高效液相色谱法同时测定食用油脂和膨化食品中的3种抗氧化剂

赵质创，等高效液相色谱法同时测定食用油脂和膨化食品中的3种抗氧化剂43高效液相色谱法同时测定食用油脂和膨化食品中的3种抗氧化剂赵质创郑晓冰朱虹汕头市质量计量监督检测所，汕头515041摘要建立同时测定食用油脂和膨化食品中3种抗氧化剂丁基羟基茴香醚BHA、二丁基羟基甲苯BHT、特丁基对苯二酚TBHQ的高效液相色谱法。样品经甲醇提取后，以甲醇一01甲酸溶液为流动相梯度洗脱，C8色谱柱分离，采用高效液相色谱法HPLC一二极管阵列检测器DAD，在检测波长280NM，参比波长360NM处定量检测。3种组分分离完全，线性关系良好，加标回收率为85106，测定结果的相对标准偏差不大于41N6。该方法检出限低，简单、快速、准确，可用于食用油脂和膨化食品中BHA、BHT和TBHQ的同时测定。关键词高效液相色谱食用油脂膨化食品BHABHTTBHQ抗氧化剂丁基羟基茴香醚BHA、二丁基羟基甲苯BHT、特丁基对苯二酚TBHQ作为油脂类抗氧化剂而广泛应用于食用油脂、膨化食品中。我国食品添加剂使用卫生标准中明确规定了上述3种抗氧化剂在食品中的限量标准，有些国家则不允许在食品中使用TBHQ。因此建立快速、同时检测抗氧化剂的方法具有是重大意义。目前，关于测定食品中抗氧化剂的方法研究很多，除了繁琐的紫外分光光度法和薄层层析法外，多采用气相、液相色谱法J，而3种抗氧化剂同时测定的方法不多，且大多数前处理要经过萃取、浓缩等步骤，操作繁琐，导致被测组分在前处理过程损失较大，回收率低。笔者采用HPLCDAD对食品中BHA、BHT和TBHQ进行同时测定，建立了食用油脂和膨化食品中对这3种抗氧化剂的快速准确检测方法，满足实际应用要求。1实验部分11主要仪器与试剂高效液相色谱仪AGILENT1200型，配二极管阵列检测器DAD，美国安捷伦公司；漩涡振荡器美国基因有限公司；高速离心机上海安亭科学仪器厂；超声波水浴器上海科导超声仪器有限公司；有机相过滤头13MM045M，上海安谱科学仪器有限公司；甲醇色谱纯；BHA、BHT、TBHQ标准品纯度分别为998、995、997，德国DREHRENSTORFER公司；中性氧化铝美国安捷伦公司；混合标准储备液分别称取BHA、BHT、TBHQ标准样品各100MG于100ML的容量瓶中，用甲醇溶解后并定容至刻度，配制成浓度均为1MGML的混合标准储备液，贮存于04冰箱中。12实验方法1色谱条件色谱柱DIAMONSILC18柱250MM46MM，5M；流动相流速10MLMIN；柱温40；进样量10LLL。设置两种配比的流动相进行试验1甲醇一01甲酸体积比为1288；2甲醇一01甲酸梯度淋洗，洗脱条件见表1。表1HPLC梯度洗脱条件体积分数时间MIN流动相A甲醇流动相B01甲酸O5050751O0O1151OO01350502250502标准曲线制备分别吸取混合标准储备液0、025、050、100、150、200ML于5支50ML比色管中，用甲醇定容至刻度，摇匀，配制成0、5、10、20、40、80GML系列混合标准溶液，于液相色谱仪进样分析，以各标准色谱峰保留时问定性，峰面积外标法定量，绘制标准曲线。3样品前处理膨化食品称取薯片200500G，粉碎后于25ML带刻度具塞比色管中，加入甲醇定容至25收稿日期201L一01一L7化学分析计量2011年，第2O卷，第2期ML，加塞混合后置于超声波水浴中处理15RAIN，取适量样液以6000RRAIN离心5RAIN，取上清液经045M滤膜过滤后，进样测定。食用油脂称取食用油样品5O0G，于10ML具塞比色管中，加入约6ML甲醇，涡旋震荡1RAIN，静置待分层后吸取上层甲醇溶液于25ML带刻度具塞比色管中，上述操作重复3次，将收集的上层甲醇溶液定容至25ML，加入约2G的中性氧化铝，振摇，静置后，取上清液经045IXM滤膜过滤后，进样测定。