肠道病毒的分类与检测

肠道病毒的分类与检测摘要肠道病毒可引起多种感染，且发病表现为综合征，一种综合征由不同的病毒引起，同一病毒引起不同的综合征是肠道病毒感染的普遍现象。 目前除脊髓灰质炎外尚无其他可预防的疫苗，是目前严重影响人类健康的重要病原体之一。 肠道病毒主要通过粪便和呼吸道感染，因此需要准确及时地诊断肠道病毒感染。 肠道病毒(Enterovirus )是一种小型RNA病毒科，有67个血清型。 人肠道病毒包括脊髓灰质炎病毒(Poliovirus )、柯萨奇病毒(Coxsackievirus )、埃克索病毒(Echo )、甲型肝炎病毒和新型病毒。 目前常用的肠道病毒检测方法有病毒分离培养、血清学鉴定和分子生物学方法，近年来一些新方法也加快和正确地检测肠道病毒。关键词肠道病毒/诊断/分类1肠道病毒形态特征肠道病毒球形，无复膜，核壳20的身体立体对称。 肠病毒属病毒粒子在酸性pH下稳定，在病毒制品中可以观察到空壳，有时可以观察到少量(1% )的重粒子。 基因组编码单个VPg蛋白，但l蛋白不编码。 不同肠道病毒与肠道病毒和鼻病毒之间的核苷酸序列整体一致性大于50%，肠道病毒不同株之间的核苷酸序列整体一致性大于75%。 病毒主要复制到肠道细胞，也复制到神经、肌肉和其他组织。 大多数病毒感染无明显症状，病毒感染的临床症状为轻微脑膜炎、脑炎、肌炎、心肌炎和结缔组织炎。 耐酸和脂溶剂不易被胃酸和胆汁失活，在污水和粪便中生存数个月。2肠道病毒的分类2.1脊髓灰质炎病毒该病典型临床经历6个阶段(潜伏期、前驱期、瘫痪前期、瘫痪期、恢复期和残留瘫痪)。 感染期间，患者出现低热和咽痛、咳嗽、腹泻、不安、困倦、多汗、脑膜刺激症、肌肉痛、皮肤感觉过敏、突然急性松弛性麻痹等症状，多留下终身障碍。 脊髓灰质炎病毒通过患者的粪便和口腔分泌物感染。 人类是脊髓灰质炎病毒的唯一宿主，很少长期携带病毒(例如，没有症状，但持续排出病毒6个月以上)。 服用脊髓灰质炎疫苗(现在我国使用I、II、III型混合糖丸疫苗，由减毒脊髓灰质炎病毒制成)是预防本病的主要措施。 根除脊髓灰质炎最根本的手段是提高人们的免疫水平，阻断脊髓灰质炎野毒株向人们的传播。脊髓灰质炎病毒分为三个血清型两种不同的抗原： d抗原和c抗原。 D(dense，致密)抗原：具有病毒RNA，是完整的病毒粒子，不含N(native )抗原的C(coreless，无芯)抗原： RNA，d颗粒在56 失活，是释放RNA后形成的无核酸涂层，因此也称为H(heated )抗原传播方式主要为粪口传播，疾病为小儿麻痹症。 中毒机制：粪口途径传播主要是上呼吸道、喉、肠道入侵入口，首先在局部黏膜和淋巴结形成增殖入血，第一次病毒血症具有受体的靶组织(脊髓前角细胞、背根神经节细胞、运动神经细胞等)，再增殖靶细胞形成第二次病毒血症和临床症状。检查方法首先是微生物学检查，检查方法：病毒分离检查：取咽漱液、粪便等样品，细胞培养中出现CPE的血清学诊断：中和试验病毒核酸测定。 二是预防：口服减毒疫苗或注射灭活疫苗2.2浪涌病毒柯萨奇病毒2对小鼠敏感，根据感染小鼠的病灶，柯萨奇病毒可分为a、b两组。 a组有23型病毒，b组有6型病毒。 a组病毒：诱发新生大鼠弥漫性骨肌炎，引起松弛性麻痹。 b组病毒：诱发新生大鼠局灶性骨肌炎，引起痉挛性麻痹。 通过型特异抗原，经过了中和试验。 Elisa法等可鉴定各类型。 所有b组及a组的第9型均有共同的组特异抗原，b组内病毒间有交叉反应，但a组病毒没有共同的组特异抗原。 a组某些类型的特异性抗原在37下可引起人o型红细胞聚集反应。柯萨奇病毒a型感染潜伏期为13天，上呼吸道感染、发病急，流鼻涕、咳嗽、咽痛、发热，全身不适。 典型症状为疱疹性咽峡炎，鼻咽部、会厌、舌和软腭部出现小疱疹，黏膜红肿，淋巴滤泡增生渗出，扁桃体肿胀，伴吞咽困难，食欲下降。 调查(R0binson，1958 )显示，口咽疱疹伴皮疹的急性热病中，79%是柯萨克型病毒。检查方法：1.可确诊患者体液(脑脊液、疱疹液、心包液、胸水等)分离病毒。 2 )恢复期血清出现抗体，血清抗体二部分的有效价高出4倍以上。