脂肪鉴定 脂类细胞化学(苏丹Ⅲ染色法) 实验报告

细胞生物学实验报告脂质细胞化学(苏丹染色)1.实验目的：用苏丹染液染色小鼠肠系膜细胞，观察细胞颜色，掌握苏丹染液染色法。实验用品：(1)仪器和仪器：显微镜、幻灯片、封面幻灯片、镊子、手术剪刀、解剖板、橡胶头滴管(2)实验药物：蒸馏水、甲醛钙溶液、70%乙醇水溶液、苏丹染料溶液(3)实验材料：鼠标实验原理：(1)脂肪酸和酒精作用产生的酯及其衍生物统称为脂质，这是一类通常不溶于水，溶于脂溶性溶剂的化合物。地质是身体内的一种有机大分子物质，其范围很广，一般可分为地质和脂肪两类。脂质有三种：磷脂、胆固醇和其酯(cholesterol and cholesterol ester)。油可以分为常温液态油和常温固态脂肪。这几种地质的化学结构大不相同，生理功能也各不相同。共同的物理特性不溶于水，溶于有机溶剂，在水中相互聚集，形成内部疏水性的集合体。(2)固定细胞时，一般使用脂溶性固定液。但是当识别物质是脂肪的时候，脂溶性固定液溶解了脂肪，在显微镜下观察切片，如果没有观察染色的脂肪，只能看到脂肪细胞上有一个大洞。最好的固定材料是甲醛固定溶液。为了医学保存尸体，使用福尔马林的情况是40%的甲醛水溶液，这次实验中使用了甲醛钙溶液。(3)光学显微镜的切片大部分是石蜡切片。脂溶性溶剂在焊接石蜡时需要，脂溶性溶剂可溶解细胞内脂肪，因此石蜡切片不能用于此次实验。但是锇酸固定脂肪不能溶于绝对乙醇、二甲苯等有机溶剂，可以使用石蜡切片。(4)制作切片的方法有冷冻切片、明胶嵌入冷冻切片，这次实验中使用了操作简单的包装方法。(5)脂质染色的原理是染料溶于脂质。选择溶剂时，要注意不要溶解溶剂必须溶解的染料和脂质。4.实验阶段：(1)用断头方法处死老鼠，放在解剖盘里。切开腹腔，用镊子抬起小肠，贴在肠系膜上。用剪刀将盖幻灯片和贴在上面的肠系膜切割用降低甲醛钙的载体幻灯片固定15分钟，(2)在点火源和滑道之间冲洗，继续用滴管拖动液体，去除固定液。(3)用70%的乙醇水溶液代替蒸馏水，重复和清洗之前的步骤。(4)苏丹染料染色30分钟s(5)染色完成后，用吸水纸吸出额外的染料溶液。(。擦盖幻灯片周围和表面，用显微镜观察。实验结果：脂肪细胞被苏丹染液染成朱红色。细胞周围充满脂肪颗粒，呈圆形，呈橙色。用10*4显微镜观察：用10*10显微镜观察：10*40显微镜观察：6.分析和讨论(1)结果分析：脂肪细胞含有大量脂肪，苏丹染色液染成橙色，使整个细胞变成橙色。一些脂肪细胞破裂，使脂肪溢出，使其看起来像橙色的球体。(2)注意事项用盖天球贴肠系膜：老鼠的肠系膜很小，要提前缩小盖蒂的大小。您可以用剪刀剪或用手剪，使最后一张封面幻灯片成为正方形。肠系膜选择：肠系膜是包裹小肠的非常细的薄膜，这种膜的大部分没有脂肪细胞。但是肠系膜血管周围有起保护作用的脂肪细胞。因此，材料选择要注意包含血管的肠系膜选择。但是血管周围的脂肪细胞很厚，肉眼可见白色。这种地方不能观测，选择材料时要注意材料的透明度。染色工艺：染色为30分钟s，在此过程中染料的水蒸发的可能性很大，因此染色过程中要随时将染料滴在幻灯片上。观察：将物镜变为10-40倍时，考虑到物镜变长，镜面可以擦在小鼠小肠上。观察时，首先取出小肠，只能观察肠系膜。观察：观察时血管变红，流血时不清洁，所以下一次实验要注意(3)工作：识别糖莫莉什反应：这是识别糖分最常用的颜色反应。其原理是糖类在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物可以与-萘酚作用形成红紫色复合物。糖溶液和浓硫酸两个液面之间产生红色紫色环，因此也称为紫色环反应。-萘酚也可以替代麝香草酚或其他酚类化合物，麝香草酚溶液的灵敏度等于-萘酚。除了糖分外，多种糠醛衍生物、葡萄糖酸、丙酮、甲酸、乳酸等也可能有近似的阳性反应。因此，消极的反应证明了碳水化合物的存在。阳性反应可以解释糖的存在可能性。这种反应不能确认淀粉、纤维素等多糖。Benedict反应：banshi试剂是对菲林试剂(含Cu2的碱性溶液)的改进，成为可氧化游离醛基或酮基糖类，本身可用于测定还原糖存在的砖红色或黄色Cu2O。它以柠檬酸为Cu2络合剂，碱性比菲林试剂弱，灵敏度好，扰动因子少，在实用上有更多的优点。比利亚反应(甲基间苯二酚反应):将戊烷和浓盐酸加热，形成糠醛，在Fe3存在的条件下，与甲基间苯二酚(地衣酚)缩合，形成深蓝色沉淀物(这些沉淀物溶解在正丁醇中)。己烷也能引起反应，产生灰绿色或褐色的沉淀物。莫莉什反应：这是识别糖分最常用的颜色反应。其原理是糖类在浓酸作用下形成的糠醛及其衍生物可以与-萘酚作用形成红紫色复合物。糖溶液和浓硫酸两个液面之间产生红色紫色环，因此也称为紫色环反应。-萘酚也可以替代麝香草酚或其他酚类化合物，麝香草酚溶液的灵敏度等于-萘酚。除了糖分外，多种糠醛衍生物、葡萄糖酸、丙酮、甲酸、乳酸等也可能有近似的阳性反应。因此，消极的反应证明了碳水化合物的存在。阳性反应可以解释糖的存在可能性。Seliwanoff反应：以相同的原理作用糖和强酸后，与间苯二酚反应，如果是酮糖，则是亮红色，如果是醛糖，则显示淡红色，这样就可以区分酮糖和醛糖。蒽反应：碳水化合物被浓酸水解，脱水生成的糠醛及其衍生物与蒽(10-酮-9，10-二氢蒽)反应，产生蓝绿色复合物。Barfoed test:测试单糖的测试。煮5毫升Barfoed试剂，保持沸腾状态，慢慢添加检查物。单糖还原比混合物，形成红色沉淀物；双糖也可以还原，但反应很慢，可以与电子区分。确认脂肪：脂肪可以确认