2结果与讨论21检测器的选择由于试样中杂峰较多，容易产生假阳性，试验采用DAD检测器对待测组分进行紫外190400R1TI全波长扫描，确定280NM为测定波长，360LQM为参比波长。为了筛除干扰物质，初步定性待测组分后进一步定量，提高了检测的灵敏度。22流动相的选择设置两种配比的流动相进行试验，来考察3种抗氧化剂的分离效果1甲醇一01甲酸体积比1288；2甲醇一01甲酸梯度淋洗方法。图1为采用甲醇一01甲酸体积比1288为流动相时的标准样品色谱图，图2为采用梯度淋洗时标准样品色谱图。BHATBQIJ0L23456789FRAIN图1甲醇一01甲酸体积比1288为流动相时标准样品色谱图BHABHT02468101214TRAIN图2甲醇一01甲酸梯度淋洗时标准样品色谱由图1、图2可见，采用梯度淋洗分离效果较好，3种组分在13RAIN内能很好地分离，分离度不低于15，峰纯度好且峰形对称。因此流动相采用甲醇一01甲酸梯度淋洗方法。23标准曲线配制含BHA、BHT和RRBIIQ3种抗氧化剂的混合标准系列溶液，各组分浓度均为0、5、10、20、40、80GML，在121设定的色谱条件下进样测定。对系列标准溶液所得的色谱峰面积和对应的浓度Y进行线性回归，绘制标准曲线。各组分的线性方程、线性范围、相关系数见表2。由此可见各组分线性关系良好，符合定量要求。表23种抗氧化剂线性方程线性范围化合物线性方程相关系数RIJ,GMLLBHAY77978X一3685808O099997BHTV5157O17877O80099999TBHQY61914X25021O8009998924精密度、加标回收率和检出限在121色谱条件下对空白薯片和食用油两种样品进行3水平添加回收试验，每个添加水平取6个平行样，以3倍信噪比计算各组分的检出限。回收试验结果及检出限见表3、表4。表3薯片加标回收率、精密度及检出限N6加标量测得量检出限化合物回收率RSDGKG一GKG一GKG一0O10009229235BHA0050045369031O501001017410229O010009169227BHT0050049489914O501001056310636O0L0OO8748732TBHQOO500464893341001O010276L0341表4食用油加标回收率、精密度及检出限N6加标量测得量检出限化合物回收率RSDGKG一GKG一。MGKG一0O1OOO8478522BHAO050O5103102390501O0096759721O01000923923OBHT0O5OO514610318O501001018310212O0L0OO9149136TBHQ0O5004456893110O100096569729由表3、表4可知，加标回收率为85106，相对标准偏差为1241，BHA、BHT、TBHQ各组分检出限分别为05、05、10MGKG。该方法回收率较高，精密度较好，满足实际样品检测要求。3结论1由于测定组分中，TBHQ与BHA极性相近，需选择优化流动相配比且使用梯度洗脱才能使各组分既快又好地分离。采用以甲醇一01甲酸的梯赵质创，等高效液相色谱法同时测定食用油脂和膨化食品中的3种抗氧化剂45度洗脱方式，BHA、BHT和TBHQ具有良好的分离度，而且峰形基本一致，所有峰的保留时间重现性好。2采用甲醇作为提取溶剂，与文献2和文献6采用的石油醚、乙腈等提取溶剂的前处理方法相对简单，回收率高。BHA、BHT和TBHQ最新测定标准NYT16022008采用甲醇一1乙酸作为流动相J，其中1乙酸的PH值小于2，超过一般色谱柱的酸性承受范围。色谱柱长时间在强酸流动相中易导致色谱柱上键合的基团水解，使填充基质硅胶卷曲，影响色谱柱的柱效。本研究采用甲醇一01甲酸溶液作为流动相，相比标准更有利于色谱柱的稳定，延长色谱柱的使用寿命。