2.3辅助程序回声病毒(echo-viruses )是肠性细胞致病性人孤独型病毒(entericcytopatho-genichumanorphanvirus )。 仅对人类有感染性，夏、秋多发，多为隐性感染。 ECHO病毒分为30种以上(1-34类型中8、10、28、34类型已经分类为其他病毒)。 各种致病力和致病类型也不同，如ECHO6、19型致病力较强，与柯萨奇病毒b型相似，可引起急性胸痛和心肌病。 主要通过口粪途径传播，也可从咽分泌物中排除病毒，通过呼吸器传播。 病毒进入人体在咽喉机肠黏膜细胞增殖后侵入血流，形成病毒血症。ECHO病毒感染的临床表现与风疹相似，第一妊娠期感染累及胎儿，但很少引起畸形。 发病年龄2.533岁，常见症状为上呼吸道感染、发热、非化脓性脑膜炎和皮疹。 皮疹为斑丘疹或麻疹样皮疹，持续13天自然消退。 可以从大便、咽分泌物和脑脊液中分离出病毒。防治：可可病毒疹没有特别的治疗方法。 皮疹接受对症治疗。 敏感婴幼儿可注射丙球蛋白36ml，脊髓灰质炎疫苗干扰本病毒感染。 echo-3、4、6、9、11型解毒疫苗正在开发中。 目前尚无特效治疗，主要采用对症治疗和支持治疗。 静脉注射人血丙种球蛋白可能给新生儿带来严重感染，婴幼儿腹泻也可能引起脱水和酸中毒，必须适当输液治疗。2.4型肝炎病毒临床表现为急性发病，主要表现为乏力、食欲减退、肝功能异常，部分病例出现黄疸。 甲型肝炎病毒主要通过粪口感染，感染源多为患者。 甲型肝炎的潜伏期为15-45天，病毒从患者色氨酸升高的56天前就存在于患者的血液和粪便中。 发病23周后，随着血清中特异性抗体的产生，血液和粪便的传染性也消失了。 由感染者粪便排出，不同途径污染食物和工具，通过口侵入人体。 这就是甲型肝炎病毒的传播方式。2.5新型病毒新型病毒是指1969年以后鉴定的脊髓灰质炎病毒、柯萨奇病毒、可卡因病毒以外的一些小型RNA病毒，主要包括68-71四种血清类型。 其中68型分为下呼吸道感染者，69型分为健康肛拭器，70型分为急性出血性结膜炎患者，71型分为无菌性脑膜炎患者粪便和脑脊液。 EV70主要引起流行性出血性结膜炎的EV71感染主要引起手足口病，引起中枢神经系统和脊髓灰质炎样麻痹等多种神经系统疾病。3检测方法3.1病毒分离培养利用组织培养技术从感染部位和感染源分离病毒，鉴定其特异性血清型是诊断病毒性疾病的标准。 病人标本是采集得最好的标本。 病毒培养对抗生素治疗和缩短住院时间具有积极作用，但由于病毒的分离鉴定繁琐费时，一般在一周内可观察到细胞病理反应，且大多数肠道病毒不能细胞培养，或者可培养但无细胞病理效应。3.2血清学鉴定2分离病毒，利用组合血清中和试验是病毒定型的重要方法。 肠道病毒的血清学鉴定多采用血清组合。 该方法检查不适用于早期诊断，可作为回顾性诊断，且肠道病毒血清型多，临床应用检查价值有限，常被流行病学采用。3.3分子生物学诊断3.3.1 PCR技术由于各种病毒具有共同的基因组序列，血清型基本上都能检测出来。 PCR检测材料用量少、快速、灵敏度高、特异性强，可通过设计不同的引物进行病毒分类，检测相当广泛的肠道病毒血清型。 吕亦愚3等人发明了用肠道病毒核酸荧光定量RT-PCR的试剂盒和检测方法，灵敏度高，非常适合早期诊断手足口病等肠道病毒感染致突发疫情的实验室，该方法具有较高的特异性。3.3.2核酸杂交技术4由于在EV各类型间存在序列高的保守区，因此对该保守区利用共同的互补氧核糖核酸(cDNA )核酸探针可以进行广泛的EV诊断。3.3其他新办法2000年，Notomi等人开发了一种新的恒温核酸扩增法，即环介导等温扩增法。 5该方法利用链取代DNA聚合(BstDNApolymerase )和两组特殊引物，特异性地识别靶序列上的6个独立区域，使反应在铸模两端的引物结合部循环，引物在等温条件下(65左右)与铸模结合，进行链取代扩增反应RT-LAMP测定法在满足特异性的同时，灵敏度达到普通rt-PCR法的10-100倍，或者达到荧光rt-PCR法的1/10或其同等水平。优点： (1)高特异性(2)高灵敏度(3)鉴定简便(4)操作简单(5)快速、效率：整个扩增反应只需1-1.5小时5 .参考文献1滕岗、张曦上海市疾病预防控制中心微生物检验室肠道病毒检