木瓜皮中齐墩果酸的提取及含量测定

工艺技术晨品雨量尊2005，VO126,NO9365木瓜皮中齐墩果酸的提取及含量测定刘汉兰，唐静，王志芳，张鹏，赵蔚，鲁菲菲。，柳洁。1华中农业大学理学院，湖北武汉430070；2武汉大学化学学院，湖北武汉430072摘要本文应用回流提取法、索式提取法、冷浸提取法和超声波提取法对木瓜中的齐墩果酸0A进行了分离提取，并采用高效液相色谱法HPLC测定其含量。实验结果表明采用超声波提取法提取木瓜中的齐墩果酸提取效率最高采用HPLC法测定木瓜中的齐墩果酸0A的含量，具有操作简便、快速、灵敏等特点。关键词木瓜齐墩果酸；超声波；HPLCEXTRACTIONANDDETERMINATIONOLEANOLICACIDFROMCHINESEQUINCELIUHANLAN。，TANGJING。，WANGZHIFANG。，ZHANGPENG。，ZHAOWEI，LUFEIFEI。，LIUJIE。1COLLEGEOFSCIENCE，HUAZHONGAGRICULTURALUNIVERSITY，WUHAN430070，CHINA；2COLLEGEOFCHEMISTRY，WUHANUNIVERSITY，WUHAN430072，CHINAABSTRACTAMETHODWASDEVELOPEDFORTHEEXTRACTIONANDDETERMINATIONOFOLEANOLICACIDFROMCHINESEQUINCETHEPERFORMANCESOFREFLUXEXTRACTION，SOXHIETEXACTION，LEACHINGEXTRACTIONANDULTRASONICEXTRACTIONUEWEREINVESTIGATEDTHERESULTSOBTAINEDBYHPLCINDICATEDTHATUEHADTHEHIGHESTEXTRACTIONEFFICIENCYTHEPROPOSEDMETHODWASCHARECTERIZEDASSIMPFICITY，FASTANDSENSITIVITYKEYWORDSCHINESEQUINCEOLEANOLICACIDULTRASONICHPLC中图分类号TS2011文献标识码A文章编号10026630200509036503木瓜素有“百益果王”之称，具有食用、药用和观赏的多种用途。木瓜最早载于尔雅，为传统的中药，具有极高的药用价值。中医认为木瓜有舒筋活络，健脾开胃，舒肝止痛，祛风除湿之效，可用于预防和治疗风湿病、霍乱、痢疾、肠炎、脚气病及维生素缺乏症等，特别是治疗腰膝疼痛、脚气水肿功效显著11。齐墩果酸分子式为C3OH4SO3为五环三萜类化合物，它是木瓜的主要药效成分之一，广泛分布于自然界各种绿色植物中，以单体或皂苷形式存在。齐墩果酸为白色针状结晶，无味，不溶于水，可溶于甲醇、乙醇、氯仿、乙醚、丙酮等有机溶剂。据文献报道，齐墩果酸具有消炎、增强免疫功能、降转氨酶、降浊，改善病状和肝功能，纠正体内异常蛋白代谢，防止肝硬化、降血脂、降血糖等多方面的临床药理作用，它对急性黄疸型肝炎和慢性病毒性肝炎疗效显著，是国内研制的保肝、治疗肝炎的有效药物之一。此外，齐墩果酸还具有强心、利尿和抑制S180瘤株生长等作用，其毒性小，副作用低，安全范围大21。由于齐墩果酸的结构比较复杂，人工合成步骤较为繁琐，目前仍主要依赖于从植物中提取。因此，从木瓜中提取齐墩果酸对于开发木瓜的药用价值，及其农副产品的综合利用具有重要的意义。本研究采用回流提取法、索氏提取法、冷浸提取法和超声波提取等方法从木瓜中提取齐墩果酸，并用HPLC法测定其含量。该方法操作简便、快速、精确度高。为木瓜的进一步开发利用和齐墩果酸快速检测提供重要的参考依据。1材料与方法11仪器设备与条件111仪器高效液相色谱仪及液相色谱工作站AGILENT1100美国AGILENT科技有限公司超声波清洗器KQ一50B型昆山市超声波仪器有限公司微孔滤膜045LAITI上海半岛实业有限公司净化器材厂；电子分析天平AL204METTLERTOLEDO仪器上海有限公司。收稿日期20050715作者简介刘汉兰1958一，女，教授，研究方向为有机合成与天然产物的提取。维普资讯HTTP/WWWCQVIPCOM3662005,VOL26,NO9厦品膏I篁工艺技术112色谱条件色谱柱ZORBAXCLIPSEXPBCL8柱5M，150MM46MM；流动相甲醇水体积比为8020；流速1MLMIN；柱温25；检测波长210NM。12试剂与材料甲醇色谱纯、分析纯上海振兴化工一厂；95乙醇分析纯天津东丽天大化学试剂厂；氯仿分析纯上海化学试剂有限公司；齐墩果酸标准品98陕西慧科植物开发有限公司；木瓜粉湖北长阳土家族自治县科技开发中心；二次蒸馏水。13实验方法131样品处理流程木瓜粉一提取一分离一甲醇溶解定容一HPLC检测132提取方法回流提取法称取木瓜粉25G，分别用100、80、70ML95乙醇回流提取，时间依次为4、3、2H；蒸馏提取液，回收乙醇，采用碱溶酸沉法分离提纯，得到的齐墩果酸固体用甲醇溶解定容至250MLT31。