3精密度、回收率和检出限试验表明，该检测方法灵敏度、精密度和准确度均较高，符合检测要求。该方法同时测定食品中常见3种抗氧化剂，提取步骤简便，易操作，适用于日常食品中BHA、BHT和TBHQ的同时测定。参考文献1GB27602007食品添加剂使用卫生标准S2GBT233732009食品中抗氧化剂丁基羟基茴香醚BHA、二丁基羟基甲苯BHT、特丁基对苯二酚TBHQ的测定S3NYT16022008植物油中叔丁基羟基茴香醚BHA、2，6一二叔丁基对甲酚BHT和特丁基对苯二酚TBHQ的测定高效液相色谱法S4桂学琴液相色谱法测定食品中抗氧化剂特丁基对苯二酚J安徽农业科学，2007，356157715845仲岳桐高效液相色谱法测定植物油中特丁基对苯二酚J中国食品卫生杂志，1997，9211136陈毓芳，奚星林，李宪华高效液相色谱法同时测定食用油脂中叔丁基对苯二酚和叔丁基对羟基茴香醚J中国卫生检验杂志，2007，177116311647余涛，叶坚高效液相色谱同时测定食品中BHA、BHT、TBHQ方法的研究J中国卫生检验杂志，2007，1712213621372155SIMULTANEOUSDETERMINATIONOF3ANTIOXIDANTSINEDIBLEGREASEANDPUFFEDFOODBYHIGHPERFORMANCELIQUIDCHROMATOGRAPHYZHAOZHICHUANG，ZHENGXIAOBING，ZHUHONGSHANTOUSUPERVISIONTESTINGINSTITUTEOFQUALITYANDMETROTOGY，SHANTOU510541，CHINAABSTRACTAHPLCMETHODWASDEVELOPEDFORTHESIMULTANEOUSDETERMINATIONOF3ANTIOXIDANTSBHA，BHT，TBHQINEDIBLEGREASEANDPUFFEDFOODTHESAMPLEWASEXTRACTEDWITHMETHANOL，SEPARATEDINC18COLUMNWITHMETHANOL一01FORMICACIDBUFFERASMOBILEPHASEANDDETERMINEDWITHHPLCULTRAVIOLETDETECTORAT280NMACOMPLETESEPARATIONAMONGTHE3ANTIOXIDANTSWASACHIEVEDTHERECOVERYWAS85一106WITHRSDOF12一41N6THEMETHODISPRECISEANDCONVENIENTFORTHESIMUHANEOHSDETERMINATIONOF3ANTIOXIDANTSINEDIBLEGREASEANDPUFFEDFOODKEYWORDSHPIC，EDIBLEGREASE，PUFFEDFOOD，BHA，BHT，TBHQ，ANTIOXIDANT2011年实验室资质认定评审工作要求为了进一步提升实验室资质认定国家计量认证评审行业实验室提前6个月将申请材料上报，并至少于实验室证活动的质量和效率，规范行政审批流程，有关2011年实验室书到期前3个月安排现场评审。资质认定国家计量认证评审工作要求如下。2首次申请资质认定国家计量认证的实验室不列1各行业评审组应认真组织，提高工作质量和效率，切人评审计划。应按照行政审批程序的要求，到国家质检总局实做好以下几方面工作行政审批大厅的资质认定受理窗口提交申请。认真组织评审，确保评审工作质量。现场评审应考虑3涉及食品检验的实验室，自2011年5月1日起，需评审员的专业，评审员的专业应覆盖实验室所申请的能力；按照食品检验机构资质认定评审准则的要求进行评审，请加强对授权签字人的考核，考核内容应当全面翔实。有关行业评审组通知相关实验室修订完善质量手册和程序提高工作效率，及时上报材料。认真完成申请材料的文件，做好迎审准备。初审工作，