病毒感染检查方法和防治原则.pptx

第26章病毒感染的检查方法及防治原则,第一节病毒感染的检测方法,一、标本的采集与运送：,(1)急性期标本；(2)根据感染性质取不同的标本；(3)标本置于50甘油转运液中；(4)冷藏快运。（5）有杂菌标本应用高浓度抗生素处理,2.病毒的分离培养,动物接种,鸡胚培养,细胞培养,原代细胞培养,二倍体细胞株,传代细胞系,绒毛尿囊膜痘病毒特异性损伤,陈灵芝微生物教研室2009-3,收获尿囊液,流感病毒分离培养的最好方法是鸡胚接种。接种羊膜腔（初次分离），尿囊腔（传代）。然后取羊水或尿囊液做血凝和血凝抑制试验鉴定。血凝试验：羊水/尿囊液+鸡RBC红细胞凝集表明有病毒存在和增殖,正常鸡红细胞,凝集红细胞,血凝抑制实验,(1)原代细胞培养动物或人组织直接用蛋白酶消化所得的细胞经体外培养后可贴壁或悬浮生长；(2)二倍体细胞株在体外连续培养5060代仍保持其二倍染色体数目的单型细胞。,为生产人用疫苗的首选细胞株。,(3)传代细胞系能在体外连续传代、来自癌细胞或发生自发转化、突变的原代细胞或二倍体细胞株。,原代细胞(primarycell)培养,新鲜组织(动物/鸡胚/人胚组织)剪碎/胰酶消化单个细胞培养液单层细胞(原代细胞)胰酶次代细胞,常用细胞株:人胚肾细胞人胚肺细胞人羊膜细胞猴肾细胞常用于VSV、HSV、麻疹病毒的培养,3.病毒在细胞内增殖的检测与鉴定,(1)细胞病变效应：cytopathiceffect，CPE病毒在细胞内增殖后，引起的形态学变化，如细胞肿胀、变圆、死亡，数个细胞融合成多核巨细胞或细胞聚集成葡萄串状，细胞溶解或脱落等可在普通光镜下看到，这种由病毒在细胞内的增殖所引起的特有细胞病变，称为CPE。,NegriBody,*包涵体形成的观察,(2)红细胞吸附：某些病毒感染的宿主细胞能吸附脊椎动物的红细胞而发生血吸现象。,(3)干扰现象：,(4)病毒蛋白、核酸的检测：,(5)细胞培养液的pH改变,FigHSV荧光抗体法查抗原,4.病毒数量与感染性的测定,蚀斑测定plaqueformingunit/PFU,50%组织细胞感染量50%tissuecultureinfectivedoseTCID50,TCID(50%tissuecultureinfectivedose):在半数细胞培养板孔或试管内引起细胞病变（CPE）的病毒量空斑试验：在细胞培养表面覆盖一层半固体物质使细胞病变形成空斑,三、病毒感染的血清学诊断,1、中和试验：流行病学调查中和抗体病毒失去感染性2、补体结合试验：近期感染的诊断3、血凝抑制试验：诊断（IFV、乙脑V）、鉴定、流行病学调查4、凝胶免疫扩散试验,检测机体的体液免疫应答：,1、单份血清检测：,IgM,IgG,2、双份血清检测：,IgG,恢复期/早期4:1,FigIdentificationofspecificIgMantibodybycaptureandELISA.,（四）检测病毒核酸：包括核酸分子杂交技术和PCR；如HBV、HCV、HSV、CMV等的检测。,PCRcycler,第二节病毒感染的防治原则,一、抗病毒治疗,病毒感染的最有效的方法是免疫预防,至今尚无十分理想药物1.抗病毒药物或制剂核苷类药物阻抑子代病毒结构基因的合成与表达。病毒蛋白酶的抑制剂阻止大分子病毒蛋白的降解。其他：IFN、TNF、IL-2、中草药等抑制病毒复制。抗病毒基因治疗：asODN、asON、ribozyme策略：作用于病毒复制周期的不同环节2.免疫制剂,吸附,拟受体制剂,拟配体制剂,中和抗体,穿入,金刚烷胺,脱壳,生物合成,装配、释放,核苷类似物,干扰素,反义技术等,FigA)HIVattachtoaCD4receptor.B)Asolublesyntheticversionofthereceptorcanpreventattachmentofthevirus.,mRNA,Protein,二、病毒感染的预防,人为地将疫苗（vaccine）或类毒素接种于人体，使机体主动产生特异性免疫力的过程，是一种防治微生物感染的措施，主要用于预防。常用人工自动免疫制剂有：死疫苗、活疫苗、亚单位疫苗、类毒素、DNA疫苗等,一、人工自动免疫,陈灵芝微生物教研室2009-3,传统疫苗1.灭活疫苗2.减毒活疫苗,FigEdwardJennervaccinating(inoculating)JamesPhippswithcowpoxmaterial.,现代疫苗1.基因工程的疫苗2.核酸疫苗3.其他类型的疫苗：合成肽疫