索氏提取法称取木瓜粉10G，用95乙醇在索氏提取器中提取，至虹吸下溶液近无色约8H；提取液蒸馏，回收乙醇，得浸膏状物质；用1MOLLNAOH溶液煮40MIN，趁热过滤，重复3次，合并滤液；10H2SO4溶液调PH1，沸水浴4H，氯仿萃取；蒸馏回收氯仿，得固体齐墩果酸用甲醇溶解定容至100MLT41。冷浸提取法称取木瓜粉25G，用95乙醇150ML浸提一周，再用100ML95乙醇浸提5D，合并浸提液；蒸馏回收乙醇，挥发溶剂；将所得浸膏状物质分别用水和氯仿洗涤，合并洗涤液，去水层，有机层再加入重蒸水洗涤6次，去水层，蒸馏回收氯仿，所得齐墩果酸用甲醇溶解定容至250M151。超声波提取称取木瓜粉10G，置于烧杯中，加95乙醇100ML，混合；在超声清洗器中提取4H；蒸馏回收溶剂，所得浸膏状物质先后用水和氯仿洗涤，合并洗涤液，去水层，有机层用水洗涤6次，去水层，蒸馏氯仿，所得齐墩果酸用甲醇溶解并定容至100M16】。1L33HPLC测定F用外标法进行定量分析对照品与样品超声波提取液的HPLC谱图见图1。2结果与讨论21不同提取方法的比较本实验用乙醇做溶剂，采用112的色谱条件进行测定。测得不同提取方法下齐墩果酸含量的响应值并由峰面积计算出不同方法所提取的齐墩果酸含量，结果表明见表1，采用超声波提取法的提取效率最高，测3OO2502OO1501OO50012OO1OOO8OO60O4002OO0012345TIMEMINA对照品图1对照品A和样品B色谱图FIG1CHROMATOGRAMSOFREFERENCESUBSTANCEAANDSAMPLEB表1不同提取方法所测齐墩果酸的含量MGGTABLE1THECONTENTSOFOABYDIFFERENTEXTRACTIONMETHODS得含量为2874MGG。22线性关系的考察以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标作标准曲线，如图2所示。其线性回归方程为A19991C30324，R09923，S19991。齐墩果酸的浓度在14202272MGL范围内与峰面积成良好的线性关系。掰83450I435000委3150310030503000浓度MEL图2齐墩果酸标准曲线FIG2THECALIBRATIONCURVEOFOLEANOLLCACR23精密度试验对同一样品连续进样所测的结果，经计算其标准偏差为000955N6，变异系数为15，可见仪器精密度，L重维普资讯HTTP/WWWCQVIPCOM工艺技术良品雨LIL莹2005,VO126,NO9367良好。24检出限试验根据最小检出量的定义，本方法的最小检出量为00710MGL。25加标回收试验精密称取已知含量的木瓜粉末，添加一定量的齐墩果酸对照品，按132项制备样品溶液，在上述色谱条件下进行测定，结果回收率在9771024之间，平均回收率为1002，测定结果见表2。表2回收率试验结果3结论31比较了回流提取、索氏提取、冷浸提取和超声波提取等四种提取方法，其中超声波提取法提出率较高、所需时间短、溶剂用量少。32本研究通过峰面积一外标法对齐墩果酸进行定量分析。以甲醇水体积比为8020为流动相，在210NM下检测齐墩果酸，其标准偏差为000955，变异系数为15，线性相关系数为09923，加样回收率为9771024。该方法操作简单，实用，结果重现性好，是比较理想的检测方法。TABLE2TH。陀。“L。0F。RY。3参考文献26样品分析采用超声波提取法，对木瓜皮中齐墩果酸进行提取，并在上述IIPLC条件进行测定，测得平均含量为2874MGGN6。孙燕齐墩果酸的促进免疫作用J中国临床药理学杂志，1988，126唐春红木瓜营养保健作用研究动态J】天然产物研究与开发，2000，12F41012段纯厚，付秀敏，张艳玲用正交实验法优选辽东艳木提取齐墩果酸工艺研究J】_中药材，1994，17130唐春红，项昭保，石铁松，等木瓜中齐墩果酸的提取工艺研究J】_食品工业科技，2000，2141012唐峰柏，余克健，高加其，等齐墩果酸提取工艺FJ】中草药，1989，2031718郑敏燕藏药椭圆叶花锚中齐墩果酸含量的测定FJ1青海大学学报自然科学版，2003，2151718，Q、P我国专家认为油菜是生物柴油的理想原料生物柴油是目前全球解决能源危机的方向之一，一些发达国家已将生物柴油投入市场使用。我国专家经过多年研究发现，油菜是我国发展生物柴油理想的原料。生物柴油是一类脂肪酸甲脂，可通过植物油脂脱甘油后经过甲脂化获得。中国农业科学院油料研究所所长、博士生导师王汉中研究员说，他们经过多年的比较研究发现，油菜是我国发展生物柴油最好的原料。目前我国发展生物柴油的瓶颈是原料，即原料的量和价格。尽管许多木本油料都可以加工为生物柴油，但规模有限。大豆、花生等草本油料也可作为生物柴油的原料，但它们与我国主要的粮食作物如水稻、玉米等争地，扩产潜力有限。王汉中说，作为生物柴油的理想原料，油菜具有独特优势。一是油菜适应范围广。黄淮流域、西北、东北等广大地区都适宜油菜生长，我国适宜种油菜区域的耕地面积在15亿亩以上，仅长江流域和黄淮地区适宜种油菜的冬闲田就有3亿亩以上；二是菜油的化学组成与柴油很相近；三是种油菜的土地不与主要粮食争地，可较好地协调我国能源安全和粮食安全