、调用数据文件,三、数据分析（DataAnalysis）,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第三针,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第二针,输入含量,AddLevel,第一针,Level3,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第三针,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第二针,输入含量,AddLevel,第一针,Level2,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第三针,平均/取代,选级别Level,Recalibrate,第二针,指定参考峰、内标峰,输入组分名称、含量,NewCalibrationTable,第一针,Level1,4、建立校正表Calibration,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,保存/另存方法Save/SaveAs,GLPData、SaveMethodWithData,规定执行数据采集、分析或同时进行,四、运行时间对照表（RunTimeChecklist）,色谱图选项,输出目的地,报告格式（Short、Detail、Performance、Performance+Noise）,定量方式（ESTD、ISTD.）,6、设定报告格式,权重Weight,原点Origin,类型Type,校正曲线CalibrationCurve,样品单位Amountunits,5、校正设置（CalibrationSetting）,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,A1,A2,A3,假定：,C1,C2,C3,1,2,3,假定：,已知：,面积百分比,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,一、标样,A标1,A标2,A标3,C标1,C标2,C标3,1,2,3,RF1,RF3,RF2,二、样品,A1,A2,A3,1,2,3,归一化法,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,一、标样,A标,C标,1,RF,二、样品,A样,1,外标法,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,一、标样,A标,A标内,C标,C标内,1,ISTD,RF标,RF标内,二、样品,A样,A样内,1,ISTD,假定：,C样,C样内,RF样,RF样内,可求：,RF样,则：,？,则：,内标法,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,Pump,Column,手动阀,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,流路图,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,PUMP,ALS,ColumnTCC,Det,甲醇,水,甲醇,水,40%,60%,5倍以上的总延迟体积，平衡柱子，置换流动相,延迟体积,死体积,1100结构框图,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,甲醇,水,40%,60%,10Stoptime,35Postime,=25,=10,Posttime,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,A,B,C,D,AIV,缓冲盐+有机相，盐析出会沉淀,缓冲盐+有机相，析出的盐被A路的水相稀释，避免沉淀的发生,四元比例阀,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,洗柱子的方法,流动相：甲醇（80%）+水（20%）样品：有机物直接用100%的甲醇洗柱子流动相：缓冲盐+甲醇样品：有机物洗盐：水（100%）水（90%）+甲醇（10%）洗有机物：甲醇（100%）,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,手动进样器,前视图,后视图,样品定量管,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,自动进样器,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,进样口,检测器,色谱图,色谱柱,溶剂,泵,混合器,HPLC结构框图,HPLC结构框图,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,初始,带宽,最终,带宽,A,A=涡流扩散多径扩散,仔细填充柱子,使用均一的载体,线速度,H,E,T,P,涡流扩散相,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,扩散,滞流的流动相,流动相,固定相,C,.,u,C=传质阻力,在低流速下可以降低传质阻力,使用小颗粒载体可以降低传质阻力,H,E,T,P,线速度,传质阻力,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,往复活塞泵(单向阀),GoldSeal,Sapphire,Insert,RubyBall,Spring,Insert,单向阀及往复活塞泵,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,减小流量脉冲并联柱塞泵,单向阀,P,A,B,A,B,Single,Piston,Delivery,柱塞A前进,柱塞B后退,Combined,Delivery,相消干扰,通常也需要阻尼器,增加了单向阀的使用数量,P,串联柱塞泵,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,单向阀,P,需要阻尼器,压缩因子补偿,脉冲阻尼器,并联柱塞泵,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,紫外可见检测器,根据Beer定律，通过检测池透射光的强度与溶质浓度成正比。,I0=入射光强度,I=透射光强度,A=吸光度,a=摩尔吸光系数,b=检测池长度,c=溶质浓度,I,I,C,b,o,DetectorCell,Log=A=abc,Beer定律,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,Instrumentation-Absorbance,VariableWavelength(UV/Visible),Light,Monochromator,flow,Source,Cell,Detector,Element,Slits,Mechanical,Grating,Detectors,VWD光路图,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,Instrumentation-Absorbance,PhotodiodeArray(UV/Visible),Light,Flow,Source,Cell,Photodiode,Lenses,Slits,Array,Holographic,Grating,Detectors,DAD光路图,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,单元泵工作原理,AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired),Damper,Seal,Piston,BallScrewDrive,MotorwithEncoder,Gear,OutletBallValve,ActiveInletValve,Purgevalve,单元泵工作原理,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,四元泵工作原理,AuthoringDivisionNameFileNameSecurityNotice(ifrequired),VacuumChamber,MCGV,AIV,OBV,Damper,PurgeValve,Waste,toinjectiondevice,fromsolventbottles,MCGV比例阀AIV主动阀OBV单向阀,四元泵工作原理,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,二元泵工作原理,Damper,Purgevalve,Mixer,A,B,Inletvalve,Outletvalve,Waste,Inletvalve,Outletvalve,二元泵工作原理,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,pure,impure,7.6,7.8,8.0,8.2,8.4,Time(min),200,400,Wavelength(nm),PurityMatch764,200,400,Wavelength(nm),PurityMatch999,Absorbance,Absorbance,纯度因子,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,六通阀之扎针,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,六通阀之装样,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,六通阀之进样,六通阀之进样,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,六通阀之小刻度进样一,六通阀之小刻度进样一,2020/5/23,安捷伦广州培训中心于保生,泵,色谱柱,定量环,废液,排空,六通阀之小刻度进样二,六通阀之小刻度进样二,2